强啡肽A在大鼠脊髓继发性损伤作用中的受体机制
作者：李明 杨晔 洪新如 叶晓健 王成海 路长林
单位：200433 上海终结二军医大学长海医院骨科(李明、叶晓健)，神经生理教研室(洪新如、王成海、路长林)；中国人民解放军81167部队医院(杨晔)
关键词：
中华医学杂志960416 目的 探讨强啡肽A在脊髓继发性损伤中的作用机理。方法 利用Allen改良方法制作了大鼠脊髓损伤模型，比较了蛛网膜下腔注射抗强啡肽A1-13血清或nor-BNI对大鼠脊髓损伤后功能恢复的影响。结果 给予抗强啡肽A1-13血清后大鼠双后肢肌张力和运动功能的恢复明显快于nor-BNI组或对照组；nor-BNI组双下肢运动功能恢复也快于对照组。组织学观察表明，脊髓损伤后4周，抗强啡肽A1-13血清组残留脊髓面积最大(1.824±0.189mm2)，显著超过nor-BNI组(1.354±0.188mm2)和对照组(0.946±0.449mm2)；nor-BNI组大于对照组，差异有显著意义。结论 强啡肽A在脊髓继发性损伤作用中的受体机制，是阿片样和非阿片样联合作用的结果。
, 百拇医药
Receptor mechanism of dynorphin A in rat secondary spinal cord in juries Li Ming, Yang Ye, Hong Xinru, et al. Department of Orthopedics, Changhai Hospital, Shanghai 200433
Objective To clarify the effects of dynorphin A on secondary spinal cord injuries. Methods Spinal cord injured rat model made according to modified Allen's method was used by comparing the effect of intrathecal dynorphin A antiserum and that of its receptor antagonist nor-BNI. Results The recovery of the muscle tension and motor function of the hindlimb in dynorphin antiserum group was markedly faster than that in both control and nor=BNI groups. Also, the recovery of motor function in the nor-BNI group was favorable at the early stage of injury, compared to the control group. Pathological observation showed that the residual area of the spinal cord in dynorphin A1-13antiserum group was larger than that in both control and nor-BNI groups. Thge residual area of the spinal cord in the nor-BNI group was also larger than that in the control group. Conclusion These observations support the hypothesis that dynorphin contrivutes to certain pathophysiological changes following traumatic SCI through both opiate-receptor mediated and nonopioid mechanisms.
, 百拇医药
Key words Spinal cord injury DynorphinA Receptors
(Natl Med J China, 1996, 76:2590-293)
内源性阿片肽作为一种自身损害因子，参与了脊髓外伤后的继发延迟性病理损害过程，其中以强啡肽A(DynA)的影响最大[1]。脊髓外伤后，损伤部位的DynA含量升高，可对脊髓损伤产生不利的作用，促进脊髓继发性损伤的发生与发展[2]。但迄今，有关DynA作用的受体机制尚无定论。为此，我们设计并进行了以下实验，探讨其作用的受体机制。
材料和方法
一、实验动物与试剂
健康雄性SD大鼠40只，体重300±25g。抗DynAA1-13血清(AnDynA，浓度1：3万)由本校制备[3]，与DynA1-8内啡肽、亮脑啡肽交叉反应极微(<0.01%)，与DynA1-17交叉反应为1.8%；DynA1-13、DynA2-17以及阿片肽Kappa受体拮抗剂nor-BNI均为Sigma公司产品。
, http://www.100md.com
二、实验方法
40只大鼠大腿肌内注射盐酸氯胺酮10mg/kg和腹腔注射戊巴比妥钠25mg/kg麻醉后，据Rudy改进法行蛛网膜下腔插管，插入和度使其末端至T5-6水平处[4]。18～24小时待动物苏醒，可自由活动后，去除插管时脊髓损伤的6只动物，剩余34只大鼠随机分成：对照组12只；抗血清组10只和拮抗剂组12只。同前法麻醉，所有动物据Allen法致脊髓中度损伤后立即经蛛网膜下腔插管注入：AnDyn1-1310μl(抗血清组)，nor-BNI100ng/kg(拮抗剂组)或人工脑脊液(ACsF)10μl(对照组)。注射药物均以ACsF配成10μl注射，随后用710μlACsF冲洗导管，药物注射在2分钟内完成。损伤后48小时内按统一标准，定时观察各组动物神经功能评分。伤后1～7天的功能恢复情况，据Rivlin方法测定倾斜平面临界角度变化，每天定时记录一次。伤后4周，心腔灌注处死所有动物，对损伤脊髓作病理定时研究。
, 百拇医药
三、神经功能和病理学观察指标
1. 运动功能评分：大鼠脊髓损伤后，由未知实验细切者，按如下统一标准，定时对各组动物的后肢运动功能进行评分：0分，完全瘫痪，无肌肉收缩：1分，重度瘫痪，肌张力不存在，可活动，但不能站立或站立不稳(站立维持<5秒)；2分，中度瘫痪，可长久站立，且能走或跑，但不稳；3分，正常走、跑。
2. 倾斜平面临界角度测定：大鼠脊髓损伤后期的功能恢复情况采用了Rivlin方法观察。即在一长方形木制板上垫一5mm厚的橡胶垫，板可绕下边旋转，斜面角度可以测出。将大鼠头向前，身体纵轴与斜板纵轴垂直放置，渐渐增大板与水平面间的角度，直至大鼠在恒定位置上刚好可能维持5秒，记录下这一临界角度。大鼠肢体抓握能力决定角度大小，从而反映大鼠脊髓神经功能恢复情况。
3. 组织病理评分：大鼠脊髓损伤后4周，用生理盐水、10%中性甲醛心内灌注法处死大鼠，脊髓标本取出后置10%中性甲醛液中固定1周。以打击点为中心，取1cm脊髓段脱水，石蜡包埋，边续切片，厚1010μm。每第5张切片行HE染色以寻找最大损伤部分。损伤区域最大的切片连接apollo NH3500图像工作站的20倍显微镜下，对脊髓横断面总面积，脊髓残留面积和损害面积作定量图像分析。
, 百拇医药
四、数据的统计学处理
实验数据均以均数±标准差(
±s)表示。实验组与对照组之间用t检验；多组之间的差异显著性判别用方差分析法；百分数之间的显著性检验用U检验，差别两变量的等级间是否相关用等级相关分析法。
结果
一、大鼠双后肢运动功能评分的影响
大鼠麻醉、脊髓损伤前，双后肢运动机能均正常。脊髓损伤5小时后全部运动功能完全，各组后肢运动功能评分见表1。抗血清组双后肢运动功能恢复最快，拮抗剂组与对照组之间差别不显著。
表1 脊髓中度损伤后鞘内注射抗强啡肽A[1-13]备清
, http://www.100md.com
或nor-BNI对后肢功能评分的影响(鼠数) 组别及评分
鼠数
损伤后时间(h)
5
8
12
20
30
40
对照组
12
0
11
, 百拇医药
10
8
4
1
0
1
1
2
3
5
6
3
2
0
, 百拇医药
0
1
3
4
8
3
0
0
0
0
1
1
抗血清组
12
, http://www.100md.com
0
6
4
3
0
0
0
1
4
5
4
3
0
0
, http://www.100md.com
2
0
1
3
6
8
3
3
0
0*
0*△
1*
2*
7*
, http://www.100md.com
拮抗剂组
12
0
10
9
7
3
0
0
1
2
3
4
5
, 百拇医药
2
0
2
0
0
1
4
6
6
3
0
0
0
0
, 百拇医药
4*
6
*与对照组比较P<0.05，△与nor-BNI组比较P<0.05
二、对大鼠倾斜平面临界角度改变的影响
脊髓损伤后1～7天，3组运动临界角度值变化如表2。抗血清组动物临界角度增大明显快于拮抗剂组或对照组(P<0.05或P<0.01)；拮抗剂组动物临界角度显著大于对照组，但后期相关不明显。
表2 应用抗强啡肽A1~13血清或nor-BNI对脊髓损伤后倾斜临界角度的影响(±
) 组别
, 百拇医药
鼠数
损伤后时间(d)
1
2
3
4
5
6
7
对照组
12
32±6
35±6
40±8
, 百拇医药
45±9
50±9
57±9
66±10
抗血清组
10
40±8*
46±8*
50±9
59±10
, 百拇医药
64±12
71±14*△
77±10*
拮抗剂线
12
38±6*
40±7*
45±7
48±8
54±10
62±14
69±15
注：表中数值单位为度。与对照组比较*P<0.05，**P<0.01；与nor-BNI组比较△P<0.05，△△P<0.01
, http://www.100md.com
三、组织病理评分
脊髓损伤后4周、3组动物脊髓有如下共同病理变化：灰质出血、液化、坏死、空洞形成，白质部分液化、残留白质环绕中央坏死空腔：空腔周边有由血管成份、神经胶质，巨噬细胞等形成的界膜(图1)；残留白质由周边至中央逐渐脱髓鞘，以近中央空腔边缘处最为明显；神经纤维、神经元肿胀。残留脊髓组织面积(主要由白质构成)，3组之间比较：抗血清组最大(1.824±0.189mm2)，显著超过拮抗剂组(1.354±0.188mm2)和对照组(0.946±0.449mm2，P均<0.05)；拮抗剂组大于对照组(P<0.05)。(图2～4)。脊髓损伤后4周，用Spearman等级相关分析，运动功能评分和脊髓残留面积在抗血清组(r=0.68, P<0.05)，拮抗剂组(r=0.67, P<0.05)和对照组(r =0.59，P<0.05)均呈正相关。
, http://www.100md.com
图1 脊髓脶伤后4周，中央空腔包含非神经元细胞如巨噬细胞神经胶质和血管成分HE80
图2 对照组大鼠脊髓中度损伤后4周,灰质大部分坏死、空腔形成HE20
图3 鞘内注射nor-BNI组大鼠脊髓中度损伤后4周，灰质部分坏死、空腔形成HE20
图4 鞘内注射抗强啡肽A1~13血清组大鼠，脊髓中度损伤后4周灰质少量坏死HE20
讨论
我们以往的实验[4,5]证实，脊髓损伤后，损伤部位DynA含量升高，且和神经功能受损、神经组织形态学改变显著相关。蛛网膜下腔注射DynA，实验动物可产生剂量依赖性驰缓性瘫痪。预先给予AnDynA，能显著改善脊髓损伤的程度。这表明过量的DynA对脊髓损伤产生了不利作用，促进了脊髓继发性损伤的发展。DynA为K阿片受体以K受体为主[6]，所以DynA在脊髓继发损伤中的作用可能经由阿片肽K受体所介导。Krumins等[7]的研究也支持这一理论。
, 百拇医药
然而Faden等[8]的研究表明，小剂量DynA导致的脊髓损伤可被纳洛酮对抗，所需剂量大于1mg/kg，大剂量DynA所致脊髓损伤不能被纳洛酮所对抗。Faden等人(1990年)发现并报告DynA2-13或DynA3-13由于氨基末端缺少赖氨酸而不具有阿片样活性，即不能与K受体结合引起效应，但这两种DynA类似物鞘内注射均能引起后肢瘫痪。这些研究提示DynA在继发性损伤中的作用除经由阿片肽K受体介导外，还可能存在非阿片样途径。
我们用了阿片肽的两种特异性拮抗物AnDynA1-13和nor-BNI，分别从阿片肽(配体)水平和阿片肽K受体水平阻断DynA的作用，观察到了作用有明显的差别。虽然nor-BNI短时间内(伤后1-2天)在一定程度上促进神经功能的恢复，使动物肢体抓握能力增强，因而临界角度升高。但无论是作用强度还是持续时间，nor-BNI与AnDynA1-13都是无法比拟的。脊髓病理的定量研究也表明：AnDynA1-13对脊髓损伤的保护作用最强，4周后脊髓残留面积最大，nor-BNI的作用次之，且两组动物4周后的运动功能评分与列留脊髓面积均成呈相关。无论是nor-BNI与AnDynA1-13都是采用药理剂量，理论上足以拮抗或中和脊髓中全部K受体及DynA。由于AnDyn1-13的功能大大超过nor-
, 百拇医药
BNI，而后者在改善神经功能中也起一定的作用，可以认为脊髓中的DanA在脊髓损伤的病理过程起重要作用，这种作用一方面是通过特异性K受体而产生的，另一方面是通过K受体以外(非阿片机制)的媒质介导的。
本研究结果提示：DynA在脊髓继发性损伤中的作用，除经由阿片肽K受体介导外，尚存在非阿片样介导途径，DynA的致瘫机理是阿片样和非阿片样联合作用的结果。
本课题为国家自然科学基金资助项目
参考文献
1 Gentile NT,Mclntos TK,Antagonists of excitatory amino acids and endogenous opioid peptides in the treatment of experimental central nervous system injury.Ann Emerg Med,1993,22:1023.
, 百拇医药
2 Eduardo F,Roberto P,Enrico M,et al,Experimental studies on spinal cord injuries in the last fifteen years. Nurol Res,1991,13:138.
3 吴德林，刘 真，林葆城，等。脑啡肽抗血清的制备。第二军医大学学报，1982，3：199。
4 本世纪明，洪新如，吴岳嵩，等。蛛网膜下腔注射强啡肽A(1~13)致大鼠部分、可逆性瘫痪的实验研究，第二军医大学学报，1994，15：335。
5 洪新如，李明，刘植珊，等。创伤后不同时间神经肽含量变人的临床观察与实验研究。中华外科杂志，1994，32：200。
6 Traynor JR,Kelley PD,Rance MJ,et al.Multiple opiate binding sites in rat spinal cord.Life Sci,1982,31:1377.
7 Krumins SA,Faden AI.Tranmatic injury alters opiate receptor binding in rat spinal cord.An Neurol,1986.19:498.
8 Faden AI,Jacobs TP.Dynorphine-related peptides cause motor dysfanction in the rat through a non-opiate action.Br J Pharmacol,1984,81:271.
(收稿：1995-03-18 修回：1995-12-19), http://www.100md.com
单位：200433 上海终结二军医大学长海医院骨科(李明、叶晓健)，神经生理教研室(洪新如、王成海、路长林)；中国人民解放军81167部队医院(杨晔)
关键词：
中华医学杂志960416 目的 探讨强啡肽A在脊髓继发性损伤中的作用机理。方法 利用Allen改良方法制作了大鼠脊髓损伤模型，比较了蛛网膜下腔注射抗强啡肽A1-13血清或nor-BNI对大鼠脊髓损伤后功能恢复的影响。结果 给予抗强啡肽A1-13血清后大鼠双后肢肌张力和运动功能的恢复明显快于nor-BNI组或对照组；nor-BNI组双下肢运动功能恢复也快于对照组。组织学观察表明，脊髓损伤后4周，抗强啡肽A1-13血清组残留脊髓面积最大(1.824±0.189mm2)，显著超过nor-BNI组(1.354±0.188mm2)和对照组(0.946±0.449mm2)；nor-BNI组大于对照组，差异有显著意义。结论 强啡肽A在脊髓继发性损伤作用中的受体机制，是阿片样和非阿片样联合作用的结果。
, 百拇医药
Receptor mechanism of dynorphin A in rat secondary spinal cord in juries Li Ming, Yang Ye, Hong Xinru, et al. Department of Orthopedics, Changhai Hospital, Shanghai 200433
Objective To clarify the effects of dynorphin A on secondary spinal cord injuries. Methods Spinal cord injured rat model made according to modified Allen's method was used by comparing the effect of intrathecal dynorphin A antiserum and that of its receptor antagonist nor-BNI. Results The recovery of the muscle tension and motor function of the hindlimb in dynorphin antiserum group was markedly faster than that in both control and nor=BNI groups. Also, the recovery of motor function in the nor-BNI group was favorable at the early stage of injury, compared to the control group. Pathological observation showed that the residual area of the spinal cord in dynorphin A1-13antiserum group was larger than that in both control and nor-BNI groups. Thge residual area of the spinal cord in the nor-BNI group was also larger than that in the control group. Conclusion These observations support the hypothesis that dynorphin contrivutes to certain pathophysiological changes following traumatic SCI through both opiate-receptor mediated and nonopioid mechanisms.
, 百拇医药
Key words Spinal cord injury DynorphinA Receptors
(Natl Med J China, 1996, 76:2590-293)
内源性阿片肽作为一种自身损害因子，参与了脊髓外伤后的继发延迟性病理损害过程，其中以强啡肽A(DynA)的影响最大[1]。脊髓外伤后，损伤部位的DynA含量升高，可对脊髓损伤产生不利的作用，促进脊髓继发性损伤的发生与发展[2]。但迄今，有关DynA作用的受体机制尚无定论。为此，我们设计并进行了以下实验，探讨其作用的受体机制。
材料和方法
一、实验动物与试剂
健康雄性SD大鼠40只，体重300±25g。抗DynAA1-13血清(AnDynA，浓度1：3万)由本校制备[3]，与DynA1-8内啡肽、亮脑啡肽交叉反应极微(<0.01%)，与DynA1-17交叉反应为1.8%；DynA1-13、DynA2-17以及阿片肽Kappa受体拮抗剂nor-BNI均为Sigma公司产品。
, http://www.100md.com
二、实验方法
40只大鼠大腿肌内注射盐酸氯胺酮10mg/kg和腹腔注射戊巴比妥钠25mg/kg麻醉后，据Rudy改进法行蛛网膜下腔插管，插入和度使其末端至T5-6水平处[4]。18～24小时待动物苏醒，可自由活动后，去除插管时脊髓损伤的6只动物，剩余34只大鼠随机分成：对照组12只；抗血清组10只和拮抗剂组12只。同前法麻醉，所有动物据Allen法致脊髓中度损伤后立即经蛛网膜下腔插管注入：AnDyn1-1310μl(抗血清组)，nor-BNI100ng/kg(拮抗剂组)或人工脑脊液(ACsF)10μl(对照组)。注射药物均以ACsF配成10μl注射，随后用710μlACsF冲洗导管，药物注射在2分钟内完成。损伤后48小时内按统一标准，定时观察各组动物神经功能评分。伤后1～7天的功能恢复情况，据Rivlin方法测定倾斜平面临界角度变化，每天定时记录一次。伤后4周，心腔灌注处死所有动物，对损伤脊髓作病理定时研究。
, 百拇医药
三、神经功能和病理学观察指标
1. 运动功能评分：大鼠脊髓损伤后，由未知实验细切者，按如下统一标准，定时对各组动物的后肢运动功能进行评分：0分，完全瘫痪，无肌肉收缩：1分，重度瘫痪，肌张力不存在，可活动，但不能站立或站立不稳(站立维持<5秒)；2分，中度瘫痪，可长久站立，且能走或跑，但不稳；3分，正常走、跑。
2. 倾斜平面临界角度测定：大鼠脊髓损伤后期的功能恢复情况采用了Rivlin方法观察。即在一长方形木制板上垫一5mm厚的橡胶垫，板可绕下边旋转，斜面角度可以测出。将大鼠头向前，身体纵轴与斜板纵轴垂直放置，渐渐增大板与水平面间的角度，直至大鼠在恒定位置上刚好可能维持5秒，记录下这一临界角度。大鼠肢体抓握能力决定角度大小，从而反映大鼠脊髓神经功能恢复情况。
3. 组织病理评分：大鼠脊髓损伤后4周，用生理盐水、10%中性甲醛心内灌注法处死大鼠，脊髓标本取出后置10%中性甲醛液中固定1周。以打击点为中心，取1cm脊髓段脱水，石蜡包埋，边续切片，厚1010μm。每第5张切片行HE染色以寻找最大损伤部分。损伤区域最大的切片连接apollo NH3500图像工作站的20倍显微镜下，对脊髓横断面总面积，脊髓残留面积和损害面积作定量图像分析。
, 百拇医药
四、数据的统计学处理
实验数据均以均数±标准差(
±s)表示。实验组与对照组之间用t检验；多组之间的差异显著性判别用方差分析法；百分数之间的显著性检验用U检验，差别两变量的等级间是否相关用等级相关分析法。结果
一、大鼠双后肢运动功能评分的影响
大鼠麻醉、脊髓损伤前，双后肢运动机能均正常。脊髓损伤5小时后全部运动功能完全，各组后肢运动功能评分见表1。抗血清组双后肢运动功能恢复最快，拮抗剂组与对照组之间差别不显著。
表1 脊髓中度损伤后鞘内注射抗强啡肽A[1-13]备清
, http://www.100md.com
或nor-BNI对后肢功能评分的影响(鼠数) 组别及评分
鼠数
损伤后时间(h)
5
8
12
20
30
40
对照组
12
0
11
, 百拇医药
10
8
4
1
0
1
1
2
3
5
6
3
2
0
, 百拇医药
0
1
3
4
8
3
0
0
0
0
1
1
抗血清组
12
, http://www.100md.com
0
6
4
3
0
0
0
1
4
5
4
3
0
0
, http://www.100md.com
2
0
1
3
6
8
3
3
0
0*
0*△
1*
2*
7*
, http://www.100md.com
拮抗剂组
12
0
10
9
7
3
0
0
1
2
3
4
5
, 百拇医药
2
0
2
0
0
1
4
6
6
3
0
0
0
0
, 百拇医药
4*
6
*与对照组比较P<0.05，△与nor-BNI组比较P<0.05
二、对大鼠倾斜平面临界角度改变的影响
脊髓损伤后1～7天，3组运动临界角度值变化如表2。抗血清组动物临界角度增大明显快于拮抗剂组或对照组(P<0.05或P<0.01)；拮抗剂组动物临界角度显著大于对照组，但后期相关不明显。
表2 应用抗强啡肽A1~13血清或nor-BNI对脊髓损伤后倾斜临界角度的影响(
±) 组别, 百拇医药
鼠数
损伤后时间(d)
1
2
3
4
5
6
7
对照组
12
32±6
35±6
40±8
, 百拇医药
45±9
50±9
57±9
66±10
抗血清组
10
40±8*
46±8*
50±9
59±10
, 百拇医药
64±12
71±14*△
77±10*
拮抗剂线
12
38±6*
40±7*
45±7
48±8
54±10
62±14
69±15
注：表中数值单位为度。与对照组比较*P<0.05，**P<0.01；与nor-BNI组比较△P<0.05，△△P<0.01
, http://www.100md.com
三、组织病理评分
脊髓损伤后4周、3组动物脊髓有如下共同病理变化：灰质出血、液化、坏死、空洞形成，白质部分液化、残留白质环绕中央坏死空腔：空腔周边有由血管成份、神经胶质，巨噬细胞等形成的界膜(图1)；残留白质由周边至中央逐渐脱髓鞘，以近中央空腔边缘处最为明显；神经纤维、神经元肿胀。残留脊髓组织面积(主要由白质构成)，3组之间比较：抗血清组最大(1.824±0.189mm2)，显著超过拮抗剂组(1.354±0.188mm2)和对照组(0.946±0.449mm2，P均<0.05)；拮抗剂组大于对照组(P<0.05)。(图2～4)。脊髓损伤后4周，用Spearman等级相关分析，运动功能评分和脊髓残留面积在抗血清组(r=0.68, P<0.05)，拮抗剂组(r=0.67, P<0.05)和对照组(r =0.59，P<0.05)均呈正相关。
, http://www.100md.com
图1 脊髓脶伤后4周，中央空腔包含非神经元细胞如巨噬细胞神经胶质和血管成分HE80
图2 对照组大鼠脊髓中度损伤后4周,灰质大部分坏死、空腔形成HE20
图3 鞘内注射nor-BNI组大鼠脊髓中度损伤后4周，灰质部分坏死、空腔形成HE20
图4 鞘内注射抗强啡肽A1~13血清组大鼠，脊髓中度损伤后4周灰质少量坏死HE20
讨论
我们以往的实验[4,5]证实，脊髓损伤后，损伤部位DynA含量升高，且和神经功能受损、神经组织形态学改变显著相关。蛛网膜下腔注射DynA，实验动物可产生剂量依赖性驰缓性瘫痪。预先给予AnDynA，能显著改善脊髓损伤的程度。这表明过量的DynA对脊髓损伤产生了不利作用，促进了脊髓继发性损伤的发展。DynA为K阿片受体以K受体为主[6]，所以DynA在脊髓继发损伤中的作用可能经由阿片肽K受体所介导。Krumins等[7]的研究也支持这一理论。
, 百拇医药
然而Faden等[8]的研究表明，小剂量DynA导致的脊髓损伤可被纳洛酮对抗，所需剂量大于1mg/kg，大剂量DynA所致脊髓损伤不能被纳洛酮所对抗。Faden等人(1990年)发现并报告DynA2-13或DynA3-13由于氨基末端缺少赖氨酸而不具有阿片样活性，即不能与K受体结合引起效应，但这两种DynA类似物鞘内注射均能引起后肢瘫痪。这些研究提示DynA在继发性损伤中的作用除经由阿片肽K受体介导外，还可能存在非阿片样途径。
我们用了阿片肽的两种特异性拮抗物AnDynA1-13和nor-BNI，分别从阿片肽(配体)水平和阿片肽K受体水平阻断DynA的作用，观察到了作用有明显的差别。虽然nor-BNI短时间内(伤后1-2天)在一定程度上促进神经功能的恢复，使动物肢体抓握能力增强，因而临界角度升高。但无论是作用强度还是持续时间，nor-BNI与AnDynA1-13都是无法比拟的。脊髓病理的定量研究也表明：AnDynA1-13对脊髓损伤的保护作用最强，4周后脊髓残留面积最大，nor-BNI的作用次之，且两组动物4周后的运动功能评分与列留脊髓面积均成呈相关。无论是nor-BNI与AnDynA1-13都是采用药理剂量，理论上足以拮抗或中和脊髓中全部K受体及DynA。由于AnDyn1-13的功能大大超过nor-
, 百拇医药
BNI，而后者在改善神经功能中也起一定的作用，可以认为脊髓中的DanA在脊髓损伤的病理过程起重要作用，这种作用一方面是通过特异性K受体而产生的，另一方面是通过K受体以外(非阿片机制)的媒质介导的。
本研究结果提示：DynA在脊髓继发性损伤中的作用，除经由阿片肽K受体介导外，尚存在非阿片样介导途径，DynA的致瘫机理是阿片样和非阿片样联合作用的结果。
本课题为国家自然科学基金资助项目
参考文献
1 Gentile NT,Mclntos TK,Antagonists of excitatory amino acids and endogenous opioid peptides in the treatment of experimental central nervous system injury.Ann Emerg Med,1993,22:1023.
, 百拇医药
2 Eduardo F,Roberto P,Enrico M,et al,Experimental studies on spinal cord injuries in the last fifteen years. Nurol Res,1991,13:138.
3 吴德林，刘 真，林葆城，等。脑啡肽抗血清的制备。第二军医大学学报，1982，3：199。
4 本世纪明，洪新如，吴岳嵩，等。蛛网膜下腔注射强啡肽A(1~13)致大鼠部分、可逆性瘫痪的实验研究，第二军医大学学报，1994，15：335。
5 洪新如，李明，刘植珊，等。创伤后不同时间神经肽含量变人的临床观察与实验研究。中华外科杂志，1994，32：200。
6 Traynor JR,Kelley PD,Rance MJ,et al.Multiple opiate binding sites in rat spinal cord.Life Sci,1982,31:1377.
7 Krumins SA,Faden AI.Tranmatic injury alters opiate receptor binding in rat spinal cord.An Neurol,1986.19:498.
8 Faden AI,Jacobs TP.Dynorphine-related peptides cause motor dysfanction in the rat through a non-opiate action.Br J Pharmacol,1984,81:271.
(收稿：1995-03-18 修回：1995-12-19), http://www.100md.com