高效液相色谱法检测血浆儿茶酚胺及其临床应用
作者：苏 薇 林其燧 刘 茜
单位：100730北京协和医院中心实验室
关键词：
中华医学杂志930718 我室采用反相离子色谱法(HPLC-ECD)测定血浆儿茶酚胺(CA)，对50例患者CA测定结果的分析表明，该方法对于嗜铬细胞瘤(PCC)的诊断具有较高价值，介绍如下。
一、材料和方法
(一)试剂：去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(E)、多巴胺(DA)及3、4-二羟基苯胺(DHBA)为Sigma产品，碱性氧化铝70-325目为上海五四农场化学试剂厂产品；辛烷磺酸钠(PicB8)为天津化学试剂二厂产品；二正丁胺为化学钝，北京朝阳西会化工厂产品。
(二)仪器：M510往复泵、M460电化学检测器及U6K进样器为日本Waters公司产品；C18反相色谱柱，30cm×5.0mm粒度10μm为北京分析仪器厂产品，康氏振荡器为北京通县医疗器械厂产品；涡旋混合器为江西医疗器械厂产品。
, http://www.100md.com
(三)方法：
1.血浆的收集和保存：患者于血压升高时平卧取静脉血6ml，置于含0.2mol/L pH5.0枸橼酸缓冲液0.5ml的小瓶中，混匀，3 000r/min离心5分钟，血浆立即放-20℃冰箱保存，若在2周内不能测定，应置-80℃冰箱保存。
2.提取步骤：(1)吸附：称取100mg活化碱性氧化铝[J Pharmacol Exp Ther,1962,]于5ml离心管中，加待测血浆2ml，加入0.2mol/L pH8.5 Tris-HCl缓冲液1ml(含内标DHBA2μg/L)，在振荡器上混合5分钟，使CA充分吸附在氧化铝上，静置1分钟后弃去上层液体；(2)清洗：氧化铝沉淀用纯水洗3次，弃去上清，用滤纸条吸干剩余水；(3)洗脱：加0.2mol/L高氯酸溶液100μl，在混合器上快速连续混合5分钟，然后2 500r/min离心2分钟，取上清50μl进样。
3.色谱条件：(1)流动相：25mmol/L柠檬酸缓冲液，1.7mmol/L辛烷磺酸钠(PicB8)，0.5mmol/L二正丁胺，pH3.9～4.0，水：甲醇＝98∶2；(2)仪器设置：工作电压：+0.75V，测定范围：0.1nA，噪音滤过：5s，流速：lml/min，笔录仪满刻度量程：10mV，纸速：30cm/h。
, 百拇医药
二、结果
1.本方法测定NE、E、DHBA及DA均能达到基线分离，分离度均大于2，低值E、DA(100ng/L)批间变异系数(CV)稍高(10.0%～11.1%)，其它CV值均小于10%，回收率100%～109%，线性范围NE为0～6.0μg/L，E为0～6.4μg/L，DA为0～3.9μg/L，与国外报道相近[J Chromatol,1982,132:141]。
2.临床应用：本实验测定了18例PCC，26例原发性高血压、3例原发性醛固酮增多症，3例肾性高血压患者以及15例正常人，测定结果见附表。
附表 50例病人及正常人CA测定结果(
±s，μg/L) 诊断
例数
, http://www.100md.com
NE
E
正常人
15
0.26±0.01
0.09±0.01
嗜铬细胞瘤
18
3.77±2.98
0.03～6.20
原发性高血压
26
0.32±0.16
, 百拇医药
0.1±0.06
原发性醛固酮增多症
3
0.53±0.11
0.07±0.03
肾性高血压
3
0.6±0.39
0.15±0.12
*嗜铬细胞瘤病人E值变化范围很大，只能以测定值范围表示
三、讨论
用氧化铝吸附法提取血浆CA，仍是目前为止较好的方法。本组结果表明：原发性高血压和各型继发性高血压患者NE均有不同程度的升高，其中PCC患者升高幅度是显高于其他高血压患者，平均为正常人的14倍。因此，血浆CA是PCC诊断的重要指标，其诊断效率NE的敏感性和阴性预测值很高，均为100%，而其阳性预测值和特异性较低(分别为53%和49%)；E和DA特异性很高(分别为81%和92%)，但敏感性和阳性、阴性预测值均较低。NE阳性预测值和特异性低的主要原因是其它高血压患者一般血浆NE也升高。根据我们测定的18例经手证实为PCC患者的血浆NE升高的幅度，将诊断低限值定为1 000ng/L，则阳性预测值为86%，特异性为95%，敏感性为80%，阴性预测率为92%。因此，应确定一个合理的诊断低限。在18例PCC患者中，仅有4例E值异常升高，可能大部分NE未经甲基化转变为E或苯乙醇胺-N-转甲基酶(PNMT)活性并不随NE分泌的增多而升高，因此E值对PCC诊断意义不大。
(收稿：1993-01-15 修回：1993-04-22), http://www.100md.com
单位：100730北京协和医院中心实验室
关键词：
中华医学杂志930718 我室采用反相离子色谱法(HPLC-ECD)测定血浆儿茶酚胺(CA)，对50例患者CA测定结果的分析表明，该方法对于嗜铬细胞瘤(PCC)的诊断具有较高价值，介绍如下。
一、材料和方法
(一)试剂：去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(E)、多巴胺(DA)及3、4-二羟基苯胺(DHBA)为Sigma产品，碱性氧化铝70-325目为上海五四农场化学试剂厂产品；辛烷磺酸钠(PicB8)为天津化学试剂二厂产品；二正丁胺为化学钝，北京朝阳西会化工厂产品。
(二)仪器：M510往复泵、M460电化学检测器及U6K进样器为日本Waters公司产品；C18反相色谱柱，30cm×5.0mm粒度10μm为北京分析仪器厂产品，康氏振荡器为北京通县医疗器械厂产品；涡旋混合器为江西医疗器械厂产品。
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(三)方法：
1.血浆的收集和保存：患者于血压升高时平卧取静脉血6ml，置于含0.2mol/L pH5.0枸橼酸缓冲液0.5ml的小瓶中，混匀，3 000r/min离心5分钟，血浆立即放-20℃冰箱保存，若在2周内不能测定，应置-80℃冰箱保存。
2.提取步骤：(1)吸附：称取100mg活化碱性氧化铝[J Pharmacol Exp Ther,1962,]于5ml离心管中，加待测血浆2ml，加入0.2mol/L pH8.5 Tris-HCl缓冲液1ml(含内标DHBA2μg/L)，在振荡器上混合5分钟，使CA充分吸附在氧化铝上，静置1分钟后弃去上层液体；(2)清洗：氧化铝沉淀用纯水洗3次，弃去上清，用滤纸条吸干剩余水；(3)洗脱：加0.2mol/L高氯酸溶液100μl，在混合器上快速连续混合5分钟，然后2 500r/min离心2分钟，取上清50μl进样。
3.色谱条件：(1)流动相：25mmol/L柠檬酸缓冲液，1.7mmol/L辛烷磺酸钠(PicB8)，0.5mmol/L二正丁胺，pH3.9～4.0，水：甲醇＝98∶2；(2)仪器设置：工作电压：+0.75V，测定范围：0.1nA，噪音滤过：5s，流速：lml/min，笔录仪满刻度量程：10mV，纸速：30cm/h。
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二、结果
1.本方法测定NE、E、DHBA及DA均能达到基线分离，分离度均大于2，低值E、DA(100ng/L)批间变异系数(CV)稍高(10.0%～11.1%)，其它CV值均小于10%，回收率100%～109%，线性范围NE为0～6.0μg/L，E为0～6.4μg/L，DA为0～3.9μg/L，与国外报道相近[J Chromatol,1982,132:141]。
2.临床应用：本实验测定了18例PCC，26例原发性高血压、3例原发性醛固酮增多症，3例肾性高血压患者以及15例正常人，测定结果见附表。
附表 50例病人及正常人CA测定结果(
±s，μg/L) 诊断例数
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NE
E
正常人
15
0.26±0.01
0.09±0.01
嗜铬细胞瘤
18
3.77±2.98
0.03～6.20
原发性高血压
26
0.32±0.16
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0.1±0.06
原发性醛固酮增多症
3
0.53±0.11
0.07±0.03
肾性高血压
3
0.6±0.39
0.15±0.12
*嗜铬细胞瘤病人E值变化范围很大，只能以测定值范围表示
三、讨论
用氧化铝吸附法提取血浆CA，仍是目前为止较好的方法。本组结果表明：原发性高血压和各型继发性高血压患者NE均有不同程度的升高，其中PCC患者升高幅度是显高于其他高血压患者，平均为正常人的14倍。因此，血浆CA是PCC诊断的重要指标，其诊断效率NE的敏感性和阴性预测值很高，均为100%，而其阳性预测值和特异性较低(分别为53%和49%)；E和DA特异性很高(分别为81%和92%)，但敏感性和阳性、阴性预测值均较低。NE阳性预测值和特异性低的主要原因是其它高血压患者一般血浆NE也升高。根据我们测定的18例经手证实为PCC患者的血浆NE升高的幅度，将诊断低限值定为1 000ng/L，则阳性预测值为86%，特异性为95%，敏感性为80%，阴性预测率为92%。因此，应确定一个合理的诊断低限。在18例PCC患者中，仅有4例E值异常升高，可能大部分NE未经甲基化转变为E或苯乙醇胺-N-转甲基酶(PNMT)活性并不随NE分泌的增多而升高，因此E值对PCC诊断意义不大。
(收稿：1993-01-15 修回：1993-04-22), http://www.100md.com