狼疮性肾炎患者尿内白细胞介素2受体和免疫球蛋白自由轻链的观察
作者：凌衫洪 叶任高 李幼姬 张道友
单位：510080 广州中山医科大学肾脏研究所(凌衫洪现在桂林医学肾内科)
关键词：狼疮性肾炎；受体，白细胞介素2；免疫球蛋白类，轻链
中华医学杂志931232 摘要 对 30 例狼疮性肾炎(LN)病人尿中可溶性白细胞介素2受体(sIL-2R)和免疫球蛋白自由轻链(FICI)进行检测。发现LN活动组的sIL-2R平均值为160±108U/ml，明显高于LN非活动组(92±23U/ml，P<0.05)和正常对照组(85±19U/ml，P<0.01)；LN活动组尿FLCI的阳性率(77%)亦明显高于LN非活动组15%，P<0.01)。提示尿液中sIL-2R和FLCI的增多是LN活动的早期、可靠指标。
狼疮性肾炎(LN)的发病机理与浸润于肾小球内的T和B淋巴细胞、单核细胞和多形核细胞的活动异常有关[1]。近年发现 LN 活动时上述免疫活性细胞产生和释放的可溶性白细胞介素2受体(sIL-2R)和免疫球蛋白自由轻链(FLCI)增多[2，3]。为了解LN病人尿中sIL-2R和FLCI水平变化与疾病活动的关系，我们作了如下研究。
, http://www.100md.com
对象和方法
1.对象：30例 LN 患者，男3例，女27例，年龄15～54岁，平均31.6岁。均按1982年美国风湿病学会修定的诊断标准并按肾穿刺病理检查结果分型[1]。病例均曾接受了糖皮质激素和环磷酰胺等治疗[4]。
根据研究开始时的临床和实验室检查结果(表1)，将病人分为LN活动与非活动两组，以后每1～2周复查，连续3个月以上观察其病情变化。判断LN活动的依据是[1]：24小时尿蛋白增加并超过原水平的1倍以上；尿沉渣检查红细胞≥5个/高倍视野，伴有各种管型出现；血清肌酐(SCr)在原来水平上升高≥35μmol/L；病理检查肾脏有活动性损害。判断LN活动控制的依据是：尿蛋白定量减少50%以上；尿沉渣检查恢复正常；SCr较原水平降低>35μmol/L维持超过1个月。
表1 两组LN病人临床实验室检查结果x±s 组别
, 百拇医药
例数
尿蛋白(g/24h)
SCr(μmol/L)
高倍镜尿沉渣检查(例数)
C3(g/L)
C4(g/L)
CH50(kU/L)
ANA(+)例数
抗ds-DNA(+)例数
RBC≥5
WBC≥5
, 百拇医药
管型≥5
LN非活动组
13
0.5±0.6
94±57
0
2
1
1.1±0.7
0.40±0.30
70±32
9
0
, 百拇医药
LN活动组
17
2.6±1.9*
119±89
10*
5
10*
0.9±0.5
0.33±0.22
53±19
10
4
, http://www.100md.com
注： 与LN非活动组比较P<0.01
2.尿 sIL-2R测定：取病人及20名正常人的清洁中段尿液，用ELISA法进行检测。sIL-2R检试盒购买自白求恩医科大学免疫教研室，按其说明书方法进行测定，主要的步骤包括：(1)用0.01mol/L pH7.4的 PBS 稀释的抗sIL-2R 单克隆抗体(2.5μg/ml)对96孔进口聚苯乙烯酶标板进行包被(每孔100μl)；(2)1%小牛血清白蛋白-包被缓冲液(含0.05%吐温20)作封闭；(3)各孔加入100μl0.25%小牛血清白蛋白-包被缓冲液(含0.1%吐温20)，并依次加入空白对照，稀释的标准品 1 600、800、400、200、100μl/ml，和待测尿液各50μl(设两个平行孔，部分尿液样本加100μl)；(4)按顺序定时加入1∶40兔抗sIL-2R多克隆抗体，1∶40辣根过氧化物酶标驴抗兔抗体，OPD底物溶液和中止液(2mol/L硫酸)；(5)用 Dynatech MR 5000 型酶标测定仪测 490nm 吸光度(A，曾称光密度OD)值；(6)以 sIL-2R标准品单位与其吸光度值绘制标准曲线，各样本含量直接在曲线上查出。
, http://www.100md.com
3.尿FLCI定性检查：取病人和正常对照者的清洁中段尿液，用双向免疫扩散法进行免疫球蛋白的κ链和λ链定性测定。IgG羊抗人轻链κ和λ抗体购自美国(Silenus Lab.PTY，LTD，批号κ411和λ061)。
4.统计学分析：用非配对t检验或Fisher精确检验法作显著性分析，直线相关分析作相关性统计分析。
结 果
一、各组病例临床实验室检查(表1)
LN活动判断主要是依靠 24 小时尿蛋白变化程度、尿沉渣检查和病理检查结果，上述指标改变程度在LN活动组明显重于LN非活动组。本研究病例肾功能多处于代偿期，两组病例 SCr 水平差异无显著意义(P>0.10)。血清补体(C3、C4、CH50)的平均值在LN活动组略低，但与LN非活动组比较无明显统计学差异。抗核抗体(ANA)的阳性发现率在两组病例均较高，而抗ds-DNA 抗体阳性者仅4例，全部是 LN 活动病人。两组病例中，各种病理类型的 LN 均存在，而活动组中Ⅳ型(5例)和Ⅴ型(5例)者略多于非活动组，Ⅰ型1例，Ⅱ型4例，Ⅲ型2例，非活动组Ⅴ型1例，Ⅳ型2例，Ⅲ型3例，Ⅱ型4例，Ⅰ型3例。其疾病活动的病理损害多表现为肾小球内细胞大量增生和白细胞浸润，基底膜内皮下颗粒物沉积或上皮下沉积，毛细血管纤维素样坏死，以及间质中淋巴和单核细胞浸润，少数表现肾小球有半月体形成。
, 百拇医药
在3个月的观察中，LN非活动组中4例出现LN活动；而LN活动组病人经治疗后15例达到活动控制标准。
二、尿 sIL-2R 测定结果
LN 非活动组的平均值为 92±23U/ml，对照组为 85±19U/ml，两组差异无显著意义(P>0.10)；LN活动组的平均值为 160±108U/ml，明显高于对照组(P<0.01)和LN非活动组(P<0.05)。将病人的尿 sIL-2R 测定值分别与24小时尿蛋白定量、血清C3、C4和CH50测定值作相关性分析、未发现有明显的相关性(表2)。
表2 尿sIL-2R测定值与尿蛋白定量和血清补体值的相关性分析结果
尿蛋白
C3
, http://www.100md.com
C4
CH50
r
0.1845
-0.1995
-0.1504
-0.2822
t
0.9919
-1.0783
-0.8042
-1.5591
, 百拇医药
P
>0.20
>0.20
>0.20
>0.10
三、尿FLCI检查结果(表3)
表3 各组病人尿FLCI检查结果(例数，%) 组别
受检
κ链阳性
λ链阳性
总阳性
对照组
, http://www.100md.com
20
0(0)
0(0)
0(0)
LN非活动组
13
2(15)
2(15)
2(15)
LN活动组
17
10(59)*
10(59)*
, 百拇医药
13(76)**
注：与LN非活动组比较*P<0.05，**P<0.01
20 名正常人尿κ和λ链均为阴性；13例 LN非活动者中有2例检查阳性，与对照组比较差异无显著意义(P>0.05)；17例活动的LN病人中，阳性13例，阳性率明显高于非活动的LN病人(P<0.01)，其中κ链和λ链同时阳性7例，单独κ链或λ链阳性各3例。
在4例由 LN 非活动转为活动的病人中，2例尿FLCI阳性者均在其内，疾病活动均发生在1个月内；15例从LN活动转为活动控制的病人中，4例原来尿FLCI阴性者都在其中，他们的活动控制时间均在2个月内(平均35±9天)，早于尿FLCI阳性病例的平均活动控制时间(60±18天)。
讨 论
, 百拇医药
sIL-2R 是一种由活动的 T 淋巴细胞释放的细胞因子结合物质。正常人血液和尿液中存在sIL-2R，但在某些 T 细胞异常的疾病状态下，如T细胞白血病，sIL-2R 明显增多[5]。本研究显示 LN 活动时尿内 sIL-2R 较正常人或 LN 非活动病人明显增多。众所周知，LN的发病与T和B淋巴细胞异常活动，形成自身免疫复合物并沉积于肾小球内有关，故T细胞活动增强，是疾病活动或加重的指征[2，6]。尿 sIL-2R 增多与LN上述改变相符合。本研究还发现，LN尿sIL-2R的增多并不与尿蛋白排泄增加相关(r=0.1845，P>0.20)，提示尿sIL-2R的增加，除了由于血液中sIL-2R增多使从肾脏排出增加外，可能象白细胞介素1、转移生长因子β和肿瘤坏死因子等细胞因子那样，尿中的增多还与浸润于肾小球内的T细胞活动异常和肾脏炎症活动有关[7，8]。因此，尿内sIL-2R增多对确定LN活动是可靠的。据报道[2，6]，血清补体变化在LN活动时不是很敏感，仅在疾病活动相当明显时才出现降低，而体内sIL-2R增多则常出现。本研究中，LN活动的病人尿中sIL-2R明显增加，而C3、C4或CH50的变化并不明显，与sIL-2R的增加无显著相关性，与文献报告颇相符合。提示LN活动时，尿中sIL-2R增多较血清补体变化敏感。
, 百拇医药
本组材料显示，LN活动时，尿中FLCI阳性率明显增加，达76%，明显高于非活动者(15%)和正常人(全部阴性)，而且2例尿液FLCI阳性的非活动LN病人不久便出现了LN活动，4例尿FLCI阴性的LN活动病人治疗后很快得到控制。据文献报道[3，9]，尿中FLCI增加可见于系统性红斑狼疮活动和病情加重时。机体B淋巴细胞和单核细胞[9，10]的异常活动均可产生和分泌大量的 FLCI。LN 病人尿中FLCI增多与循环和肾内的免疫细胞活动异常导致其分泌增加有关[3]，亦与肾小管受损后重吸收FLCI减少有关[9]。本研究结果提示尿中FLCI检查有助于判断LN活动和估计预后。
(本课题由中华医学基金资助)
参考文献
1 Brenner BM,Rector FC,eds. The kidney.4th ed.Philadelphia:Saunders,1991,1280-1298.
, 百拇医药
2 Laut J,Senitzer D,Petrucci R,et al.Soluble interleukin-2 receptor leves in lupus nephritis.Clin Nephrol 1992,38:179.
3 Hopper JE,Sequeira W,Martellotto J,et al.Clinical relapse in systemic lupus erythematosus:correlation with antecedent elevation of urinary free light-chain immunoglobulin.J Clin Immunol,1989,9:338.
4 叶任高.狼疮性肾炎治疗的新概念.中华肾脏病杂志，1990,6:379.
5 Marcon L,Fritz ME,Kurman CC,et al.Soluble Tacpeptide is present in the urine of normal individuals and at elevated levels in patients with adult T cell leukaemia (ATL). Clin Exp Immunol,1988,73:29.
, 百拇医药
6 Tokano Y,Murashima A,Takasaki Y,et al.Relation between soluble interleukin-2 receptor and clinical findings in patients with systemic lupus erythematosus.Ann Rheum Dis,1989,48:803.
7 Boswell JM,Yui MA,Burt DW,et al.Increased tumor necrosis factor and IL-1β gene expression in the kidneys of mice with lupus nephritis. J Immunol,1988,141:3050.
8 Okuda S,Langunio LR,Ruoslahti E,et al.Elevated expression of tuansforming growth factor-β and proteoglycan production in experimental glomerulonephritis:possible role in expansion of mesangial extracellular matrix. J Clin Invest,1990,86:453.
, 百拇医药
9 Epstein WV.Immunlogic events preceding clinical exacerbation of systemic lupus erythematosus. Am J Med,1973,54:631.
10 Hopper JE,Papagiannes E.Evidence by radioim-munoassay that mitogen-activated human blood mononuclear cells secrete significant amounts of light chain Ig unassociated with heavy chain.Cell Immunol,1986,101:122.
(收稿：1993-03-27 修回：1993-05-26), 百拇医药
单位：510080 广州中山医科大学肾脏研究所(凌衫洪现在桂林医学肾内科)
关键词：狼疮性肾炎；受体，白细胞介素2；免疫球蛋白类，轻链
中华医学杂志931232 摘要 对 30 例狼疮性肾炎(LN)病人尿中可溶性白细胞介素2受体(sIL-2R)和免疫球蛋白自由轻链(FICI)进行检测。发现LN活动组的sIL-2R平均值为160±108U/ml，明显高于LN非活动组(92±23U/ml，P<0.05)和正常对照组(85±19U/ml，P<0.01)；LN活动组尿FLCI的阳性率(77%)亦明显高于LN非活动组15%，P<0.01)。提示尿液中sIL-2R和FLCI的增多是LN活动的早期、可靠指标。
狼疮性肾炎(LN)的发病机理与浸润于肾小球内的T和B淋巴细胞、单核细胞和多形核细胞的活动异常有关[1]。近年发现 LN 活动时上述免疫活性细胞产生和释放的可溶性白细胞介素2受体(sIL-2R)和免疫球蛋白自由轻链(FLCI)增多[2，3]。为了解LN病人尿中sIL-2R和FLCI水平变化与疾病活动的关系，我们作了如下研究。
, http://www.100md.com
对象和方法
1.对象：30例 LN 患者，男3例，女27例，年龄15～54岁，平均31.6岁。均按1982年美国风湿病学会修定的诊断标准并按肾穿刺病理检查结果分型[1]。病例均曾接受了糖皮质激素和环磷酰胺等治疗[4]。
根据研究开始时的临床和实验室检查结果(表1)，将病人分为LN活动与非活动两组，以后每1～2周复查，连续3个月以上观察其病情变化。判断LN活动的依据是[1]：24小时尿蛋白增加并超过原水平的1倍以上；尿沉渣检查红细胞≥5个/高倍视野，伴有各种管型出现；血清肌酐(SCr)在原来水平上升高≥35μmol/L；病理检查肾脏有活动性损害。判断LN活动控制的依据是：尿蛋白定量减少50%以上；尿沉渣检查恢复正常；SCr较原水平降低>35μmol/L维持超过1个月。
表1 两组LN病人临床实验室检查结果x±s 组别
, 百拇医药
例数
尿蛋白(g/24h)
SCr(μmol/L)
高倍镜尿沉渣检查(例数)
C3(g/L)
C4(g/L)
CH50(kU/L)
ANA(+)例数
抗ds-DNA(+)例数
RBC≥5
WBC≥5
, 百拇医药
管型≥5
LN非活动组
13
0.5±0.6
94±57
0
2
1
1.1±0.7
0.40±0.30
70±32
9
0
, 百拇医药
LN活动组
17
2.6±1.9*
119±89
10*
5
10*
0.9±0.5
0.33±0.22
53±19
10
4
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注： 与LN非活动组比较P<0.01
2.尿 sIL-2R测定：取病人及20名正常人的清洁中段尿液，用ELISA法进行检测。sIL-2R检试盒购买自白求恩医科大学免疫教研室，按其说明书方法进行测定，主要的步骤包括：(1)用0.01mol/L pH7.4的 PBS 稀释的抗sIL-2R 单克隆抗体(2.5μg/ml)对96孔进口聚苯乙烯酶标板进行包被(每孔100μl)；(2)1%小牛血清白蛋白-包被缓冲液(含0.05%吐温20)作封闭；(3)各孔加入100μl0.25%小牛血清白蛋白-包被缓冲液(含0.1%吐温20)，并依次加入空白对照，稀释的标准品 1 600、800、400、200、100μl/ml，和待测尿液各50μl(设两个平行孔，部分尿液样本加100μl)；(4)按顺序定时加入1∶40兔抗sIL-2R多克隆抗体，1∶40辣根过氧化物酶标驴抗兔抗体，OPD底物溶液和中止液(2mol/L硫酸)；(5)用 Dynatech MR 5000 型酶标测定仪测 490nm 吸光度(A，曾称光密度OD)值；(6)以 sIL-2R标准品单位与其吸光度值绘制标准曲线，各样本含量直接在曲线上查出。
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3.尿FLCI定性检查：取病人和正常对照者的清洁中段尿液，用双向免疫扩散法进行免疫球蛋白的κ链和λ链定性测定。IgG羊抗人轻链κ和λ抗体购自美国(Silenus Lab.PTY，LTD，批号κ411和λ061)。
4.统计学分析：用非配对t检验或Fisher精确检验法作显著性分析，直线相关分析作相关性统计分析。
结 果
一、各组病例临床实验室检查(表1)
LN活动判断主要是依靠 24 小时尿蛋白变化程度、尿沉渣检查和病理检查结果，上述指标改变程度在LN活动组明显重于LN非活动组。本研究病例肾功能多处于代偿期，两组病例 SCr 水平差异无显著意义(P>0.10)。血清补体(C3、C4、CH50)的平均值在LN活动组略低，但与LN非活动组比较无明显统计学差异。抗核抗体(ANA)的阳性发现率在两组病例均较高，而抗ds-DNA 抗体阳性者仅4例，全部是 LN 活动病人。两组病例中，各种病理类型的 LN 均存在，而活动组中Ⅳ型(5例)和Ⅴ型(5例)者略多于非活动组，Ⅰ型1例，Ⅱ型4例，Ⅲ型2例，非活动组Ⅴ型1例，Ⅳ型2例，Ⅲ型3例，Ⅱ型4例，Ⅰ型3例。其疾病活动的病理损害多表现为肾小球内细胞大量增生和白细胞浸润，基底膜内皮下颗粒物沉积或上皮下沉积，毛细血管纤维素样坏死，以及间质中淋巴和单核细胞浸润，少数表现肾小球有半月体形成。
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在3个月的观察中，LN非活动组中4例出现LN活动；而LN活动组病人经治疗后15例达到活动控制标准。
二、尿 sIL-2R 测定结果
LN 非活动组的平均值为 92±23U/ml，对照组为 85±19U/ml，两组差异无显著意义(P>0.10)；LN活动组的平均值为 160±108U/ml，明显高于对照组(P<0.01)和LN非活动组(P<0.05)。将病人的尿 sIL-2R 测定值分别与24小时尿蛋白定量、血清C3、C4和CH50测定值作相关性分析、未发现有明显的相关性(表2)。
表2 尿sIL-2R测定值与尿蛋白定量和血清补体值的相关性分析结果
尿蛋白
C3
, http://www.100md.com
C4
CH50
r
0.1845
-0.1995
-0.1504
-0.2822
t
0.9919
-1.0783
-0.8042
-1.5591
, 百拇医药
P
>0.20
>0.20
>0.20
>0.10
三、尿FLCI检查结果(表3)
表3 各组病人尿FLCI检查结果(例数，%) 组别
受检
κ链阳性
λ链阳性
总阳性
对照组
, http://www.100md.com
20
0(0)
0(0)
0(0)
LN非活动组
13
2(15)
2(15)
2(15)
LN活动组
17
10(59)*
10(59)*
, 百拇医药
13(76)**
注：与LN非活动组比较*P<0.05，**P<0.01
20 名正常人尿κ和λ链均为阴性；13例 LN非活动者中有2例检查阳性，与对照组比较差异无显著意义(P>0.05)；17例活动的LN病人中，阳性13例，阳性率明显高于非活动的LN病人(P<0.01)，其中κ链和λ链同时阳性7例，单独κ链或λ链阳性各3例。
在4例由 LN 非活动转为活动的病人中，2例尿FLCI阳性者均在其内，疾病活动均发生在1个月内；15例从LN活动转为活动控制的病人中，4例原来尿FLCI阴性者都在其中，他们的活动控制时间均在2个月内(平均35±9天)，早于尿FLCI阳性病例的平均活动控制时间(60±18天)。
讨 论
, 百拇医药
sIL-2R 是一种由活动的 T 淋巴细胞释放的细胞因子结合物质。正常人血液和尿液中存在sIL-2R，但在某些 T 细胞异常的疾病状态下，如T细胞白血病，sIL-2R 明显增多[5]。本研究显示 LN 活动时尿内 sIL-2R 较正常人或 LN 非活动病人明显增多。众所周知，LN的发病与T和B淋巴细胞异常活动，形成自身免疫复合物并沉积于肾小球内有关，故T细胞活动增强，是疾病活动或加重的指征[2，6]。尿 sIL-2R 增多与LN上述改变相符合。本研究还发现，LN尿sIL-2R的增多并不与尿蛋白排泄增加相关(r=0.1845，P>0.20)，提示尿sIL-2R的增加，除了由于血液中sIL-2R增多使从肾脏排出增加外，可能象白细胞介素1、转移生长因子β和肿瘤坏死因子等细胞因子那样，尿中的增多还与浸润于肾小球内的T细胞活动异常和肾脏炎症活动有关[7，8]。因此，尿内sIL-2R增多对确定LN活动是可靠的。据报道[2，6]，血清补体变化在LN活动时不是很敏感，仅在疾病活动相当明显时才出现降低，而体内sIL-2R增多则常出现。本研究中，LN活动的病人尿中sIL-2R明显增加，而C3、C4或CH50的变化并不明显，与sIL-2R的增加无显著相关性，与文献报告颇相符合。提示LN活动时，尿中sIL-2R增多较血清补体变化敏感。
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本组材料显示，LN活动时，尿中FLCI阳性率明显增加，达76%，明显高于非活动者(15%)和正常人(全部阴性)，而且2例尿液FLCI阳性的非活动LN病人不久便出现了LN活动，4例尿FLCI阴性的LN活动病人治疗后很快得到控制。据文献报道[3，9]，尿中FLCI增加可见于系统性红斑狼疮活动和病情加重时。机体B淋巴细胞和单核细胞[9，10]的异常活动均可产生和分泌大量的 FLCI。LN 病人尿中FLCI增多与循环和肾内的免疫细胞活动异常导致其分泌增加有关[3]，亦与肾小管受损后重吸收FLCI减少有关[9]。本研究结果提示尿中FLCI检查有助于判断LN活动和估计预后。
(本课题由中华医学基金资助)
参考文献
1 Brenner BM,Rector FC,eds. The kidney.4th ed.Philadelphia:Saunders,1991,1280-1298.
, 百拇医药
2 Laut J,Senitzer D,Petrucci R,et al.Soluble interleukin-2 receptor leves in lupus nephritis.Clin Nephrol 1992,38:179.
3 Hopper JE,Sequeira W,Martellotto J,et al.Clinical relapse in systemic lupus erythematosus:correlation with antecedent elevation of urinary free light-chain immunoglobulin.J Clin Immunol,1989,9:338.
4 叶任高.狼疮性肾炎治疗的新概念.中华肾脏病杂志，1990,6:379.
5 Marcon L,Fritz ME,Kurman CC,et al.Soluble Tacpeptide is present in the urine of normal individuals and at elevated levels in patients with adult T cell leukaemia (ATL). Clin Exp Immunol,1988,73:29.
, 百拇医药
6 Tokano Y,Murashima A,Takasaki Y,et al.Relation between soluble interleukin-2 receptor and clinical findings in patients with systemic lupus erythematosus.Ann Rheum Dis,1989,48:803.
7 Boswell JM,Yui MA,Burt DW,et al.Increased tumor necrosis factor and IL-1β gene expression in the kidneys of mice with lupus nephritis. J Immunol,1988,141:3050.
8 Okuda S,Langunio LR,Ruoslahti E,et al.Elevated expression of tuansforming growth factor-β and proteoglycan production in experimental glomerulonephritis:possible role in expansion of mesangial extracellular matrix. J Clin Invest,1990,86:453.
, 百拇医药
9 Epstein WV.Immunlogic events preceding clinical exacerbation of systemic lupus erythematosus. Am J Med,1973,54:631.
10 Hopper JE,Papagiannes E.Evidence by radioim-munoassay that mitogen-activated human blood mononuclear cells secrete significant amounts of light chain Ig unassociated with heavy chain.Cell Immunol,1986,101:122.
(收稿：1993-03-27 修回：1993-05-26), 百拇医药