川芎嗪和羟基脲对阿霉素 K562 细胞株DNA 合成的影响
作者：谢佐福 沈世仁
单位：350014 福州 福建省肿瘤医院放射生物研究室
关键词：
中华医学杂志930919 采用3H-TdR掺入、液闪计数技术，研究川芎嗪〔1〕单独或与羟基脲联合应用对阿霉素敏感性 K562 (K562/S)和阿霉素耐受性 K562(K562/ADM)细胞株 DNA 合成的影响。
一、材料和方法
1.细胞株及其培养：K562/S细胞株，中国科学院上海细胞生物研究所提供，RPMI1640培养基辅以15%胎牛血清、100U/ml链霉素培养。K562/ADM细胞株由我室建立〔2〕，在上述培养液中加入耐受剂量的、终浓度 3.8μg/ml 阿霉素加以支持，培养条件为37℃，5%CO2。
, 百拇医药
2.主要仪器及试剂：F-J-2115自动液闪计数器，国营二六二厂生产；川芎嗪，广东利民制药厂惠赠；羟基脲，Sigma 公司产品；阿霉素，意大利生产；3H-TdR，中国科学院原子能研究所产品。K562/ADM 细胞，不论处理组或对照组，均加终浓度3.8μg/ml的阿霉素。
3.3H-TdR 掺入、液闪计数：收集指数生长期细胞，接种于96孔培养板，加试剂后孵育2小时；加2μCi/ml 3H-TdR，孵育3小时。细胞收集于滤纸条上，蒸馏水洗涤，5%三氯醋酸固定，95%酒精脱色。滤纸条干燥后置入含 5ml 闪烁液的闪烁杯中，用液闪计数器测定比放射活性(cpm/104细胞)。每组4个复孔，重复 3 次实验，取平均数。以(对照组cpm/处理组 cpm)对照组 cmp(%)作为 DNA 合成抑制率。
二、结果
1.羟基脲对 K562/S 和 K562/ADM 细胞 DNA 合成的影响：羟基脲对 K562/S 和 K562/ADM 细胞 DNA 合成具有显著抑制作用，并用剂量依赖性。羟基脲在 5～40μmol/L时，抑制率分别为 21%～56%和 51%～74%，两者差异非常显著(P<0.01)。
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2.川芎嗪对 K562/S 和 K562/ADM 细胞 DNA 合成的影响：川芎嗪对 K562/S 和 K562/ADM 细胞 DNA 合成抑制作用很小，即使在 100μg/ml时，抑制率仅 9.9%。川芎嗪能轻度增强 K562/ADM 细胞对阿霉素的敏感性，在 3.8μg/ml 的阿霉素存在时，川芎嗪处理后的 K562/ADM 细胞，其 DNA 合成抑制率虽只有 0.11%～19%，但却比川芎嗪处理后的 K562/S 细胞高 0.002%～10%(P<0.01)。
3.川芎嗪与羟基脲联合应用对 K562/S 和 K562/ADM 细胞 NDA 合成的影响：1～100μg/ml的川芎嗪与 10μmol/L 羟基脲联合应用，比单用同浓度的羟基脲或同浓度的川芎嗪更能抑制 K562/S 和 K562/ADM 细胞的 DNA 合成，DNA 合成抑制率在 K562/S 细胞分别提高了21%～33%和53%～55%；在 K562/ADM 细胞则分别提高 18%～24%和75.9%～63%。
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三、讨论
本实验结果表明：川芎嗪单独应用时能轻度抑制 K562/S 细胞 DNA 合成，显著增强 K562/ADM 对阿霉素的敏感性。此作用除与其本身的细胞毒作用有关外，可能还与P-糖蛋白有关。据研究，K562/S 细胞不表达P-糖蛋白，K562/ADM 细胞高表达P-糖蛋白〔3〕。另一种钙通道阻滞剂维拉帕米，能显著增强 K562/ADM 细胞对阿霉素等抗癌药的敏感性，其增强作用与其跟抗癌剂竞争性结合P-糖蛋白，阻止抗癌剂流出细胞有关〔4〕。实验结果还表明，核苷酸还原酶抑制羟基脲能显著抑制 K562/S 和 K562/ADM 细胞 DNA 合成，而川芎嗪能显著增强羟基脲的这种抑制作用。我们推测，川芎嗪可能具有协同抑制核苷酸还原酶的作用。
参考文献
1 陈新谦，金有豫主编.新编药物学.北京：人民卫生出版社，1992.237-238.
, 百拇医药
2 沈世仁，苏 颖，黄秀清，等.K562/ADM 耐药细胞株的建立及其生物学特性的初步观察.癌症，1992,11∶222.
3 Solary E,Velay I,Bidan JM,et al.Sufficient levels of quinin in the serum cirumvent the multidrug resistance of the human leukemic cell line K562/ADM.Cancer,1991,68∶1717.
4 Yusa K,Tsuruo T.Reversal mechanism of multi drug resistance by verapamil:direct binding of verapamil to P-glycoprotein on specific sites and transport of verapamil outward across the plasm membrane of K562/ADM cells.Cancer Res,1989,49∶5002.
(收稿：1993-01-03 修回：1993-06-07), 百拇医药
单位：350014 福州 福建省肿瘤医院放射生物研究室
关键词：
中华医学杂志930919 采用3H-TdR掺入、液闪计数技术，研究川芎嗪〔1〕单独或与羟基脲联合应用对阿霉素敏感性 K562 (K562/S)和阿霉素耐受性 K562(K562/ADM)细胞株 DNA 合成的影响。
一、材料和方法
1.细胞株及其培养：K562/S细胞株，中国科学院上海细胞生物研究所提供，RPMI1640培养基辅以15%胎牛血清、100U/ml链霉素培养。K562/ADM细胞株由我室建立〔2〕，在上述培养液中加入耐受剂量的、终浓度 3.8μg/ml 阿霉素加以支持，培养条件为37℃，5%CO2。
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2.主要仪器及试剂：F-J-2115自动液闪计数器，国营二六二厂生产；川芎嗪，广东利民制药厂惠赠；羟基脲，Sigma 公司产品；阿霉素，意大利生产；3H-TdR，中国科学院原子能研究所产品。K562/ADM 细胞，不论处理组或对照组，均加终浓度3.8μg/ml的阿霉素。
3.3H-TdR 掺入、液闪计数：收集指数生长期细胞，接种于96孔培养板，加试剂后孵育2小时；加2μCi/ml 3H-TdR，孵育3小时。细胞收集于滤纸条上，蒸馏水洗涤，5%三氯醋酸固定，95%酒精脱色。滤纸条干燥后置入含 5ml 闪烁液的闪烁杯中，用液闪计数器测定比放射活性(cpm/104细胞)。每组4个复孔，重复 3 次实验，取平均数。以(对照组cpm/处理组 cpm)对照组 cmp(%)作为 DNA 合成抑制率。
二、结果
1.羟基脲对 K562/S 和 K562/ADM 细胞 DNA 合成的影响：羟基脲对 K562/S 和 K562/ADM 细胞 DNA 合成具有显著抑制作用，并用剂量依赖性。羟基脲在 5～40μmol/L时，抑制率分别为 21%～56%和 51%～74%，两者差异非常显著(P<0.01)。
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2.川芎嗪对 K562/S 和 K562/ADM 细胞 DNA 合成的影响：川芎嗪对 K562/S 和 K562/ADM 细胞 DNA 合成抑制作用很小，即使在 100μg/ml时，抑制率仅 9.9%。川芎嗪能轻度增强 K562/ADM 细胞对阿霉素的敏感性，在 3.8μg/ml 的阿霉素存在时，川芎嗪处理后的 K562/ADM 细胞，其 DNA 合成抑制率虽只有 0.11%～19%，但却比川芎嗪处理后的 K562/S 细胞高 0.002%～10%(P<0.01)。
3.川芎嗪与羟基脲联合应用对 K562/S 和 K562/ADM 细胞 NDA 合成的影响：1～100μg/ml的川芎嗪与 10μmol/L 羟基脲联合应用，比单用同浓度的羟基脲或同浓度的川芎嗪更能抑制 K562/S 和 K562/ADM 细胞的 DNA 合成，DNA 合成抑制率在 K562/S 细胞分别提高了21%～33%和53%～55%；在 K562/ADM 细胞则分别提高 18%～24%和75.9%～63%。
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三、讨论
本实验结果表明：川芎嗪单独应用时能轻度抑制 K562/S 细胞 DNA 合成，显著增强 K562/ADM 对阿霉素的敏感性。此作用除与其本身的细胞毒作用有关外，可能还与P-糖蛋白有关。据研究，K562/S 细胞不表达P-糖蛋白，K562/ADM 细胞高表达P-糖蛋白〔3〕。另一种钙通道阻滞剂维拉帕米，能显著增强 K562/ADM 细胞对阿霉素等抗癌药的敏感性，其增强作用与其跟抗癌剂竞争性结合P-糖蛋白，阻止抗癌剂流出细胞有关〔4〕。实验结果还表明，核苷酸还原酶抑制羟基脲能显著抑制 K562/S 和 K562/ADM 细胞 DNA 合成，而川芎嗪能显著增强羟基脲的这种抑制作用。我们推测，川芎嗪可能具有协同抑制核苷酸还原酶的作用。
参考文献
1 陈新谦，金有豫主编.新编药物学.北京：人民卫生出版社，1992.237-238.
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2 沈世仁，苏 颖，黄秀清，等.K562/ADM 耐药细胞株的建立及其生物学特性的初步观察.癌症，1992,11∶222.
3 Solary E,Velay I,Bidan JM,et al.Sufficient levels of quinin in the serum cirumvent the multidrug resistance of the human leukemic cell line K562/ADM.Cancer,1991,68∶1717.
4 Yusa K,Tsuruo T.Reversal mechanism of multi drug resistance by verapamil:direct binding of verapamil to P-glycoprotein on specific sites and transport of verapamil outward across the plasm membrane of K562/ADM cells.Cancer Res,1989,49∶5002.
(收稿：1993-01-03 修回：1993-06-07), 百拇医药