缺氧性肺动脉高压大鼠内皮素的变化
作者：陈 霞 黄丽英 曾 强 李万镇
单位：100034北京医科大学第一临床医学院儿科[陈霞(研究生)、黄丽英、李万镇]，解放军总医院(曾 强)
关键词：内皮素类；血缺氧；肺动脉高压
中华医学杂志930705 摘要 通过常压缺氧建立肺动脉高压大鼠模型，采用放射免疫方法测定其血浆、肺组织内皮素(ET)及血浆心钠素(ANP)、血管紧张素Ⅱ(AⅡ)含量，以探讨ET、ANP与其他血管活性物质在缺氧性肺动脉高压发病中的作用与相互关系。实验结果证明：缺氧组大鼠肺动脉平均压(PAP)明显升高，血浆ET含量明显升高，血浆ET含量与脉动脉平均压之间存在明显的正相关。血浆ANP含量明显升高，血浆ET与ANP含量存在显著正相关。
内皮素(Endothelin,ET)是日本Yanagi-sawa等〔1〕从猪的主动脉内皮细胞中分离钝化出的一种由21个氨基酸组成的生物活性肽，也是迄今所知体内最强的缩血管物质。主要分布于肺、肾、肾上腺、心脏、胃肠道、肺动脉等组织。我们应用常压缺氧性肺动脉高压大鼠模型记录肺动脉平均压，采用放射免疫测定技术测其血浆、肺组织ET及血浆心钠素(ANP)与血浆血管紧张素Ⅱ(AⅡ)含量。目的在于探讨内皮素与常压缺氧性肺动脉高压发病的关系。
, 百拇医药
材料与方法
成年雄性Sprague-Dawley大鼠30只，体重200～300g，分成缺氧性肺动脉高压组(n＝20)及正常对照组(n＝10)，两组的生活环境和饲养条件相同。
一、缺氧性肺动脉高压大鼠模型的建立
将缺氧组大鼠置于薛氏等〔2〕自制的常压缺氧舱内，舱内氧浓度为10±0.5%，二氧化碳浓度低于3%，每天6小时，共10天，建成常压缺氧性肺动脉高压大鼠模型。
二、大鼠肺动脉压力测定
用1%戊巴比妥，按40mg/kg行腹腔麻醉，麻醉后大鼠固定于手术台上，采用孙氏等〔3〕建立的测定大鼠肺动脉压力的右心导管法将导管从右颈外静脉插入右心室和肺动脉，导管的一端经P50压力传感器与上海医用仪器厂生产的SJ-41型多导生理仪相连，记录肺动脉压力曲线，测定肺动脉平均压。
, 百拇医药
三、标本留取与测定
从颈总动脉取血8ml分3管，分别留作ET及ANP、AⅡ的测定标本。最后开胸取肺组织称重后置于预冷的1mol/L醋酸(体重体积比1∶5)，经100℃水浴10分钟后，电动匀浆，匀浆液经4℃，12 000r/min离心20分钟后取上清，-70℃保存，溶化后按程序进行ET放射免疫测定。
应用解放军总医院提供的ET放射免疫药盒测定ET含量；应用中国同位素公司北方研究所提供的ANP放射免疫药盒测ANP含量，应用解放军海军总医院提供的AⅡ放射免疫药盒测定AⅡ含量。
实验数据采用t检验、直线相关分析等统计学处理。
结 果
一、缺氧组大鼠肺动脉压力、血浆ET、ANP、AⅡ及肺组织ET含量(附表)。
, http://www.100md.com
缺氧组大鼠肺动脉压力比对照组明显升高，P<0.001；缺氧组大鼠血浆ET水平较对照组明显升高，P<0.001；缺氧组大鼠血浆ANP水平亦较对照组明显升高，P<0.001；缺氧组大鼠血浆AⅡ水平与对照组比较差异无显著意义，P>0.05，肺组织ET含量与对照组比差异不显著，P>0.05。
附表 两组大鼠PAP、血浆ET、ANP、AⅡ及肺组织ET含量(
±s) 组别
PAP(kPa)
ET(pg/m)
ANP(pg/m)
AII(pg/m)
肺组织ET(pg/m)
, 百拇医药
缺氧组
4.1±0.4
338±41
757±104
394±85
7.0±2.6
对照组
2.5±0.2
22±4
479±42
427±72
6.2±2.3
, 百拇医药 P
<0.001
<0.001
<0.001
>0.05
>0.05
二、血浆ET含量与肺动脉平均压的关系
血浆ET与肺动脉平均压呈正相关，见图1。
血浆ET(pg/ml)
图1 大鼠肺动脉压与血浆内皮素含量的相关性
, http://www.100md.com 三、血浆ET含量与血浆ANP含量的关系
血浆ET与ANP含量呈正相关，见图2。
血浆ET(pg/ml)
图2 血浆内皮素与心钠素含量的相关性
讨 论
一、缺氧性肺动脉高压ET的变化
缺氧性肺动脉高压是临床许多疾病发展过程中的重要病理状态，主要病理改变为肺血管收缩，肺动脉中层平滑肌增生〔4〕。最近的研究发现ET可以使离体的肺血管收缩〔4，5〕，刺激平滑肌增生〔6〕，增加肺血管阻力〔7，8〕。
, 百拇医药
本实验观察到缺氧形成肺动脉高压后血浆ET含量明显升高，且ET含量与肺动脉平均压呈显著正相关。表明在缺氧性肺动脉高压的形成中，ET可通过其强大的缩血管作用，使肺动脉收缩、刺激血管平滑肌增生，直接参与肺动脉高压的形成。有文献报道〔9〕急性缺氧大鼠肺组织ET含量升高，但在本实验中大鼠肺组织ET含量升高与对照组比差异无显著意义。
二、缺氧性肺动脉高压ET与其他血管活性物质(ANP、AⅡ)的相互关系
Fukuda等〔10〕报道在离体的心房肌培养液中，ET可引起心钠素剂量依赖性的释放。亦有文献报道〔11〕在离体的肺动脉内皮细胞培养液中，ET可刺激AⅠ转化为AⅡ。在本实验中，我们发现缺氧性肺动脉高压大鼠血浆ET升高同时，ANP含量也明显升高，并且血浆ET与ANP含量呈显著正相关，其因果关系尚不能确定。血浆AⅡ含量缺氧组与对照组比差异并无显著意义。可认为，ET在缺氧性肺动脉高压的形成中起着比较复杂的作用：一方面，通过直接收缩肺动脉，促进肺动脉高压形成。另一方面，ET升高同时ANP水平亦升高，后者对肺动脉高压的形成可能起有益的调节作用。
, 百拇医药
参考文献
1 Yanagisawa M,Kurihara H,Kimura S,et al.A novel po-tent vasoconstricor peptide produced by vasular endothelial cells.Nature,1988,332:411.
2 薛全福，谢鸣剑，胡长贵，等。常压缺氧性肺动脉高压大鼠模型的建立。中华结核和呼吸杂志。1989，1216：350.
3 孙 波，刘文利。右心导管法测定大鼠肺动脉高压的实验方法。中国医学科学院报，1984，616：465.
4 Stewart D J,Levy R D,Cernacek P,et al.Increased plasma endothelin-1 in pulmonary hypertention maker or mediator of disease.Ann Intern Med,1991,114:464.
, http://www.100md.com
5 Dubin P,Rratt R E,Dzau V J.Endothelin,a potent vasoconstrictor is a vasular smooth mitogen.J Vas Med Biol,1989;1:150.
6 Ryan U S,Glassberg M K,Nolop K B.Endothelin from pulmonary artery and microvessels acts on vasular and airway smoothe muscle.J Cardivasc Pharmacoi,1989,13:57.
7 Ohtsuka M,Vchccla Y,Saotoma M,et al.Endothelin ex-erts to human pulmonary artery as a vasoconstrictor in vitro.Am Rev Respir Pis,1989,139:57.
, 百拇医药
8 Lippton H L,Hauth T A,Summer W R,et al.Endothelin produces pulmonary vasocanstriction and and system vasodilation.J Appl Physiol,1989,66:1008.
9 Shirakami G,Nakao K,Saito Y,et al.Acute pulmonary alvelar hypoxia increase lung and plasma endothelin-1levels in conscious rats.Lif Sci,1991,48:969.
10 Fukuda Y,Hirata Y,Yoshimi H,et al.Endothelin is a potent secretgogue for atrial natriuretic peptide in cul-tured rat atrial myocytes.Biochem Biophys Res Commun,1988,145:167.
11 Kawaguchi H,Sawa H,Yasuda.Endothelin stimulates angiotensin I to angiotensin Ⅱ conversion in cultured pulmonary artery endothelial cells.J Mol Cell Cardiol,1990,22:843.
(收稿：1992-12-16 修回：1993-04-12), http://www.100md.com
单位：100034北京医科大学第一临床医学院儿科[陈霞(研究生)、黄丽英、李万镇]，解放军总医院(曾 强)
关键词：内皮素类；血缺氧；肺动脉高压
中华医学杂志930705 摘要 通过常压缺氧建立肺动脉高压大鼠模型，采用放射免疫方法测定其血浆、肺组织内皮素(ET)及血浆心钠素(ANP)、血管紧张素Ⅱ(AⅡ)含量，以探讨ET、ANP与其他血管活性物质在缺氧性肺动脉高压发病中的作用与相互关系。实验结果证明：缺氧组大鼠肺动脉平均压(PAP)明显升高，血浆ET含量明显升高，血浆ET含量与脉动脉平均压之间存在明显的正相关。血浆ANP含量明显升高，血浆ET与ANP含量存在显著正相关。
内皮素(Endothelin,ET)是日本Yanagi-sawa等〔1〕从猪的主动脉内皮细胞中分离钝化出的一种由21个氨基酸组成的生物活性肽，也是迄今所知体内最强的缩血管物质。主要分布于肺、肾、肾上腺、心脏、胃肠道、肺动脉等组织。我们应用常压缺氧性肺动脉高压大鼠模型记录肺动脉平均压，采用放射免疫测定技术测其血浆、肺组织ET及血浆心钠素(ANP)与血浆血管紧张素Ⅱ(AⅡ)含量。目的在于探讨内皮素与常压缺氧性肺动脉高压发病的关系。
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材料与方法
成年雄性Sprague-Dawley大鼠30只，体重200～300g，分成缺氧性肺动脉高压组(n＝20)及正常对照组(n＝10)，两组的生活环境和饲养条件相同。
一、缺氧性肺动脉高压大鼠模型的建立
将缺氧组大鼠置于薛氏等〔2〕自制的常压缺氧舱内，舱内氧浓度为10±0.5%，二氧化碳浓度低于3%，每天6小时，共10天，建成常压缺氧性肺动脉高压大鼠模型。
二、大鼠肺动脉压力测定
用1%戊巴比妥，按40mg/kg行腹腔麻醉，麻醉后大鼠固定于手术台上，采用孙氏等〔3〕建立的测定大鼠肺动脉压力的右心导管法将导管从右颈外静脉插入右心室和肺动脉，导管的一端经P50压力传感器与上海医用仪器厂生产的SJ-41型多导生理仪相连，记录肺动脉压力曲线，测定肺动脉平均压。
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三、标本留取与测定
从颈总动脉取血8ml分3管，分别留作ET及ANP、AⅡ的测定标本。最后开胸取肺组织称重后置于预冷的1mol/L醋酸(体重体积比1∶5)，经100℃水浴10分钟后，电动匀浆，匀浆液经4℃，12 000r/min离心20分钟后取上清，-70℃保存，溶化后按程序进行ET放射免疫测定。
应用解放军总医院提供的ET放射免疫药盒测定ET含量；应用中国同位素公司北方研究所提供的ANP放射免疫药盒测ANP含量，应用解放军海军总医院提供的AⅡ放射免疫药盒测定AⅡ含量。
实验数据采用t检验、直线相关分析等统计学处理。
结 果
一、缺氧组大鼠肺动脉压力、血浆ET、ANP、AⅡ及肺组织ET含量(附表)。
, http://www.100md.com
缺氧组大鼠肺动脉压力比对照组明显升高，P<0.001；缺氧组大鼠血浆ET水平较对照组明显升高，P<0.001；缺氧组大鼠血浆ANP水平亦较对照组明显升高，P<0.001；缺氧组大鼠血浆AⅡ水平与对照组比较差异无显著意义，P>0.05，肺组织ET含量与对照组比差异不显著，P>0.05。
附表 两组大鼠PAP、血浆ET、ANP、AⅡ及肺组织ET含量(
±s) 组别PAP(kPa)
ET(pg/m)
ANP(pg/m)
AII(pg/m)
肺组织ET(pg/m)
, 百拇医药
缺氧组
4.1±0.4
338±41
757±104
394±85
7.0±2.6
对照组
2.5±0.2
22±4
479±42
427±72
6.2±2.3
, 百拇医药 P
<0.001
<0.001
<0.001
>0.05
>0.05
二、血浆ET含量与肺动脉平均压的关系
血浆ET与肺动脉平均压呈正相关，见图1。
血浆ET(pg/ml)
图1 大鼠肺动脉压与血浆内皮素含量的相关性
, http://www.100md.com 三、血浆ET含量与血浆ANP含量的关系
血浆ET与ANP含量呈正相关，见图2。
血浆ET(pg/ml)
图2 血浆内皮素与心钠素含量的相关性
讨 论
一、缺氧性肺动脉高压ET的变化
缺氧性肺动脉高压是临床许多疾病发展过程中的重要病理状态，主要病理改变为肺血管收缩，肺动脉中层平滑肌增生〔4〕。最近的研究发现ET可以使离体的肺血管收缩〔4，5〕，刺激平滑肌增生〔6〕，增加肺血管阻力〔7，8〕。
, 百拇医药
本实验观察到缺氧形成肺动脉高压后血浆ET含量明显升高，且ET含量与肺动脉平均压呈显著正相关。表明在缺氧性肺动脉高压的形成中，ET可通过其强大的缩血管作用，使肺动脉收缩、刺激血管平滑肌增生，直接参与肺动脉高压的形成。有文献报道〔9〕急性缺氧大鼠肺组织ET含量升高，但在本实验中大鼠肺组织ET含量升高与对照组比差异无显著意义。
二、缺氧性肺动脉高压ET与其他血管活性物质(ANP、AⅡ)的相互关系
Fukuda等〔10〕报道在离体的心房肌培养液中，ET可引起心钠素剂量依赖性的释放。亦有文献报道〔11〕在离体的肺动脉内皮细胞培养液中，ET可刺激AⅠ转化为AⅡ。在本实验中，我们发现缺氧性肺动脉高压大鼠血浆ET升高同时，ANP含量也明显升高，并且血浆ET与ANP含量呈显著正相关，其因果关系尚不能确定。血浆AⅡ含量缺氧组与对照组比差异并无显著意义。可认为，ET在缺氧性肺动脉高压的形成中起着比较复杂的作用：一方面，通过直接收缩肺动脉，促进肺动脉高压形成。另一方面，ET升高同时ANP水平亦升高，后者对肺动脉高压的形成可能起有益的调节作用。
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参考文献
1 Yanagisawa M,Kurihara H,Kimura S,et al.A novel po-tent vasoconstricor peptide produced by vasular endothelial cells.Nature,1988,332:411.
2 薛全福，谢鸣剑，胡长贵，等。常压缺氧性肺动脉高压大鼠模型的建立。中华结核和呼吸杂志。1989，1216：350.
3 孙 波，刘文利。右心导管法测定大鼠肺动脉高压的实验方法。中国医学科学院报，1984，616：465.
4 Stewart D J,Levy R D,Cernacek P,et al.Increased plasma endothelin-1 in pulmonary hypertention maker or mediator of disease.Ann Intern Med,1991,114:464.
, http://www.100md.com
5 Dubin P,Rratt R E,Dzau V J.Endothelin,a potent vasoconstrictor is a vasular smooth mitogen.J Vas Med Biol,1989;1:150.
6 Ryan U S,Glassberg M K,Nolop K B.Endothelin from pulmonary artery and microvessels acts on vasular and airway smoothe muscle.J Cardivasc Pharmacoi,1989,13:57.
7 Ohtsuka M,Vchccla Y,Saotoma M,et al.Endothelin ex-erts to human pulmonary artery as a vasoconstrictor in vitro.Am Rev Respir Pis,1989,139:57.
, 百拇医药
8 Lippton H L,Hauth T A,Summer W R,et al.Endothelin produces pulmonary vasocanstriction and and system vasodilation.J Appl Physiol,1989,66:1008.
9 Shirakami G,Nakao K,Saito Y,et al.Acute pulmonary alvelar hypoxia increase lung and plasma endothelin-1levels in conscious rats.Lif Sci,1991,48:969.
10 Fukuda Y,Hirata Y,Yoshimi H,et al.Endothelin is a potent secretgogue for atrial natriuretic peptide in cul-tured rat atrial myocytes.Biochem Biophys Res Commun,1988,145:167.
11 Kawaguchi H,Sawa H,Yasuda.Endothelin stimulates angiotensin I to angiotensin Ⅱ conversion in cultured pulmonary artery endothelial cells.J Mol Cell Cardiol,1990,22:843.
(收稿：1992-12-16 修回：1993-04-12), http://www.100md.com