原发性非小细胞肺癌中c-myc癌基因的易位激活
作者：吕永杰 程书钧 郭素萍 张良泽 牟巨伟 张汝刚 韩乃君 董向阳
单位：100021 北京，中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤研究所病因室(吕永杰、程书钧、郭素萍、韩乃君、董向阳)，胸部外科(张良泽、牟巨伟、张汝刚)
关键词：肺肿瘤；基因，MYC；易位
中华医学杂志960411
目的 探讨c-myc癌基因的易位激活是否也存在于临床原发性非小细胞肺癌病例中。方法 以荧光原位杂交(FISH)为主，并结合免疫组织化学的方法，对12例人原发性人原肺癌标本进行了c-myc癌基因易位激活的研究。结果 12例原发性肺癌中2例存在c-myc癌基因易位。免疫组织化学结果显示，存在c-myc癌基因易位的病例c-myc蛋白高表达。结论 c-myc癌基因易位是导致原发性非小细胞肺癌c-myc癌基因激活的原因之一。
, 百拇医药
C-myc activation by translocation in human primary mon-small cell lung cancer Lu Yongjie, Cheng Shujun, Guo Suping, et al. Cancer Institute, CAMS&PUMC, Beijing, 100021
Objective Lung cancer is one of the most common human neoplasms. The carcinogenesis and development of lung cancer are related to activation and inactivation of many oncogenes and tumor-suppressor genes. We reported c-myc activation by translocation in SV40T-transformed human bronchial epitjhelial cells and lung cancer cell line before. In order to confirm that c-myc translocation exists in human lung cancers. Methods We appllec majorly fluorescence in situ hybridization (FISH) in combination with immuno-
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histochemistry. Results c-myc translocation was detected in two cases of the 12 primary lung cancers. Overexpression of c-myc was detected in the two cases by means of immunohistochemistry.Conclusion These results suggest that c-myc can be activated by translocation in human primary lung cancer.
(Natl Med J China, 1996, 76: 275-277)
肺癌是人类高发恶性肿瘤。研究表明，肺癌的发生涉及许多癌基因和抑癌基因的改变，其中c-myc原癌基因的激活与肺癌发生密切相关。以往发现的c-myc癌基因激活方式均为基因扩增。但许多存在c-myc癌基因异常表达的肺癌病例中，并没有发现c-myc癌基因扩增[1]。我们曾在人肺腺癌细胞系和SV40T转化的人支气管上皮细胞中发现c-myc癌基因易位[2]。而本工作则进一步证明，在人原发性肺癌中也存在c-myc癌基因易位。
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材料和方法
一、肺癌标本来源
12例肺癌手术标本来自本院胸外科，其中鳞状上皮细胞癌(鳞癌)6例，腺癌6例。12例患者均为原发性肺癌，未曾进行过放疗和化疗。年龄29~69岁。
二、方法
标本用含青霉素、链霉素、庆大霉素和制霉菌素的L15培养液反复洗涤，切碎消化，分散细胞，原代培养后供染色体制片，用于荧光原位杂交。探针标记参照文献[2]，将c-myc癌基因组DNA片段(12.5kb)标记后用于荧光原位杂交。荧光原位杂交过程参照文献[3]，并对其进行了改良[2]。免疫组织化学法参照文献[4]。
结果
一、荧光原位杂交
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12例原发性非小细胞肺癌中2例存在c-myc癌基因易位，2例存在c-myc癌基因扩增。存在易位的2例中，1例c-myc癌基因从8q易位到14q(图1)，我们用荧光显带法和IgH作探针对同一病例标本杂交，将这一结果进行了证实；另一例，c-myc癌基因易位到22q上，这一结果由c-myc和22号染色体着丝粒特异探针同时杂交而证实(图2)。存在扩增的2例，c-myc癌基因均为染色体间异位扩增，即c-myc在8号染色体以外的染色体上大量扩增。
二、免疫组织化学
用c-myc癌基因蛋白抗体进行免疫组织化学研究的9例标本中，c-myc癌基因存在易位或扩增的4例标本均呈阳性结果，而在其余5例无c-myc癌基因异常杂交的病例中，仅有1例呈阳性结果，其他4例均阴性。
图1 箭头示c-myc易位到14q上，三角示8q24上c-myc正常位置杂交
, http://www.100md.com
图2 白箭头c-myc易位到22q上，三角示8q24上c-myc政党位置杂交，黑箭头示22号着丝粒探针杂交点
讨论
易位是癌基因激活的方式之一，然而限于方法学的原因，目前发现的基因易位多见于血液系统肿瘤，在实体瘤中少见报道。肺癌中c-myc癌基因的激活较常见，以往有关肺癌中c-myc癌基因激活方式的报道主要是c-myc癌基因扩增[1，5],这只能解释少部分c-myc癌基因激活的肺癌病例。以前我们报道了应用荧光原位杂交方法在人肺癌细胞系中发现了c-myc癌基因易位[2]，为解释肺癌中c-myc癌基因激活提供了另外一种机理。在本工作中，我们采用同一技术，对12例人类原发性肺癌标本进行了研究，结果发现c-myc癌基因易位也存在于原发性肺癌中。在12例标本中，2例存在c-myc癌易位，1例c-myc癌基因易位到14q上，另一例c-myc癌基因易位到22q上，灾与在伯基特淋巴瘤中所发现的情况相似[6]。说明c-myc癌基因附近存在一个DNA易断点，并且在人体多种组织中，此部位均易受各种理化因子作用，造成c-myc癌基因易位激活，。因为目前常用于肺癌研究的方法，主要为Southern、聚合酶链反就及序列测定等分子生物学方法和单纯的细胞遗传学方法，而涉及c-myc癌基因易位的断裂点不在c-myc癌基因序列内部，所以用上述方法不易发现。本且资料中southern结果也显示，存在c-myc癌基因扩增的病例中也存在c-myc癌基因染色 体上位置的变化，说明c-myc癌基因易位(伴或不伴随c-myc癌基因扩增)在肺癌中较常发生。
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免疫组织化学结果显示，有c-myc癌基因扩增或易位的4例标本中，其c-myc组织化学亦呈阳性，说明c-myc癌基因扩增及易位均激活了c-myc癌基因的转录表达。但在无异常杂交的5例中，也有一例免疫组织化学结果阳性，提示可能还有别的c-myc癌基因激活机机理存在，当然别的基因或调控序列易位到8号染色体上c-myc癌基因附近，而引起c-myc癌基因激活的可能性也存在[6]，因为我们只检测c-myc癌基因位置的变化，可能会忽略这种易位情况。
因为小细胞肺癌患者多使用放疗和化疗，所以本组标本均为非小细胞肺癌。由于病例较少，目前还无法断定c-myc癌基因异常与临床病理类型之间的关系，尚有待今后的工作。
参考文献
1 Minna J, D'Amico D, Broers J, et al. Genetic abnormalities in huan lung cancer. In: Fortner JG,Rhoads JE, eds. Accomplishments in cancer research 1990. Philadelphia: Lippincott, 1991. 243.
, 百拇医药
2 吕永杰，程书钧，郭素萍，等.应用荧光原位杂交技术在人肺癌中发现c-myc基因易位.中华医学杂志，1995，75：214.
3 Meneil JA, Johnson CV, Carter KC, et al. Localizing DNAand RNAwithin nuclei and chromosomes by fluorescence in situ hybridization. GATA, 1991,8: 41.
4 Hsu SM, Raine L, Fanger H. Use of avidin-biotin-peroxi-dase complex (ABC) in immunoperoxidase techniques: a comparison between ABC and unlabeled antibody (PAP) procedures. J Histochem cytochem, 1981, 29: 577.
5 Little CD, Nau MM, Carney DN, et al. Ampification and expression of the c-myc oncogeng on human lung cancer cell lines. Nature, 1983, 305: 194.
6 Croce CM, Nowell PC. Molecular basis of human B cell neoplasia. Blood, 1985, 65:1.
(收稿：1995-08-23 修回：1995-12-05), 百拇医药
单位：100021 北京，中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤研究所病因室(吕永杰、程书钧、郭素萍、韩乃君、董向阳)，胸部外科(张良泽、牟巨伟、张汝刚)
关键词：肺肿瘤；基因，MYC；易位
中华医学杂志960411
目的 探讨c-myc癌基因的易位激活是否也存在于临床原发性非小细胞肺癌病例中。方法 以荧光原位杂交(FISH)为主，并结合免疫组织化学的方法，对12例人原发性人原肺癌标本进行了c-myc癌基因易位激活的研究。结果 12例原发性肺癌中2例存在c-myc癌基因易位。免疫组织化学结果显示，存在c-myc癌基因易位的病例c-myc蛋白高表达。结论 c-myc癌基因易位是导致原发性非小细胞肺癌c-myc癌基因激活的原因之一。
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C-myc activation by translocation in human primary mon-small cell lung cancer Lu Yongjie, Cheng Shujun, Guo Suping, et al. Cancer Institute, CAMS&PUMC, Beijing, 100021
Objective Lung cancer is one of the most common human neoplasms. The carcinogenesis and development of lung cancer are related to activation and inactivation of many oncogenes and tumor-suppressor genes. We reported c-myc activation by translocation in SV40T-transformed human bronchial epitjhelial cells and lung cancer cell line before. In order to confirm that c-myc translocation exists in human lung cancers. Methods We appllec majorly fluorescence in situ hybridization (FISH) in combination with immuno-
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histochemistry. Results c-myc translocation was detected in two cases of the 12 primary lung cancers. Overexpression of c-myc was detected in the two cases by means of immunohistochemistry.Conclusion These results suggest that c-myc can be activated by translocation in human primary lung cancer.
(Natl Med J China, 1996, 76: 275-277)
肺癌是人类高发恶性肿瘤。研究表明，肺癌的发生涉及许多癌基因和抑癌基因的改变，其中c-myc原癌基因的激活与肺癌发生密切相关。以往发现的c-myc癌基因激活方式均为基因扩增。但许多存在c-myc癌基因异常表达的肺癌病例中，并没有发现c-myc癌基因扩增[1]。我们曾在人肺腺癌细胞系和SV40T转化的人支气管上皮细胞中发现c-myc癌基因易位[2]。而本工作则进一步证明，在人原发性肺癌中也存在c-myc癌基因易位。
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材料和方法
一、肺癌标本来源
12例肺癌手术标本来自本院胸外科，其中鳞状上皮细胞癌(鳞癌)6例，腺癌6例。12例患者均为原发性肺癌，未曾进行过放疗和化疗。年龄29~69岁。
二、方法
标本用含青霉素、链霉素、庆大霉素和制霉菌素的L15培养液反复洗涤，切碎消化，分散细胞，原代培养后供染色体制片，用于荧光原位杂交。探针标记参照文献[2]，将c-myc癌基因组DNA片段(12.5kb)标记后用于荧光原位杂交。荧光原位杂交过程参照文献[3]，并对其进行了改良[2]。免疫组织化学法参照文献[4]。
结果
一、荧光原位杂交
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12例原发性非小细胞肺癌中2例存在c-myc癌基因易位，2例存在c-myc癌基因扩增。存在易位的2例中，1例c-myc癌基因从8q易位到14q(图1)，我们用荧光显带法和IgH作探针对同一病例标本杂交，将这一结果进行了证实；另一例，c-myc癌基因易位到22q上，这一结果由c-myc和22号染色体着丝粒特异探针同时杂交而证实(图2)。存在扩增的2例，c-myc癌基因均为染色体间异位扩增，即c-myc在8号染色体以外的染色体上大量扩增。
二、免疫组织化学
用c-myc癌基因蛋白抗体进行免疫组织化学研究的9例标本中，c-myc癌基因存在易位或扩增的4例标本均呈阳性结果，而在其余5例无c-myc癌基因异常杂交的病例中，仅有1例呈阳性结果，其他4例均阴性。
图1 箭头示c-myc易位到14q上，三角示8q24上c-myc正常位置杂交
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图2 白箭头c-myc易位到22q上，三角示8q24上c-myc政党位置杂交，黑箭头示22号着丝粒探针杂交点
讨论
易位是癌基因激活的方式之一，然而限于方法学的原因，目前发现的基因易位多见于血液系统肿瘤，在实体瘤中少见报道。肺癌中c-myc癌基因的激活较常见，以往有关肺癌中c-myc癌基因激活方式的报道主要是c-myc癌基因扩增[1，5],这只能解释少部分c-myc癌基因激活的肺癌病例。以前我们报道了应用荧光原位杂交方法在人肺癌细胞系中发现了c-myc癌基因易位[2]，为解释肺癌中c-myc癌基因激活提供了另外一种机理。在本工作中，我们采用同一技术，对12例人类原发性肺癌标本进行了研究，结果发现c-myc癌基因易位也存在于原发性肺癌中。在12例标本中，2例存在c-myc癌易位，1例c-myc癌基因易位到14q上，另一例c-myc癌基因易位到22q上，灾与在伯基特淋巴瘤中所发现的情况相似[6]。说明c-myc癌基因附近存在一个DNA易断点，并且在人体多种组织中，此部位均易受各种理化因子作用，造成c-myc癌基因易位激活，。因为目前常用于肺癌研究的方法，主要为Southern、聚合酶链反就及序列测定等分子生物学方法和单纯的细胞遗传学方法，而涉及c-myc癌基因易位的断裂点不在c-myc癌基因序列内部，所以用上述方法不易发现。本且资料中southern结果也显示，存在c-myc癌基因扩增的病例中也存在c-myc癌基因染色 体上位置的变化，说明c-myc癌基因易位(伴或不伴随c-myc癌基因扩增)在肺癌中较常发生。
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免疫组织化学结果显示，有c-myc癌基因扩增或易位的4例标本中，其c-myc组织化学亦呈阳性，说明c-myc癌基因扩增及易位均激活了c-myc癌基因的转录表达。但在无异常杂交的5例中，也有一例免疫组织化学结果阳性，提示可能还有别的c-myc癌基因激活机机理存在，当然别的基因或调控序列易位到8号染色体上c-myc癌基因附近，而引起c-myc癌基因激活的可能性也存在[6]，因为我们只检测c-myc癌基因位置的变化，可能会忽略这种易位情况。
因为小细胞肺癌患者多使用放疗和化疗，所以本组标本均为非小细胞肺癌。由于病例较少，目前还无法断定c-myc癌基因异常与临床病理类型之间的关系，尚有待今后的工作。
参考文献
1 Minna J, D'Amico D, Broers J, et al. Genetic abnormalities in huan lung cancer. In: Fortner JG,Rhoads JE, eds. Accomplishments in cancer research 1990. Philadelphia: Lippincott, 1991. 243.
, 百拇医药
2 吕永杰，程书钧，郭素萍，等.应用荧光原位杂交技术在人肺癌中发现c-myc基因易位.中华医学杂志，1995，75：214.
3 Meneil JA, Johnson CV, Carter KC, et al. Localizing DNAand RNAwithin nuclei and chromosomes by fluorescence in situ hybridization. GATA, 1991,8: 41.
4 Hsu SM, Raine L, Fanger H. Use of avidin-biotin-peroxi-dase complex (ABC) in immunoperoxidase techniques: a comparison between ABC and unlabeled antibody (PAP) procedures. J Histochem cytochem, 1981, 29: 577.
5 Little CD, Nau MM, Carney DN, et al. Ampification and expression of the c-myc oncogeng on human lung cancer cell lines. Nature, 1983, 305: 194.
6 Croce CM, Nowell PC. Molecular basis of human B cell neoplasia. Blood, 1985, 65:1.
(收稿：1995-08-23 修回：1995-12-05), 百拇医药