妊工娠区带蛋白的纯化及其临床应用的初步探讨
作者：滕 红 张为远 朱凤金 闫国来 刘晓君
单位：130041 长春 白求恩医科大学第二临床学院妇产科(滕 红，张为远、朱凤全、闫国来)；吉林工业大学职工医院妇产科(刘晓君)
关键词：
中华医学杂志931235 妊娠区带蛋(PZP)的分子量为326×106，等电点4.7，沉降系数12.0，半寿期约3～4周[1]。我们采用免疫化学技术从人胎盘后血清中纯化出 PZP 抗原，并制备了 PZP 抗血清，建立了 PZP 单向免疫扩散法，对正常和异常妊娠孕妇及妇科肿瘤患者进行了测定，探讨其在妇产科应用的意义。
一、材料与方法
1.对象：为我院门诊及住院的正常和异常妊娠者共627例：妇科肿瘤患者188例。均于午前空腹采静脉血2ml，离心，分离血清后测定。
, 百拇医药
2.研究方法：(1)PZP纯化；取10例正常足月妊娠产妇胎盘后血 500ml，分离血清约 200ml，经 Sephadex G 200 柱层析(2.50×100cm)；DEAE-Sephadex A50 离子交换层析(2.6×10cm)；等电聚焦电泳(pH 4～6)；PZP-Sepharose 4B负亲和层析(1.5×20cm)，收集第一蛋白吸收峰，浓缩，即得 PZP 纯品。(2)PZP 纯品鉴定：采用8.0%聚丙烯酰胺圆盘电泳，免疫电泳及双向免疫交叉试验等方法。(3)PZP抗血清制备：选择2.5kg雄性家兔，双后足掌注射活卡介苗 20mg，10天后
窝淋巴细内注射福氏全佐剂加PZP抗原40μg，2周后窝淋巴结周围注射福氏全佐剂加抗原 160μg，7天后抽血，其抗血清效价在1∶16以上者，以兔颈动脉放血，分离血清，分装，冻存。(4)PZP 单向免疫扩散法的建立[2]，将4个不同浓度(25、50、100及200mg/L)的PZP参考标准为横坐标，其免疫沉淀环直径(3.8、4.5、5.6和7.5mm)为纵坐标，绘制标准线，根据标本免疫沉淀环直径，从标准线上即可查到该标本的PZP值。每批试验均用混合血清(185mg/L)做质量控制，其批内变异系数为4.8%，批间变异系数为6.2%。本法敏感度为11.5mg/L。
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二、结果
1.PZP纯化与鉴定：人胎盘后血清经柱层析，离子交换层析，等电聚焦和亲和层析获得 PZP 抗原。该抗原经8.0%聚丙烯酰胺圆盘电泳呈现一条带，在免疫电泳和双向交叉试验证实，本纯品只与抗PZP血清和抗妊娠血清出现免疫反应，而与抗人全血清，抗AFP，抗hCG，抗PAPP-A血清无免疫反应。
2.正常孕妇血清PZP变化：采用本法对498例正常妊娠测定表明，在妊娠第5周即可测出PZP。因所测数据较离散，呈偏态分布，故采用百分位法。结果显示，正常孕妇血PZP随孕周进展而增加，40周达峰值(附表)。
附表 正常妊娠各孕周血PZP水平变化(mg/L) 孕周
例数
第10百位数
, 百拇医药 第50百位数
第90百位数
5～
18
11
30
122
8～
19
26
60
184
12～
, http://www.100md.com 18
36
90
199
16～
22
37
100
205
20～
24
52
135
228
, 百拇医药
24～
21
60
146
235
28～
33
53
179
249
30～
39
52
, http://www.100md.com 182
246
32～
29
66
186
280
34～
41
101
196
338
36～
46
, http://www.100md.com
99
273
399
38～
82
149
289
414
40～
81
141
307
467
, 百拇医药 3.异常妊娠血PZP值变化：(1)先兆流产：52例，25例(48%)的血PZP低于同孕周第10百分位数，保胎无效而流产者15例(60%)。血PZP正常者27例，仅5例流产(19%)。(2)妊娠高血压综合征：共45例，血PZP低者11例。(3)其他：宫外孕25例和无脑儿7例，其血PZP均在正常范围内。
4.滋养细胞疾病患者血PZP变化：葡萄胎38例，血PZP为98.9±46.6mg/L，与正常妊娠早期比较差异无显著意义；恶性葡萄胎31例，血PZP为68.8±40.7mg/L；绒癌30例，血PZP46.4±25.3mg/L。后两者与正常妊娠早期比较差异有显著意义P<0.05～0.01。
5.妇科肿瘤：子宫内膜癌患者(7例)血PZP值(92.3±45.4mg/L)和子宫颈癌患者(12例)的血PZP值(101.8±54.3mg/L)，均明显高于子宫肌瘤患者(32例)的血PZP值(64.8±32.8mg/L)，P<0.01。卵巢癌17例，其血PZP值95.8±9.6mg/L；卵巢癌21例，血PZP值49.6±20.6mg/L，两者比较P<0.001。
, 百拇医药
三、讨论
参考国外有关资料[1，3]，结合本实验室条件建立了纯化PZP的技术和经验，获得了PZP纯品，并制备出高效价的抗血清。建立了PZP单向免疫扩散法，此法具有较理想的敏感度(11.5mg/L)和良好的稳定性，重复性。有报道先兆流产箅PZP低者有75%发生流产，而PZP正常者有87.5%达妊娠足月[4]。本研究表明，血PZP正常者中有81.5%可继续妊娠，血PZP低者60.0%发生流产，提示测定先兆流产患者血PZP可作为判定先兆流产预后的一项较好指标。恶性葡萄胎和绒癌患者血PZP明显低于葡萄胎患者血PZP，P<0.01，可见测定滋养细胞疾病患者血PZP可做为鉴别良恶性滋养细胞疾病的一项辅助指标。妇科恶性肿瘤者血PZP高于良性肿瘤患者的血PZP，这可能与妇科恶性肿瘤患者雌激素增高有关。所以血PZP的测定在妇产科肿瘤，尤其是卵巢癌的辅助诊断方面具有重要价值。
参考文献
, 百拇医药
1 Bo von Schoultz,Torgny Stigbrand. Purification of the pregnancy zone protein.Acta Obstet Gynecol Scadn,1973,52:51.
2 张为远，朱凤全，王丽岩，等.人胎盘泌乳素单向免疫扩散法及临床应用的研究.中华妇产科杂志，1990,25:278.
3 西山幸男，伊束雅纯，早川滋彦，他.妊娠性蛋白SP1(β1-SP1-glycoprotein)およびSP3(α2 AP-glycoprotein，の分离精制とその基础的临床的研究.日产杂志，1978,30:1005.
(收稿：1992-12-28 修回：1993-06-20), http://www.100md.com
单位：130041 长春 白求恩医科大学第二临床学院妇产科(滕 红，张为远、朱凤全、闫国来)；吉林工业大学职工医院妇产科(刘晓君)
关键词：
中华医学杂志931235 妊娠区带蛋(PZP)的分子量为326×106，等电点4.7，沉降系数12.0，半寿期约3～4周[1]。我们采用免疫化学技术从人胎盘后血清中纯化出 PZP 抗原，并制备了 PZP 抗血清，建立了 PZP 单向免疫扩散法，对正常和异常妊娠孕妇及妇科肿瘤患者进行了测定，探讨其在妇产科应用的意义。
一、材料与方法
1.对象：为我院门诊及住院的正常和异常妊娠者共627例：妇科肿瘤患者188例。均于午前空腹采静脉血2ml，离心，分离血清后测定。
, 百拇医药
2.研究方法：(1)PZP纯化；取10例正常足月妊娠产妇胎盘后血 500ml，分离血清约 200ml，经 Sephadex G 200 柱层析(2.50×100cm)；DEAE-Sephadex A50 离子交换层析(2.6×10cm)；等电聚焦电泳(pH 4～6)；PZP-Sepharose 4B负亲和层析(1.5×20cm)，收集第一蛋白吸收峰，浓缩，即得 PZP 纯品。(2)PZP 纯品鉴定：采用8.0%聚丙烯酰胺圆盘电泳，免疫电泳及双向免疫交叉试验等方法。(3)PZP抗血清制备：选择2.5kg雄性家兔，双后足掌注射活卡介苗 20mg，10天后
窝淋巴细内注射福氏全佐剂加PZP抗原40μg，2周后窝淋巴结周围注射福氏全佐剂加抗原 160μg，7天后抽血，其抗血清效价在1∶16以上者，以兔颈动脉放血，分离血清，分装，冻存。(4)PZP 单向免疫扩散法的建立[2]，将4个不同浓度(25、50、100及200mg/L)的PZP参考标准为横坐标，其免疫沉淀环直径(3.8、4.5、5.6和7.5mm)为纵坐标，绘制标准线，根据标本免疫沉淀环直径，从标准线上即可查到该标本的PZP值。每批试验均用混合血清(185mg/L)做质量控制，其批内变异系数为4.8%，批间变异系数为6.2%。本法敏感度为11.5mg/L。, 百拇医药
二、结果
1.PZP纯化与鉴定：人胎盘后血清经柱层析，离子交换层析，等电聚焦和亲和层析获得 PZP 抗原。该抗原经8.0%聚丙烯酰胺圆盘电泳呈现一条带，在免疫电泳和双向交叉试验证实，本纯品只与抗PZP血清和抗妊娠血清出现免疫反应，而与抗人全血清，抗AFP，抗hCG，抗PAPP-A血清无免疫反应。
2.正常孕妇血清PZP变化：采用本法对498例正常妊娠测定表明，在妊娠第5周即可测出PZP。因所测数据较离散，呈偏态分布，故采用百分位法。结果显示，正常孕妇血PZP随孕周进展而增加，40周达峰值(附表)。
附表 正常妊娠各孕周血PZP水平变化(mg/L) 孕周
例数
第10百位数
, 百拇医药 第50百位数
第90百位数
5～
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122
8～
19
26
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12～
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36
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16～
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37
100
205
20～
24
52
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21
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32～
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99
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38～
82
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, 百拇医药 3.异常妊娠血PZP值变化：(1)先兆流产：52例，25例(48%)的血PZP低于同孕周第10百分位数，保胎无效而流产者15例(60%)。血PZP正常者27例，仅5例流产(19%)。(2)妊娠高血压综合征：共45例，血PZP低者11例。(3)其他：宫外孕25例和无脑儿7例，其血PZP均在正常范围内。
4.滋养细胞疾病患者血PZP变化：葡萄胎38例，血PZP为98.9±46.6mg/L，与正常妊娠早期比较差异无显著意义；恶性葡萄胎31例，血PZP为68.8±40.7mg/L；绒癌30例，血PZP46.4±25.3mg/L。后两者与正常妊娠早期比较差异有显著意义P<0.05～0.01。
5.妇科肿瘤：子宫内膜癌患者(7例)血PZP值(92.3±45.4mg/L)和子宫颈癌患者(12例)的血PZP值(101.8±54.3mg/L)，均明显高于子宫肌瘤患者(32例)的血PZP值(64.8±32.8mg/L)，P<0.01。卵巢癌17例，其血PZP值95.8±9.6mg/L；卵巢癌21例，血PZP值49.6±20.6mg/L，两者比较P<0.001。
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三、讨论
参考国外有关资料[1，3]，结合本实验室条件建立了纯化PZP的技术和经验，获得了PZP纯品，并制备出高效价的抗血清。建立了PZP单向免疫扩散法，此法具有较理想的敏感度(11.5mg/L)和良好的稳定性，重复性。有报道先兆流产箅PZP低者有75%发生流产，而PZP正常者有87.5%达妊娠足月[4]。本研究表明，血PZP正常者中有81.5%可继续妊娠，血PZP低者60.0%发生流产，提示测定先兆流产患者血PZP可作为判定先兆流产预后的一项较好指标。恶性葡萄胎和绒癌患者血PZP明显低于葡萄胎患者血PZP，P<0.01，可见测定滋养细胞疾病患者血PZP可做为鉴别良恶性滋养细胞疾病的一项辅助指标。妇科恶性肿瘤者血PZP高于良性肿瘤患者的血PZP，这可能与妇科恶性肿瘤患者雌激素增高有关。所以血PZP的测定在妇产科肿瘤，尤其是卵巢癌的辅助诊断方面具有重要价值。
参考文献
, 百拇医药
1 Bo von Schoultz,Torgny Stigbrand. Purification of the pregnancy zone protein.Acta Obstet Gynecol Scadn,1973,52:51.
2 张为远，朱凤全，王丽岩，等.人胎盘泌乳素单向免疫扩散法及临床应用的研究.中华妇产科杂志，1990,25:278.
3 西山幸男，伊束雅纯，早川滋彦，他.妊娠性蛋白SP1(β1-SP1-glycoprotein)およびSP3(α2 AP-glycoprotein，の分离精制とその基础的临床的研究.日产杂志，1978,30:1005.
(收稿：1992-12-28 修回：1993-06-20), http://www.100md.com