自身免疫性甲状腺病树突发状细胞免疫组织化学研究
作者：张会娟 白悦心 李道明 高冬玲 李惠翔 秦贵军 郭长江 张云纪 欧阳安
单位：450052 长沙，湖南医科大学第一附属医院内分泌科
关键词：
中华医学杂志960427
我们用S-100蛋白抗体ABC免疫组织化学法，对自身免疫性甲状腺疾病——桥本甲状腺炎(HT)和Graves病(GD)患者的甲状腺内树突状细胞(DC)进行研究，并对DC的浸润密度与患者血清甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、甲状腺微粒体抗体(TMAb)的值进行相关性分析，以探讨DC与甲状腺自身免疫反应的关系。
一、材料和方法
1.材料：选用本院甲状腺手术标本36例，其中HT组16例，GC组14例，正常对照组6例。标本为取自腺瘤周围的正常甲状腺组织。
, http://www.100md.com
2.方法：将4µm厚连续切片行HE染色和ABC免疫组织化学染色。兔抗牛S-100蛋白抗体为日本国株式会社免疫生物研究所产品，ABC试剂盒为美国Vector公司产品。以甲状腺间质神经纤维束作阳性对照，正常兔血清替代S-100蛋白抗体作阴性对照。应用普通光学显微镜，选择S-100蛋白阳性DC最多的视野，计算10个高倍视野(×400)内DC数，求其平均值。DC均数<1为(-)1~10为(+)，>10而不足20为(++)，≥20为“(+++)”。甲状腺自身抗体的检测采用放射免疫分析法。正常值：TGAb<30%，TMAb<15%。用秩和检验比较各组甲状腺内DC的浸润密度，用Spearman等级相关分析甲状腺内DC的浸润密度与血清自身抗体值的相关性。
二、结果
1.DC的形态与分布：S-100蛋白阳性DC为带有树枝状突起的棕黄色细胞，其胞浆与胞核均着色，胞核不规则(图1)。正常甲状腺组织内未DC，在16例HT患者15例和14例GC患者12例甲状腺组织内，可观察到DC，其中大多数DC与其周围甲状腺上皮细胞或浸润淋巴细胞密切接触(图1，2)，DC常呈壮状分布(图1)。
, 百拇医药
箭头示树突状细胞与甲状腺上皮细胞密切接触，呈灶状分布，ABC法 ×1000
图1 Gravesu病甲状腺内S-100蛋白阳性树突状细胞
箭头所示与浸润淋巴细胞和甲状腺上皮细胞密切接触，ABC法 ×1000
图2 Graves病甲状腺内S-100蛋白阳性树突状细胞
2.DC的浸润密度：HT组，(-)1例，(+)3例，(++)5例，(+++)7例：GD组，(-)5例，(+)4例，(++)2例，(+++)3例；正常对照组6例均为(-)。HT组DC的浸润密度高于GD组，3组相比差异有非常显著和显著意义。
3.D牟浸润密度与血清自身抗体之间的关系：HT组DC的浸润密度与血清TGAb及TMAb值高度正相关(TGAb γ=0.88，TMAb t=0.77，P<0.01)。GD组二者之间则缺乏明显相关性(TGAb，γ=0.44，TMAb，γ=0.53，p均>0.05)。
, 百拇医药
三、讨论
Kabel等[1]用OKIa单克隆抗体(抗HLA-DR抗原)研究发现，正常甲状腺组织内DC极少见，且孤立存在，只有少而短的细胞质突起，并证实这些DC绝大多数处于非活化状态。在正常甲状腺组织内，我们未观察到S-100蛋白阳性DC。S-100蛋白属于酸性钙结合蛋白，有人推测S-100蛋白阳性DC为活化的DC亚群[2]，DC可能通过S-100蛋白来调节T淋巴细胞内钙离子而激活T淋巴细胞[3]。本研究提示，在自身免疫性甲状腺疾病患者的甲状腺内，DC异常增多。DC似乎移动于甲状腺上皮细胞之间，与上皮细胞直接接触，捕获自身抗原，然后将其递呈给局部浸润的淋巴细胞，触发甲状腺自身免疫反应。
本组结果显示，HT患者甲状腺内DC的浸润密度与血清TGAb、TMAb值高度正相关，这说明HT患者的体液免疫紊乱与其甲状腺内异常增多的DC有密切关系。GD患者甲状腺内DC的浸润密度与其血清TGAb及TMAb值间缺乏明确相关性，提示DC与GD患者的体液免疫紊乱关系不密切。因GD患者的体液免疫紊乱并非主要表现为血中TGAb或TMAb的变化，所以尚难定论。GC患者甲状腺内DC异常增多，表明细胞免疫在GD发病中起着重要作用。
, 百拇医药
参考文献
1 Kabel PJ, Vorbij HAM, Haan MD, et al. Intrathyroidal dendritic cells. J Clin Endorinol Metab, 1988, 66: 199.
2 谢幸,高永良,石一复.宫颈癌S-100+ Langerhans细胞的检测.中华肿瘤杂志,1990,12:406.
3 Tay SK, Jenkins D, Maddox P, et al. Subpopulations of Langerhans cells in cervical neoplasia. Br J Obster Gynaecol, 1987, 94: 10.
(收稿：1995-01-06 修回：1995-12-01), 百拇医药
单位：450052 长沙，湖南医科大学第一附属医院内分泌科
关键词：
中华医学杂志960427
我们用S-100蛋白抗体ABC免疫组织化学法，对自身免疫性甲状腺疾病——桥本甲状腺炎(HT)和Graves病(GD)患者的甲状腺内树突状细胞(DC)进行研究，并对DC的浸润密度与患者血清甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、甲状腺微粒体抗体(TMAb)的值进行相关性分析，以探讨DC与甲状腺自身免疫反应的关系。
一、材料和方法
1.材料：选用本院甲状腺手术标本36例，其中HT组16例，GC组14例，正常对照组6例。标本为取自腺瘤周围的正常甲状腺组织。
, http://www.100md.com
2.方法：将4µm厚连续切片行HE染色和ABC免疫组织化学染色。兔抗牛S-100蛋白抗体为日本国株式会社免疫生物研究所产品，ABC试剂盒为美国Vector公司产品。以甲状腺间质神经纤维束作阳性对照，正常兔血清替代S-100蛋白抗体作阴性对照。应用普通光学显微镜，选择S-100蛋白阳性DC最多的视野，计算10个高倍视野(×400)内DC数，求其平均值。DC均数<1为(-)1~10为(+)，>10而不足20为(++)，≥20为“(+++)”。甲状腺自身抗体的检测采用放射免疫分析法。正常值：TGAb<30%，TMAb<15%。用秩和检验比较各组甲状腺内DC的浸润密度，用Spearman等级相关分析甲状腺内DC的浸润密度与血清自身抗体值的相关性。
二、结果
1.DC的形态与分布：S-100蛋白阳性DC为带有树枝状突起的棕黄色细胞，其胞浆与胞核均着色，胞核不规则(图1)。正常甲状腺组织内未DC，在16例HT患者15例和14例GC患者12例甲状腺组织内，可观察到DC，其中大多数DC与其周围甲状腺上皮细胞或浸润淋巴细胞密切接触(图1，2)，DC常呈壮状分布(图1)。
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箭头示树突状细胞与甲状腺上皮细胞密切接触，呈灶状分布，ABC法 ×1000
图1 Gravesu病甲状腺内S-100蛋白阳性树突状细胞
箭头所示与浸润淋巴细胞和甲状腺上皮细胞密切接触，ABC法 ×1000
图2 Graves病甲状腺内S-100蛋白阳性树突状细胞
2.DC的浸润密度：HT组，(-)1例，(+)3例，(++)5例，(+++)7例：GD组，(-)5例，(+)4例，(++)2例，(+++)3例；正常对照组6例均为(-)。HT组DC的浸润密度高于GD组，3组相比差异有非常显著和显著意义。
3.D牟浸润密度与血清自身抗体之间的关系：HT组DC的浸润密度与血清TGAb及TMAb值高度正相关(TGAb γ=0.88，TMAb t=0.77，P<0.01)。GD组二者之间则缺乏明显相关性(TGAb，γ=0.44，TMAb，γ=0.53，p均>0.05)。
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三、讨论
Kabel等[1]用OKIa单克隆抗体(抗HLA-DR抗原)研究发现，正常甲状腺组织内DC极少见，且孤立存在，只有少而短的细胞质突起，并证实这些DC绝大多数处于非活化状态。在正常甲状腺组织内，我们未观察到S-100蛋白阳性DC。S-100蛋白属于酸性钙结合蛋白，有人推测S-100蛋白阳性DC为活化的DC亚群[2]，DC可能通过S-100蛋白来调节T淋巴细胞内钙离子而激活T淋巴细胞[3]。本研究提示，在自身免疫性甲状腺疾病患者的甲状腺内，DC异常增多。DC似乎移动于甲状腺上皮细胞之间，与上皮细胞直接接触，捕获自身抗原，然后将其递呈给局部浸润的淋巴细胞，触发甲状腺自身免疫反应。
本组结果显示，HT患者甲状腺内DC的浸润密度与血清TGAb、TMAb值高度正相关，这说明HT患者的体液免疫紊乱与其甲状腺内异常增多的DC有密切关系。GD患者甲状腺内DC的浸润密度与其血清TGAb及TMAb值间缺乏明确相关性，提示DC与GD患者的体液免疫紊乱关系不密切。因GD患者的体液免疫紊乱并非主要表现为血中TGAb或TMAb的变化，所以尚难定论。GC患者甲状腺内DC异常增多，表明细胞免疫在GD发病中起着重要作用。
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参考文献
1 Kabel PJ, Vorbij HAM, Haan MD, et al. Intrathyroidal dendritic cells. J Clin Endorinol Metab, 1988, 66: 199.
2 谢幸,高永良,石一复.宫颈癌S-100+ Langerhans细胞的检测.中华肿瘤杂志,1990,12:406.
3 Tay SK, Jenkins D, Maddox P, et al. Subpopulations of Langerhans cells in cervical neoplasia. Br J Obster Gynaecol, 1987, 94: 10.
(收稿：1995-01-06 修回：1995-12-01), 百拇医药