前列腺癌细胞的神经内分泌表达与患者预后的关系
作者：黄志勇 孟凡青 陈海 王宁 巫佩霞
单位：
关键词：前列腺肿；瘤神经组织蛋白质类；预后
940107.htm 摘要 应用免疫组化方法(ABC法)，以及Lillie亲银法对30例前列腺癌手术切除标本进行标记。结果12例标记阳性(占40%)，其中有9例各有两种以上的神经内分泌(NE)表达。所用的NE标记物及其阳性例数分别是NSE 7例。Chromogranin-A7例， Calcitonin 2例， Gastrin 2例， hCG 4例，8一100 Protein 2例， SerotonIn 3例。另外， EMA表达阳性者有23例， Lillie亲银法仅2例阳性。通过对这些患者随访资料的分析，发现伴NE分化的前列腺癌患者，其预后远比不伴NE分化的患者差(P<0.005)。进一步证实了NE细胞可作为前列腺癌预后的可靠指标。预后差的主要原因可能是这些伴NE分化的前列腺癌对传统的内分泌激素治疗反应差，其机制可能是NE细胞合成多种神经肽类，通过多种分泌形式对肿瘤细胞的生长及增生起着调控作用。对如何改善这种较差的预后作了讨论与展望。
, 百拇医药
自Pretl(1944)首次报告前列腺有神经内分泌细胞(NE，APUD细胞)以来，研究报告日趋增多。近20年来，前列腺癌NE分化可标记细胞已达20种以上[1-1]，且认为前列腺癌的预后与其NE分化有关。
材料与方法
1.组织：选用本院1963年4月～1990年4月手术切除前列腺癌标本中，临床和病理资料完整及随访至少3年以上的30例，均经10%甲醛固定，常规石蜡包埋，切片和HE染色。
2.免疫酶标记：采用ABC法，所用抗体NSE，Calcitonin，Gastrin，s-100Protein，Serotonin，Chromogranin-A，hCG和EMA均购自Dako公司，ABC试剂盒来自VectoLab。染色强度视光镜下观察棕色颗粒的颜色深浅，及阳性细胞的密度，而分为+++及+++级。
3.Lillie亲银法：石蜡切片，脱蜡至蒸馏水洗，滴加由l%氯化铁75ml加l%铁氰化钾10ml，再加蒸馏水15ml配制成新鲜的混合液100ml，数滴染色，室温下15分钟，蒸馏水冲洗，脱水，透明，封片，光镜观察，阳性颗粒呈深蓝色。
, 百拇医药
结果与讨论
1.前列腺癌的NE表达(表1)：30例前列腺癌中NE分化的11例和类癌1例共12例，占40%，分布在7个NE分化标记物中。EMA23例阳性，与EMA上皮性标记物相比，NE分化标记阳性率则较低。表1中12例阳性，+++级10例，其中包括类癌1例，++级2例。其中9例两种以上标记物阳性，最多者5种标记物阳性，占75%。其中腺泡和导管混合型3例，类癌1例和未分化癌2例均为多种标记物阳性，但未见一例癌组织7种NE标记为阳性。在7种标记物中，NSE，Chromogranin-A是最重要的NE分化标记物，在病例中各占7例，与文献K61报道完全一致。这些NE分化细胞分布于前列腺的导管和腺泡，特别是尿道周围区的导管系统中。在发生恶性肿瘤时，即由NE多潜能干细胞多向性分化成不同类型的NE细胞【1]，NE阳性物质见于癌细胞胞浆内(图1)，阳性细胞呈点状或小灶状分布于癌组织内。这些细胞部分分化好，但大部分分化较差，特别是在一些小细胞和大细胞内。另1例典型的类癌，其NE分化标记NSE、Calcitonin和Chromogranin-A均为阳性(图2)。除上述NE标记物外，文献[1，5]报道尚有ADH、CRF、ACTH、TSH、PTH、Glucogon、Endorphin、Enkephalin及Somatostatin等20种以上，限于条件，我们未能一一予以标记。仅我们所用7种NE标记物的结果发现，不同NE标记既可出现于同一病例，也可分别表达子不同病例，各种标记物表达时并无相关性。
, 百拇医药
30例前列腺癌中Lillie亲银法染色仅2例，即类癌1例和大细胞性未分化癌1例于癌细胞胞浆内出现亲银颗粒。嗜银染色阳性者NE标记阳性，而嗜银染色阴性者，部分病例NE标记也阳性。该结果说明亲银染色和免疫组化标记结果之间无明显相关性，及用亲银染色判定前列腺癌NE分化活性，其特异性和敏感性远不如免疫组化染色。
表1 30例前列腺癌患者神经内分泌表达 组织学类型
例数
NSE
Calci
Gas
S-100
Serot
Chromo
, 百拇医药
hCG
EMA
腺泡型伴NE分化
3
2
1
2
1
3
腺泡型不伴NE分化
6
5
导管型伴NE分化
, 百拇医药
3
1
1
1
1
3
3
导管型不伴NE分化
7
5
腺泡和导管伴NE分化
3
2
1
, 百拇医药
1
2
2
混合型不伴NE分化
3
3
类癌
1
1
1
1
0
未分化癌伴NE分化
2
, 百拇医药
1
1
1
1
1
1
未分化癌不伴NE分化
2
1
合计
30
7
2
2
, http://www.100md.com
2
3
7
4
23
2.前列腺癌NE分化与预后的关系(表2)：
本组资料说明，存活<3年的5例均伴有NE分化；存活(5年的12例中，9例伴NE分化；存活<10年的22个病例中，腺泡型伴NE分化3例，导管型伴NE分化3例，腺泡和导管混合型伴NE分化3例，及未分化癌伴NE分化2例，共计ll例伴NE分化均死亡，另类癌1例存活达9年余，与前者相比，预后尚好。在存活>l0年健在的8例中，无一例伴NE分化，故伴NE分化的前列腺癌患者，其预后远比不伴NE分化的患者差(p<0.005)。致有些学者[3]提出，NE分化可作为判断前列腺癌患者预后的指标，且优于传统的组织学分级的单独指标。作者将13例前列腺癌PSA标记结果与预后的关系[7]和本组资料再次重复用NE标记的结果分析，PSA着色法的5例，即腺泡型，导管型和腺泡与导管混合型各1例及未分化癌2例，其NE标记均为阳性，均存活<5年。前列腺癌PSA标记染色强度和肿瘤分化程度与前列腺癌NE分化之间的关系似乎呈负相关，即肿瘤分化程度低和PSA标记染色强度弱，则前列腺癌NE分化的比例高。而同时跟Keratin和CEA的标记结果进行分析[8]，结果并无相关性。这和多数文献[2，6，9]报道的前列腺癌分化越差、越倾向于广泛NE分化，预后越差是一致的。Disant等认为前列腺癌的浸润程度与其NE分化程度呈正比。Turbat-Herrea等[6]证实有NE分化的前列腺癌其发生转移多，转移的位点也多，且其转移灶和原发灶有着相同的NE分化[4]。一个直接影响其预后的因素，可能是伴NE分化的前列腺癌患者对传统的内分泌激素治疗反应差。少数病例不仅不能阻抑其NE分化，甚至经内分泌治疗后，仍持续其NE分化，从腺癌发展到小细胞癌和类癌甚至发生转移者，均有报告[1]。且NE分化的前列腺癌经内分泌治疗后复发率也高[2]。
, 百拇医药
表2 前列腺癌神经内分泌与预后的关系(例) 组织学类型
例数
患者存活时间(年)
<3
3~5
5~10
>10
腺泡型伴NE分化
3
1
1
1
腺泡型不伴NE分化
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6
1
5
导管型伴NE分化
3
1
2
导管型不伴NE分化
7
2
2
3
腺泡和导管伴NE分化
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3
1
1
1
混合型不伴NE分化
3
3
类癌
1
1
未分化癌伴NE分化
2
2
未分化癌不伴NE分化
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2
1
1
合计
30
5
7
10
8
伴有NE分化的前列腺癌易发生浸润、转移、复发和对内分泌治疗反应差等，已得到普遍重视，其机制目前比较一致的认识认为，NE细胞能产生多种神经肪类并通过自分泌、内分泌、旁分泌和腔分泌等多种分泌形式，在细胞生长的多个环节上起调控作用，从而影响肿瘤的生物学行为[10]。为了改善伴NE分化的前列腺癌患者的预后，改变传统内分泌治疗的方法，采用联合化疗、转移因子免疫疗法和Somatostatin(SS)类激素的治疗，均取得了较好的治疗效果川。在当前神经肚有丝分裂信号通道已部分阐明的情况下，对前列腺癌NE分化肚类产物及其可能的受体表达进行深入研究，以探求一种广谱的神经肽受体桔抗剂，破坏合成各种生长因子的酶，或许是最理想的治疗手段，这在肺小细胞癌的治疗上已取得了进步展，对改善伴NE分化的前列腺癌的预后，必将产生重大影响。
, 百拇医药
图1 NSE 阳性棕色颗粒状物质，分布于癌细胞胞浆内。ABC法 ×400 图2 典型的类症，Chromogranin阳性细胞呈点状或灶状分布于癌组织中 ABC法 ×200
参考文献
lDi Sant'Agnese PA. Neuroendocrine dilTcrenitiuon inhuman prostatic carcinoma. IJum Pathol. 19tj2.21 : 257.
2 11i Sant'agnese PA. The ncuroendocriiic dil`Itrentiationand prostatic carcinoniu. The concep coines of aLte ArchPathol LabMed. 1988. I 1 2 :1097
3 Cohen RJ. Glezerson G. HartL'Ke Z. Ncuroendocnnccells a new prognostic paraineter in prostate cancer Br JLirol. 1991.68 : 258.
, 百拇医药
4 Hagood PG, Johnson FE. Bedrossian CM. cl iil Sinallcell carcinoma ofthe prostatc. Cancer, I991 ,67 : 1046
5 l>i Sant'Agncss PA. de Mcsy Jensen KL. Neuroendociincdifferentiation in prostatic carcinoma. Hum Pathol.1987.18:849.
6 TurbatHerrera EA. Herrea GA. Gorc l. et al.Neuroendocrine differentiation in prostatic carcinomas. Aretrospcctive autopsy study. Arch Pathol Lab Mcd.1988.1 12 : 1100.
, 百拇医药 7黄专勇，张莉萍，沈运航，等。前列腺特异性抗原对前列腺病变组织的标记分析，临床与实验病理学杂志，1991，7[增刊]：5
8 黄志勇，褚宏伟，景新新，等，Keratin和CEA在前列腺病变组织中的分布,徐州医学院学报,1992,12: 195.
9 Ro JY, Tetu B. Ayala AG. et al. Small cell carcinoma ofthe prostate. II. immunohislochemical and clectron inicroscopic studies of 18 cases Cancer, 1987.59 : 977.
10 Woll PJ Neuropeptides growth factor and cancer. Br JCancer. 1991.63 : 469.
(收稿：1993-03-26 修回：1993-09-20), 百拇医药
单位：
关键词：前列腺肿；瘤神经组织蛋白质类；预后
940107.htm 摘要 应用免疫组化方法(ABC法)，以及Lillie亲银法对30例前列腺癌手术切除标本进行标记。结果12例标记阳性(占40%)，其中有9例各有两种以上的神经内分泌(NE)表达。所用的NE标记物及其阳性例数分别是NSE 7例。Chromogranin-A7例， Calcitonin 2例， Gastrin 2例， hCG 4例，8一100 Protein 2例， SerotonIn 3例。另外， EMA表达阳性者有23例， Lillie亲银法仅2例阳性。通过对这些患者随访资料的分析，发现伴NE分化的前列腺癌患者，其预后远比不伴NE分化的患者差(P<0.005)。进一步证实了NE细胞可作为前列腺癌预后的可靠指标。预后差的主要原因可能是这些伴NE分化的前列腺癌对传统的内分泌激素治疗反应差，其机制可能是NE细胞合成多种神经肽类，通过多种分泌形式对肿瘤细胞的生长及增生起着调控作用。对如何改善这种较差的预后作了讨论与展望。
, 百拇医药
自Pretl(1944)首次报告前列腺有神经内分泌细胞(NE，APUD细胞)以来，研究报告日趋增多。近20年来，前列腺癌NE分化可标记细胞已达20种以上[1-1]，且认为前列腺癌的预后与其NE分化有关。
材料与方法
1.组织：选用本院1963年4月～1990年4月手术切除前列腺癌标本中，临床和病理资料完整及随访至少3年以上的30例，均经10%甲醛固定，常规石蜡包埋，切片和HE染色。
2.免疫酶标记：采用ABC法，所用抗体NSE，Calcitonin，Gastrin，s-100Protein，Serotonin，Chromogranin-A，hCG和EMA均购自Dako公司，ABC试剂盒来自VectoLab。染色强度视光镜下观察棕色颗粒的颜色深浅，及阳性细胞的密度，而分为+++及+++级。
3.Lillie亲银法：石蜡切片，脱蜡至蒸馏水洗，滴加由l%氯化铁75ml加l%铁氰化钾10ml，再加蒸馏水15ml配制成新鲜的混合液100ml，数滴染色，室温下15分钟，蒸馏水冲洗，脱水，透明，封片，光镜观察，阳性颗粒呈深蓝色。
, 百拇医药
结果与讨论
1.前列腺癌的NE表达(表1)：30例前列腺癌中NE分化的11例和类癌1例共12例，占40%，分布在7个NE分化标记物中。EMA23例阳性，与EMA上皮性标记物相比，NE分化标记阳性率则较低。表1中12例阳性，+++级10例，其中包括类癌1例，++级2例。其中9例两种以上标记物阳性，最多者5种标记物阳性，占75%。其中腺泡和导管混合型3例，类癌1例和未分化癌2例均为多种标记物阳性，但未见一例癌组织7种NE标记为阳性。在7种标记物中，NSE，Chromogranin-A是最重要的NE分化标记物，在病例中各占7例，与文献K61报道完全一致。这些NE分化细胞分布于前列腺的导管和腺泡，特别是尿道周围区的导管系统中。在发生恶性肿瘤时，即由NE多潜能干细胞多向性分化成不同类型的NE细胞【1]，NE阳性物质见于癌细胞胞浆内(图1)，阳性细胞呈点状或小灶状分布于癌组织内。这些细胞部分分化好，但大部分分化较差，特别是在一些小细胞和大细胞内。另1例典型的类癌，其NE分化标记NSE、Calcitonin和Chromogranin-A均为阳性(图2)。除上述NE标记物外，文献[1，5]报道尚有ADH、CRF、ACTH、TSH、PTH、Glucogon、Endorphin、Enkephalin及Somatostatin等20种以上，限于条件，我们未能一一予以标记。仅我们所用7种NE标记物的结果发现，不同NE标记既可出现于同一病例，也可分别表达子不同病例，各种标记物表达时并无相关性。
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30例前列腺癌中Lillie亲银法染色仅2例，即类癌1例和大细胞性未分化癌1例于癌细胞胞浆内出现亲银颗粒。嗜银染色阳性者NE标记阳性，而嗜银染色阴性者，部分病例NE标记也阳性。该结果说明亲银染色和免疫组化标记结果之间无明显相关性，及用亲银染色判定前列腺癌NE分化活性，其特异性和敏感性远不如免疫组化染色。
表1 30例前列腺癌患者神经内分泌表达 组织学类型
例数
NSE
Calci
Gas
S-100
Serot
Chromo
, 百拇医药
hCG
EMA
腺泡型伴NE分化
3
2
1
2
1
3
腺泡型不伴NE分化
6
5
导管型伴NE分化
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3
1
1
1
1
3
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导管型不伴NE分化
7
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腺泡和导管伴NE分化
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类癌
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未分化癌伴NE分化
2
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2.前列腺癌NE分化与预后的关系(表2)：
本组资料说明，存活<3年的5例均伴有NE分化；存活(5年的12例中，9例伴NE分化；存活<10年的22个病例中，腺泡型伴NE分化3例，导管型伴NE分化3例，腺泡和导管混合型伴NE分化3例，及未分化癌伴NE分化2例，共计ll例伴NE分化均死亡，另类癌1例存活达9年余，与前者相比，预后尚好。在存活>l0年健在的8例中，无一例伴NE分化，故伴NE分化的前列腺癌患者，其预后远比不伴NE分化的患者差(p<0.005)。致有些学者[3]提出，NE分化可作为判断前列腺癌患者预后的指标，且优于传统的组织学分级的单独指标。作者将13例前列腺癌PSA标记结果与预后的关系[7]和本组资料再次重复用NE标记的结果分析，PSA着色法的5例，即腺泡型，导管型和腺泡与导管混合型各1例及未分化癌2例，其NE标记均为阳性，均存活<5年。前列腺癌PSA标记染色强度和肿瘤分化程度与前列腺癌NE分化之间的关系似乎呈负相关，即肿瘤分化程度低和PSA标记染色强度弱，则前列腺癌NE分化的比例高。而同时跟Keratin和CEA的标记结果进行分析[8]，结果并无相关性。这和多数文献[2，6，9]报道的前列腺癌分化越差、越倾向于广泛NE分化，预后越差是一致的。Disant等认为前列腺癌的浸润程度与其NE分化程度呈正比。Turbat-Herrea等[6]证实有NE分化的前列腺癌其发生转移多，转移的位点也多，且其转移灶和原发灶有着相同的NE分化[4]。一个直接影响其预后的因素，可能是伴NE分化的前列腺癌患者对传统的内分泌激素治疗反应差。少数病例不仅不能阻抑其NE分化，甚至经内分泌治疗后，仍持续其NE分化，从腺癌发展到小细胞癌和类癌甚至发生转移者，均有报告[1]。且NE分化的前列腺癌经内分泌治疗后复发率也高[2]。
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表2 前列腺癌神经内分泌与预后的关系(例) 组织学类型
例数
患者存活时间(年)
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腺泡型伴NE分化
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腺泡型不伴NE分化
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伴有NE分化的前列腺癌易发生浸润、转移、复发和对内分泌治疗反应差等，已得到普遍重视，其机制目前比较一致的认识认为，NE细胞能产生多种神经肪类并通过自分泌、内分泌、旁分泌和腔分泌等多种分泌形式，在细胞生长的多个环节上起调控作用，从而影响肿瘤的生物学行为[10]。为了改善伴NE分化的前列腺癌患者的预后，改变传统内分泌治疗的方法，采用联合化疗、转移因子免疫疗法和Somatostatin(SS)类激素的治疗，均取得了较好的治疗效果川。在当前神经肚有丝分裂信号通道已部分阐明的情况下，对前列腺癌NE分化肚类产物及其可能的受体表达进行深入研究，以探求一种广谱的神经肽受体桔抗剂，破坏合成各种生长因子的酶，或许是最理想的治疗手段，这在肺小细胞癌的治疗上已取得了进步展，对改善伴NE分化的前列腺癌的预后，必将产生重大影响。
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图1 NSE 阳性棕色颗粒状物质，分布于癌细胞胞浆内。ABC法 ×400 图2 典型的类症，Chromogranin阳性细胞呈点状或灶状分布于癌组织中 ABC法 ×200
参考文献
lDi Sant'Agnese PA. Neuroendocrine dilTcrenitiuon inhuman prostatic carcinoma. IJum Pathol. 19tj2.21 : 257.
2 11i Sant'agnese PA. The ncuroendocriiic dil`Itrentiationand prostatic carcinoniu. The concep coines of aLte ArchPathol LabMed. 1988. I 1 2 :1097
3 Cohen RJ. Glezerson G. HartL'Ke Z. Ncuroendocnnccells a new prognostic paraineter in prostate cancer Br JLirol. 1991.68 : 258.
, 百拇医药
4 Hagood PG, Johnson FE. Bedrossian CM. cl iil Sinallcell carcinoma ofthe prostatc. Cancer, I991 ,67 : 1046
5 l>i Sant'Agncss PA. de Mcsy Jensen KL. Neuroendociincdifferentiation in prostatic carcinoma. Hum Pathol.1987.18:849.
6 TurbatHerrera EA. Herrea GA. Gorc l. et al.Neuroendocrine differentiation in prostatic carcinomas. Aretrospcctive autopsy study. Arch Pathol Lab Mcd.1988.1 12 : 1100.
, 百拇医药 7黄专勇，张莉萍，沈运航，等。前列腺特异性抗原对前列腺病变组织的标记分析，临床与实验病理学杂志，1991，7[增刊]：5
8 黄志勇，褚宏伟，景新新，等，Keratin和CEA在前列腺病变组织中的分布,徐州医学院学报,1992,12: 195.
9 Ro JY, Tetu B. Ayala AG. et al. Small cell carcinoma ofthe prostate. II. immunohislochemical and clectron inicroscopic studies of 18 cases Cancer, 1987.59 : 977.
10 Woll PJ Neuropeptides growth factor and cancer. Br JCancer. 1991.63 : 469.
(收稿：1993-03-26 修回：1993-09-20), 百拇医药