扩张型心肌病患者抗心肌细胞多肽抗体的分析
作者：廖玉华 涂源淑 李淑莉
单位：430022 武汉 同济医科大学心血管病研究所(廖玉华 涂源淑)，附属协和医院传染科(李淑莉)
关键词：
940115.htm 扩张型心肌病(DCM)患者血清中存在器官特异性抗心肌抗体(AHA)门。我们借助免疫转印技术，从分子水平探讨DCM患者血清中AHA的临床意义。
一、对象与方法
1.对象： DCM组：按WHO/ISFC1980年诊断标准门，共21例，男15例，女6例，平均年龄49±13岁。对照组：19例中冠心病和风心病各7例，正常人5例，男7例、女12例，平均年龄49±13岁。
2.抗原制备和免疫转印采用Alext1nder方法[3]。分离猪心肌线粒体和细胞膜，紫外分光法测样品蛋白浓度，将样品蛋白浓度调节为12mg/ml。样品蛋白和低分子量标准蛋白质(上海生化研究所)加入等体积样品处理液(含5%十二烷基磺酸钠)，100℃水浴3～5min。按Laemmli方法[4]，浓缩胶浓度为3%。分离胶浓度线粒体为12%，细胞膜为10%，加入经处理的样品，进行不连续缓冲系统垂直平板电泳，分离细胞膜和线粒体多肽。按Towbin方法[5]，将凝胶上的样品蛋白和标准蛋白转印到硝酸纤维素膜上。免疫识别：将转印膜切成4mm小条，加10%小牛血清封闭；加病人和对照组1：10稀释血清，4C过夜；洗涤后，线粒体转印膜加1：40辣根过氧化物酶(HRP)标记羊抗人IgG抗体(北京生物制品研究所)，细胞膜转印膜加l：60HRP标记A蛋白(上海生物制品研究所)，37℃温育2小时；洗涤后加0.05%二氨基联苯胺0.02%过氧化氢底物液显色，出现棕色条带为阳性。同时用PBS替代血清或酶标抗体作为非特异性染色对照。
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3数据处理X检验，计数资料相关分析。
二、结果
经免疫转印分析，发现DCM患者务清与猪心肌线粒体30 000多肽反应，11例阳性；与心肌细胞膜52 000、59 000、87000和48000多肽反应,分别是12、5、7和4例阳性；而对照组血清与上述多肽反应均为阴性。非特异性染色对照试验均为阴性。DCM患者抗心肌线粒体30 000多肽抗体与抗心肌细胞膜52 000多肽抗体具有交叉反应X＝8.053，P<0.01，r＝0.716)，与抗心肌细胞膜59 000多肽抗体没有一致性(P> 0.05)。
三、讨论
本研究发现DCM思者血悄中AHA主要与心肌线粒体和细胞膜的5种多从反应，而过心病、风心病和工常人血清与这些多肽无反应。
1 抗心肌线粒体30 000肽抗体：据报道，ADP/ATP载体位于心肌线粒体内膜,是由30 000状组成的二聚体，具有器官特仟什抗原决定族，其功能硅在线拉体和胞浆之间转运ATP[6]本组检测抗心肌线粒体30 000多肽抗体，很可能是抗心肌线粒体ADP/ATP载体抗体。
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2，抗心肌细胞吸52 000肽抗体： Kuhl等[7]发现用牛心肌线粒体ADP/ATP载体免疫豚鼠制衔的抗线粒体ADP/ATP载体抗休和心肌炎患者抗牛心肌线粒体ADP/ATP载体阳性血清，均可以与钙通道170 000、52 000、32 000多肽发生交叉免疫反应，其中与52 000肽反应阳性率为61%。本组DCM患者抗心肌细胞膜52 000肽抗体阳件率为57%，抗心叽线粒体30 000抗血清与心叽细胞膜52 000肽反应，具有高度相关性，推测心肌细胞膜52 000肽可能是与钙通道蛋白有关的组份。
3.抗心叽细胞膜59 O00肽抗休： Magnusson等[8]用DCM患者血清在心肌细胞膜兔疫转印条带上检测出与64 000、59 000、51 000多肽反应的抗体，若患者血请先与凡受体合成肽卵育，再与这种条带反应则为阴性，提示DCM患秆血清中存在抗B受体抗体。本组抗心肌细胞膜59 000从抗体与抗线粒体30 000从抗体检测结果没有一致性，推测心叽细胞膜59 000多肽是心肌B受体有关的组份。
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抗心肌细胞膜87 000和48 000多肽抗体的抗原属什有待探讨。上述抗心肌细胞多肽抗体仅在DCM患者血清中检测出,对DCM具有诊断价值，也为病因学研究提供理论依据。
参考文献
1 廖下华，涂源淑器官特异性抗心肌自身抗体与扩张型心肌病临床心血管病杂志，1992，8：255
2 Brandcnhur RO Chazov E Cherian G.et.al Report of the WHO/ISFC task force on the definiton and classi- fication of cardiomyopathies。 Br Heart J， l980，44 ： 672
3 Alexander RM。Wiliams LT,Lefkowits RJ.Identifica tion of cardiac B-adrenergic receptor by(一)[H] alprenolol binding Proc NatI Acad Sci USA，1975，72 ： 1564
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4 Laemmli UK CIeavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage TA- Nature(Lone)， 1970,227：680
5 Towbin H，staehelin T，Gordon J.Electrophoretic trans fer of proteins from polyarylamide gels to nitrocellulose sheets ：Procedure and Applications.Proc NatI Acad Sci USA，1979，76：4350
6 Schultheiss HP BoIte HD lmmunological anaIvsis of auto-antibodies against the adenine nucleotid。 translocator in dilated cardiomyopathy J MoI Cell Cardiol，1985.17：603
, 百拇医药
7 KuhI U，Mdzner B,Schafer B, et al The Ca-channel as cardiac autoantigen。Euro Heart J， 1991，12(suppI D): 99
8 Magnusson Y，Marullo S，Hoyers， et aL Mapping of a functional autoimmune epitope on the B-adrenergic receptor in patients with idiopathic dilated cardiomyopathy。J Clin lnvest， 1990，86：1658
(收稿：1993-05-25 修回：1993-09-25), http://www.100md.com
单位：430022 武汉 同济医科大学心血管病研究所(廖玉华 涂源淑)，附属协和医院传染科(李淑莉)
关键词：
940115.htm 扩张型心肌病(DCM)患者血清中存在器官特异性抗心肌抗体(AHA)门。我们借助免疫转印技术，从分子水平探讨DCM患者血清中AHA的临床意义。
一、对象与方法
1.对象： DCM组：按WHO/ISFC1980年诊断标准门，共21例，男15例，女6例，平均年龄49±13岁。对照组：19例中冠心病和风心病各7例，正常人5例，男7例、女12例，平均年龄49±13岁。
2.抗原制备和免疫转印采用Alext1nder方法[3]。分离猪心肌线粒体和细胞膜，紫外分光法测样品蛋白浓度，将样品蛋白浓度调节为12mg/ml。样品蛋白和低分子量标准蛋白质(上海生化研究所)加入等体积样品处理液(含5%十二烷基磺酸钠)，100℃水浴3～5min。按Laemmli方法[4]，浓缩胶浓度为3%。分离胶浓度线粒体为12%，细胞膜为10%，加入经处理的样品，进行不连续缓冲系统垂直平板电泳，分离细胞膜和线粒体多肽。按Towbin方法[5]，将凝胶上的样品蛋白和标准蛋白转印到硝酸纤维素膜上。免疫识别：将转印膜切成4mm小条，加10%小牛血清封闭；加病人和对照组1：10稀释血清，4C过夜；洗涤后，线粒体转印膜加1：40辣根过氧化物酶(HRP)标记羊抗人IgG抗体(北京生物制品研究所)，细胞膜转印膜加l：60HRP标记A蛋白(上海生物制品研究所)，37℃温育2小时；洗涤后加0.05%二氨基联苯胺0.02%过氧化氢底物液显色，出现棕色条带为阳性。同时用PBS替代血清或酶标抗体作为非特异性染色对照。
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3数据处理X检验，计数资料相关分析。
二、结果
经免疫转印分析，发现DCM患者务清与猪心肌线粒体30 000多肽反应，11例阳性；与心肌细胞膜52 000、59 000、87000和48000多肽反应,分别是12、5、7和4例阳性；而对照组血清与上述多肽反应均为阴性。非特异性染色对照试验均为阴性。DCM患者抗心肌线粒体30 000多肽抗体与抗心肌细胞膜52 000多肽抗体具有交叉反应X＝8.053，P<0.01，r＝0.716)，与抗心肌细胞膜59 000多肽抗体没有一致性(P> 0.05)。
三、讨论
本研究发现DCM思者血悄中AHA主要与心肌线粒体和细胞膜的5种多从反应，而过心病、风心病和工常人血清与这些多肽无反应。
1 抗心肌线粒体30 000肽抗体：据报道，ADP/ATP载体位于心肌线粒体内膜,是由30 000状组成的二聚体，具有器官特仟什抗原决定族，其功能硅在线拉体和胞浆之间转运ATP[6]本组检测抗心肌线粒体30 000多肽抗体，很可能是抗心肌线粒体ADP/ATP载体抗体。
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2，抗心肌细胞吸52 000肽抗体： Kuhl等[7]发现用牛心肌线粒体ADP/ATP载体免疫豚鼠制衔的抗线粒体ADP/ATP载体抗休和心肌炎患者抗牛心肌线粒体ADP/ATP载体阳性血清，均可以与钙通道170 000、52 000、32 000多肽发生交叉免疫反应，其中与52 000肽反应阳性率为61%。本组DCM患者抗心肌细胞膜52 000肽抗体阳件率为57%，抗心叽线粒体30 000抗血清与心叽细胞膜52 000肽反应，具有高度相关性，推测心肌细胞膜52 000肽可能是与钙通道蛋白有关的组份。
3.抗心叽细胞膜59 O00肽抗休： Magnusson等[8]用DCM患者血清在心肌细胞膜兔疫转印条带上检测出与64 000、59 000、51 000多肽反应的抗体，若患者血请先与凡受体合成肽卵育，再与这种条带反应则为阴性，提示DCM患秆血清中存在抗B受体抗体。本组抗心肌细胞膜59 000从抗体与抗线粒体30 000从抗体检测结果没有一致性，推测心叽细胞膜59 000多肽是心肌B受体有关的组份。
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抗心肌细胞膜87 000和48 000多肽抗体的抗原属什有待探讨。上述抗心肌细胞多肽抗体仅在DCM患者血清中检测出,对DCM具有诊断价值，也为病因学研究提供理论依据。
参考文献
1 廖下华，涂源淑器官特异性抗心肌自身抗体与扩张型心肌病临床心血管病杂志，1992，8：255
2 Brandcnhur RO Chazov E Cherian G.et.al Report of the WHO/ISFC task force on the definiton and classi- fication of cardiomyopathies。 Br Heart J， l980，44 ： 672
3 Alexander RM。Wiliams LT,Lefkowits RJ.Identifica tion of cardiac B-adrenergic receptor by(一)[H] alprenolol binding Proc NatI Acad Sci USA，1975，72 ： 1564
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4 Laemmli UK CIeavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage TA- Nature(Lone)， 1970,227：680
5 Towbin H，staehelin T，Gordon J.Electrophoretic trans fer of proteins from polyarylamide gels to nitrocellulose sheets ：Procedure and Applications.Proc NatI Acad Sci USA，1979，76：4350
6 Schultheiss HP BoIte HD lmmunological anaIvsis of auto-antibodies against the adenine nucleotid。 translocator in dilated cardiomyopathy J MoI Cell Cardiol，1985.17：603
, 百拇医药
7 KuhI U，Mdzner B,Schafer B, et al The Ca-channel as cardiac autoantigen。Euro Heart J， 1991，12(suppI D): 99
8 Magnusson Y，Marullo S，Hoyers， et aL Mapping of a functional autoimmune epitope on the B-adrenergic receptor in patients with idiopathic dilated cardiomyopathy。J Clin lnvest， 1990，86：1658
(收稿：1993-05-25 修回：1993-09-25), http://www.100md.com