糖尿病病人12-羟花生四烯酸与血小板功能关系的初步探讨
作者：李延兵 余斌杰 梁奕铨
单位：510080 广州市中山医科大学附属第一医院内分泌科(李延兵为研究生)
关键词：
中华医学杂志930916 糖尿病微血管病变的发病机理与血小板花生四烯酸(AA)代谢异常、血小板功能亢进有关〔1，2〕。AA代谢异常中有关环氧化酶代谢途径的研究已有报道〔2，3〕，但对脂氧化酶代谢途径及其代谢产物12-过氧化羟-花生四烯酸(12-HPETE)和12-羟花生四烯酸(12-HETE)的研究报道尚少。为此，我们对30例糖尿病病人进行了研究，以探讨其在微血管病变发病机理中的作用。
一、对象和方法
1.对象：糖尿病组 30例(IDDM 10例， NIDDM 20例)，均按 WHO 标准诊断。其中男1例，女19例，年龄47.5±2.5岁(
±s，下同)。无血栓性疾病和出凝血疾病，并根据是否合并视网膜病变和(或)肾病变分为微血管病变组(病变组)、无微血管病变组(无病变组)。正常对照组19例，男7例，女12例，年龄48.3±2.9岁，经口服葡萄糖耐量试验平常正常，无出凝血疾病。
, 百拇医药
2.方法：受试者于试验前 2 周停用影响血小板功能药物，口服降糖药治疗者改用胰岛素。空腹抽血，2%依地酸抗凝，制备血小板悬浮液〔2〕。分别加入凝血酶、胶原、花生四烯酸等不同作用的血小板诱导剂，用PAM-Ⅱ型血小板聚集仪测定5分钟血小板最大聚集率(MAR)，随即加入等量甲醇/乙腈(V/V=0.5/0.5)终止反应。2 500×g离心 10分钟，取上清液分别进行 12-HETE(反映 12-HPETE)、血栓素 B2(TXB2，反映 TXA2)测定。12-HETE 测定采用高效液相色谱法〔4〕。TXB2测定用放射免疫分析法(药盒由中国人民解放军总医院提供)。受试者同时测定空腹血糖、糖基血红蛋白A1(GHbA1)、血清胆固醇和甘油三酯。所用玻璃器皿均经硅化。
二、结果
1.不同诱导剂作用下血小板 12-HETE、TXB2生成结果见表1。糖尿病组血小板在凝血酶、胶原诱导下生成的 12-HETE、TXB2均明显高于正常对照组；在AA诱导下，12-HETE生成亦高于正常对照组，但TXB2生成与正常对照组比较则无明显差异。
, http://www.100md.com
表1 不同诱导剂作用下血小板 12-HETE、TXB2生成(ng/108血小板，±s-x)情况 组 别
例数
凝血酶
胶原
AA
12-HETE
TXB2
12-HETE
TXB2
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12-HETE
TXB2
糖尿病组
30
264±18*
24.9±2.1*
243±20*
17.8±1.2*
1842±60**
727±51
病变组
, 百拇医药
13
269±29*
23.6±2.8**
251±29*
17.4±1.8*
1874±101**
681±73
无病变组
17
259±24*
25.9±3.1**
, http://www.100md.com
236±28*
18.1±1.8*
1818±76
762±73
正常对照组
19
186±14
15.2±2.8
147±12
10.0±1.4
1649±54
750±68
, 百拇医药
注：与正常对照组比较 *P<0.01，**P<0.05
2.糖尿病病人血小板 12-HETE/TXB2比值与血小板聚集的关系见表2。无论诱导剂为凝血酶、胶原或 AA，12-HETE/TXB2比值均随血小板 MAR升高而降低，两者呈明显负相关。凝血酶、胶原和AA为诱导剂时的r值分别为-0.486、-0.390和-0.427，P均<0.05。提示 12-HETE 增高或 TXB2 减少均可对血小板聚集起抑制作用。
表2 糖尿病患者血小板聚集与 12-HETE/TXB2比值(±s-x) 组别
MAR(%)
, 百拇医药
12-HETE/TXB2比值
凝血酶
胶原
AA
凝血酶
胶原
AA
低凝集组
64.9±3.2
(n=7)
17.3±2.0
(n=11)
, 百拇医药 11.3±1.0
(n=12)
13.8±1.7
(n=7)
20.7±3.7
(n=11)
4.0±0.6
(n=12)
中凝集组
82.0±0.5
(n=8)
37.4±2.0
, http://www.100md.com
(n=6)
23.4±1.5
(n=7)
12.5±2.0
(n=8)
13.5±1.4
(n=6)
2.4±0.3
(n=7)
高凝集组
92.6±1.2(n=11)
64.7±4.0
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(n=9)
47.8±3.5
(n=7)
8.0±0.8
(n=11)
11.9±1.8
(n=9)
2.0±0.1
(n=7)
三、讨论
1.糖尿病微血管病变组与无微血管病变组血小板12-HETE、TXB2生成均较正常对照组为高，而病变组与无病变组比较则无明显差异(表1)。提示，TXB2、12-HETE 生成增多，这是血小板膜磷脂酶和脂氧化酶活性增高的结果，在临床未有微血管病变前即已存在，而环氧化酶和 TXA2 合成酶则无大改变，与文献〔2，3〕报道一致。膜磷脂酶活性增高，TXA2(由TXB2反映)生成增多，可能为糖尿病微血管病变发病机理之一，而脂氧化酶活性增高、12-HETE 生成增多可能是一种代偿机制。
, 百拇医药
2.本组糖尿病病人血小板 12-HETE、TXB2生成与空腹血糖、GHbA1、血清胆固醇和甘油三酯水平无明显相关(P>0.05)。提示当糖尿病病人其病情得到良好控制，而TXB2生成仍增多时，使用血小板环氧化酶及(或)TXA2合成酶抑制剂，是否对防治微血管病变的发生、发展有利，值得进一步研究。
参考文献
1 Colwell JA,Winocour PD,Halushka PV.Do platelets have anything to do with diabetic microvascular disease? Diabetes,1983,32[Suppl 2]∶14.
2 Chen SY,Yu BJ,Liang YQ,et al. Platelet aggregation,platelet cAMP levels and thromboxane B2 synthesis in patients with diabetes mellitus.Chin Med J,1990,103∶312.
, 百拇医药
3 Takahashi R,Shiraki M,Morita I,et al.Platelet thromboxane synthesizing activity in non-insulin-depen-dent diabetes:correlation with diabetic retinopathy and diabetic treatment.Prostaglandins Leukotrienes Med 1985,17∶149.
4 王兆钺.血小板花生四烯酸代谢产物的高效液相色谱分析.见：阮长耿主编.血小板基础与临床.上海科学技术出版社，1987.355.
(收稿：1992-11-16 修回：1993-06-01), 百拇医药
单位：510080 广州市中山医科大学附属第一医院内分泌科(李延兵为研究生)
关键词：
中华医学杂志930916 糖尿病微血管病变的发病机理与血小板花生四烯酸(AA)代谢异常、血小板功能亢进有关〔1，2〕。AA代谢异常中有关环氧化酶代谢途径的研究已有报道〔2，3〕，但对脂氧化酶代谢途径及其代谢产物12-过氧化羟-花生四烯酸(12-HPETE)和12-羟花生四烯酸(12-HETE)的研究报道尚少。为此，我们对30例糖尿病病人进行了研究，以探讨其在微血管病变发病机理中的作用。
一、对象和方法
1.对象：糖尿病组 30例(IDDM 10例， NIDDM 20例)，均按 WHO 标准诊断。其中男1例，女19例，年龄47.5±2.5岁(
±s，下同)。无血栓性疾病和出凝血疾病，并根据是否合并视网膜病变和(或)肾病变分为微血管病变组(病变组)、无微血管病变组(无病变组)。正常对照组19例，男7例，女12例，年龄48.3±2.9岁，经口服葡萄糖耐量试验平常正常，无出凝血疾病。, 百拇医药
2.方法：受试者于试验前 2 周停用影响血小板功能药物，口服降糖药治疗者改用胰岛素。空腹抽血，2%依地酸抗凝，制备血小板悬浮液〔2〕。分别加入凝血酶、胶原、花生四烯酸等不同作用的血小板诱导剂，用PAM-Ⅱ型血小板聚集仪测定5分钟血小板最大聚集率(MAR)，随即加入等量甲醇/乙腈(V/V=0.5/0.5)终止反应。2 500×g离心 10分钟，取上清液分别进行 12-HETE(反映 12-HPETE)、血栓素 B2(TXB2，反映 TXA2)测定。12-HETE 测定采用高效液相色谱法〔4〕。TXB2测定用放射免疫分析法(药盒由中国人民解放军总医院提供)。受试者同时测定空腹血糖、糖基血红蛋白A1(GHbA1)、血清胆固醇和甘油三酯。所用玻璃器皿均经硅化。
二、结果
1.不同诱导剂作用下血小板 12-HETE、TXB2生成结果见表1。糖尿病组血小板在凝血酶、胶原诱导下生成的 12-HETE、TXB2均明显高于正常对照组；在AA诱导下，12-HETE生成亦高于正常对照组，但TXB2生成与正常对照组比较则无明显差异。
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表1 不同诱导剂作用下血小板 12-HETE、TXB2生成(ng/108血小板，
±s-x)情况 组 别例数
凝血酶
胶原
AA
12-HETE
TXB2
12-HETE
TXB2
, http://www.100md.com
12-HETE
TXB2
糖尿病组
30
264±18*
24.9±2.1*
243±20*
17.8±1.2*
1842±60**
727±51
病变组
, 百拇医药
13
269±29*
23.6±2.8**
251±29*
17.4±1.8*
1874±101**
681±73
无病变组
17
259±24*
25.9±3.1**
, http://www.100md.com
236±28*
18.1±1.8*
1818±76
762±73
正常对照组
19
186±14
15.2±2.8
147±12
10.0±1.4
1649±54
750±68
, 百拇医药
注：与正常对照组比较 *P<0.01，**P<0.05
2.糖尿病病人血小板 12-HETE/TXB2比值与血小板聚集的关系见表2。无论诱导剂为凝血酶、胶原或 AA，12-HETE/TXB2比值均随血小板 MAR升高而降低，两者呈明显负相关。凝血酶、胶原和AA为诱导剂时的r值分别为-0.486、-0.390和-0.427，P均<0.05。提示 12-HETE 增高或 TXB2 减少均可对血小板聚集起抑制作用。
表2 糖尿病患者血小板聚集与 12-HETE/TXB2比值(
±s-x) 组别MAR(%)
, 百拇医药
12-HETE/TXB2比值
凝血酶
胶原
AA
凝血酶
胶原
AA
低凝集组
64.9±3.2
(n=7)
17.3±2.0
(n=11)
, 百拇医药 11.3±1.0
(n=12)
13.8±1.7
(n=7)
20.7±3.7
(n=11)
4.0±0.6
(n=12)
中凝集组
82.0±0.5
(n=8)
37.4±2.0
, http://www.100md.com
(n=6)
23.4±1.5
(n=7)
12.5±2.0
(n=8)
13.5±1.4
(n=6)
2.4±0.3
(n=7)
高凝集组
92.6±1.2(n=11)
64.7±4.0
, http://www.100md.com
(n=9)
47.8±3.5
(n=7)
8.0±0.8
(n=11)
11.9±1.8
(n=9)
2.0±0.1
(n=7)
三、讨论
1.糖尿病微血管病变组与无微血管病变组血小板12-HETE、TXB2生成均较正常对照组为高，而病变组与无病变组比较则无明显差异(表1)。提示，TXB2、12-HETE 生成增多，这是血小板膜磷脂酶和脂氧化酶活性增高的结果，在临床未有微血管病变前即已存在，而环氧化酶和 TXA2 合成酶则无大改变，与文献〔2，3〕报道一致。膜磷脂酶活性增高，TXA2(由TXB2反映)生成增多，可能为糖尿病微血管病变发病机理之一，而脂氧化酶活性增高、12-HETE 生成增多可能是一种代偿机制。
, 百拇医药
2.本组糖尿病病人血小板 12-HETE、TXB2生成与空腹血糖、GHbA1、血清胆固醇和甘油三酯水平无明显相关(P>0.05)。提示当糖尿病病人其病情得到良好控制，而TXB2生成仍增多时，使用血小板环氧化酶及(或)TXA2合成酶抑制剂，是否对防治微血管病变的发生、发展有利，值得进一步研究。
参考文献
1 Colwell JA,Winocour PD,Halushka PV.Do platelets have anything to do with diabetic microvascular disease? Diabetes,1983,32[Suppl 2]∶14.
2 Chen SY,Yu BJ,Liang YQ,et al. Platelet aggregation,platelet cAMP levels and thromboxane B2 synthesis in patients with diabetes mellitus.Chin Med J,1990,103∶312.
, 百拇医药
3 Takahashi R,Shiraki M,Morita I,et al.Platelet thromboxane synthesizing activity in non-insulin-depen-dent diabetes:correlation with diabetic retinopathy and diabetic treatment.Prostaglandins Leukotrienes Med 1985,17∶149.
4 王兆钺.血小板花生四烯酸代谢产物的高效液相色谱分析.见：阮长耿主编.血小板基础与临床.上海科学技术出版社，1987.355.
(收稿：1992-11-16 修回：1993-06-01), 百拇医药