结直肠癌雄激素受体与细胞核DNA含量及癌胚抗原表达
作者：罗成华 单京瑞 张国华 吕宝璋
单位：100853北京，中国人民解放军总医院普通外科(罗成华，张国华)；军事医学科学院基础所(单京瑞，吕宝璋)
关键词：
中华医学杂志940317
我们在测定结直肠癌雄激素受体(AR)的基础上，进一步探讨了AR水平与细胞核DNA含量、癌胚抗原(CEA)表达的关系，以期探讨AR在结直肠癌发生中的意义。
一、资料与方法
1、主要试剂：氚标记睾丸酮(3H-T)，购自中国科学院上海原子能研究所，睾丸酮(T)、Hoechst 33258(Bisbenzimidazole)，均购自Sigma公司，CEA放免试剂盒购自中国原子能科学院同位素所。
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2、研究对象：40例标本取自解放军总医院普通外科经病理证实的结直肠癌患者，男19例，女21例，年龄29～82岁(54.7±12.3岁)。手术切取肿瘤组织40块，癌旁正常的肠粘膜34块，用冰冷的生理盐水冲洗，吸干，液氮冻存。
3、泡液制备：取冷冻组织约1克，按1：10(W/V)加入磷酸盐缓冲液(pH7.3)，在冰水浴中以内切式组织匀浆器制成匀浆，匀浆液在4℃以3000rpm离心10分钟，取上清液并加入DCC悬浮液1ml，混匀反应10分钟，在4℃以31000×g离心15分钟，取脂肪层下的上清液即为胞液。采用考马斯亮兰法[1]测其蛋白浓度。
4、AR测定方法：取胞液400μl与终浓度分别为0.03125、0.0625、0.125、0.25科0.5nmol/L的3H-T混合，以磷酸盐缓冲液补充至500μl，此为总结合管，非特异结合管另加1nmol/L的非标记T。各管在冰水浴中反应16～20小时，加入DCC100μl吸附、离心各15分钟，上清液全部倒入盛有5ml闪烁液(0.5% 2，5-二苯基恶唑的甲苯溶液)的计数瓶中，用LKB-1215型液闪计数仪测其放谢性。
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5、DNA含量测定：参照文献[2]；CEA含量测定：参照文献[3]。
二、结果
1、用Scatchard作图法计算AR结合的解离常数(kd)及最大结合容量(Bmax)，结果显示：结直肠癌中AR与3H-T有较高的亲合力，kd为0.149-0.228mol/L，结直肠粘膜与癌组织AR亲和力无差异。AR与雄激素的结合具有可饱和性。
2、以Bmax≥10fmol/mg蛋白为AR阳性指标，结直肠癌40例，阳性37例，占92.5%，34例正常癌旁粘膜中，33例阳性，占97.06%。结直肠癌及正常癌旁粘膜AR水平分别为33.7±23.3fmol/mg蛋白、53.9±32.4fmol/mg蛋白，两者差异有非常显著意义(P<0.01)。
3、23例同时测定了DNA含量，结直肠癌组232.4±96.0μg/mg蛋白，粘膜组115.2±40.5μg/mg蛋白，两者差异有非常显著意义(P<0.001)。
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4、胞浆中CEA的含量为，24例癌组织含量19104±2378ng/g组织，21例粘膜级12539±2705ng/g组织，两者差异有非常显著意义(P<0.001)。
三、讨论
我们的结果显示，无论正常癌旁粘膜或结直肠癌，均具有较高的AR阳性率，提示AR与结直肠粘膜代谢有关。结直肠癌AR水平明显低于正常癌旁粘膜，表明癌变过程中，可伴有AR的丢失或其表达的受抑。
与粘膜比较，结直肠癌AR的下降伴有细胞核染色质数量及结构的改变，这种改变不但加速了癌细胞的分型增殖，同时导致了细胞内特异性多肽和蛋白的合成失败[4]，故癌组织AR的下降可由癌细胞核染色质状态改变所致。
CEA是一种癌基因异常表达的肿瘤标记物，AR作为一种激素受体，可与雄激素结合，进而通过癌基因制约CEA表达，一旦制约减弱(即AR下降)。CEA表达即可上升。
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参考文献
1 Bradford MMA. Rapid and sensitive method for the quantiza-tionof microgram quautitive of protein utilizing the princepleof proteindye binding. Anal Biochem, 1976,72:248.
2 Labarca C, Paigen K A simple rapid and sensitive DNA assayprocedure. Analytical Biochem, 1980,102:344.
3 张嘉庆，周未工，王燕玲等，大肠癌患者癌胚抗原的定量测定及其意义，普外临床，1990，5：119。
4 Olszewski W, Darzynkiewica Z, Rosen PP, et al, Flow cytometryof breast cancer, I Relationof DNA plokdy level to histologyand estrogen receptor. Cancer, 1981,48:980., 百拇医药
单位：100853北京，中国人民解放军总医院普通外科(罗成华，张国华)；军事医学科学院基础所(单京瑞，吕宝璋)
关键词：
中华医学杂志940317
我们在测定结直肠癌雄激素受体(AR)的基础上，进一步探讨了AR水平与细胞核DNA含量、癌胚抗原(CEA)表达的关系，以期探讨AR在结直肠癌发生中的意义。
一、资料与方法
1、主要试剂：氚标记睾丸酮(3H-T)，购自中国科学院上海原子能研究所，睾丸酮(T)、Hoechst 33258(Bisbenzimidazole)，均购自Sigma公司，CEA放免试剂盒购自中国原子能科学院同位素所。
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2、研究对象：40例标本取自解放军总医院普通外科经病理证实的结直肠癌患者，男19例，女21例，年龄29～82岁(54.7±12.3岁)。手术切取肿瘤组织40块，癌旁正常的肠粘膜34块，用冰冷的生理盐水冲洗，吸干，液氮冻存。
3、泡液制备：取冷冻组织约1克，按1：10(W/V)加入磷酸盐缓冲液(pH7.3)，在冰水浴中以内切式组织匀浆器制成匀浆，匀浆液在4℃以3000rpm离心10分钟，取上清液并加入DCC悬浮液1ml，混匀反应10分钟，在4℃以31000×g离心15分钟，取脂肪层下的上清液即为胞液。采用考马斯亮兰法[1]测其蛋白浓度。
4、AR测定方法：取胞液400μl与终浓度分别为0.03125、0.0625、0.125、0.25科0.5nmol/L的3H-T混合，以磷酸盐缓冲液补充至500μl，此为总结合管，非特异结合管另加1nmol/L的非标记T。各管在冰水浴中反应16～20小时，加入DCC100μl吸附、离心各15分钟，上清液全部倒入盛有5ml闪烁液(0.5% 2，5-二苯基恶唑的甲苯溶液)的计数瓶中，用LKB-1215型液闪计数仪测其放谢性。
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5、DNA含量测定：参照文献[2]；CEA含量测定：参照文献[3]。
二、结果
1、用Scatchard作图法计算AR结合的解离常数(kd)及最大结合容量(Bmax)，结果显示：结直肠癌中AR与3H-T有较高的亲合力，kd为0.149-0.228mol/L，结直肠粘膜与癌组织AR亲和力无差异。AR与雄激素的结合具有可饱和性。
2、以Bmax≥10fmol/mg蛋白为AR阳性指标，结直肠癌40例，阳性37例，占92.5%，34例正常癌旁粘膜中，33例阳性，占97.06%。结直肠癌及正常癌旁粘膜AR水平分别为33.7±23.3fmol/mg蛋白、53.9±32.4fmol/mg蛋白，两者差异有非常显著意义(P<0.01)。
3、23例同时测定了DNA含量，结直肠癌组232.4±96.0μg/mg蛋白，粘膜组115.2±40.5μg/mg蛋白，两者差异有非常显著意义(P<0.001)。
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4、胞浆中CEA的含量为，24例癌组织含量19104±2378ng/g组织，21例粘膜级12539±2705ng/g组织，两者差异有非常显著意义(P<0.001)。
三、讨论
我们的结果显示，无论正常癌旁粘膜或结直肠癌，均具有较高的AR阳性率，提示AR与结直肠粘膜代谢有关。结直肠癌AR水平明显低于正常癌旁粘膜，表明癌变过程中，可伴有AR的丢失或其表达的受抑。
与粘膜比较，结直肠癌AR的下降伴有细胞核染色质数量及结构的改变，这种改变不但加速了癌细胞的分型增殖，同时导致了细胞内特异性多肽和蛋白的合成失败[4]，故癌组织AR的下降可由癌细胞核染色质状态改变所致。
CEA是一种癌基因异常表达的肿瘤标记物，AR作为一种激素受体，可与雄激素结合，进而通过癌基因制约CEA表达，一旦制约减弱(即AR下降)。CEA表达即可上升。
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参考文献
1 Bradford MMA. Rapid and sensitive method for the quantiza-tionof microgram quautitive of protein utilizing the princepleof proteindye binding. Anal Biochem, 1976,72:248.
2 Labarca C, Paigen K A simple rapid and sensitive DNA assayprocedure. Analytical Biochem, 1980,102:344.
3 张嘉庆，周未工，王燕玲等，大肠癌患者癌胚抗原的定量测定及其意义，普外临床，1990，5：119。
4 Olszewski W, Darzynkiewica Z, Rosen PP, et al, Flow cytometryof breast cancer, I Relationof DNA plokdy level to histologyand estrogen receptor. Cancer, 1981,48:980., 百拇医药