创伤兔血清免疫抑制物对巨噬细胞功能的影响
作者：李磊 王正国 胡承香 张玉纯
单位：630042 重庆，第三军医大学大坪医院野战外科研究所
关键词：
中华医学杂志960422
我们以往的研究发现，在闭合性粉碎性骨折家兔血清中有一分子量约9 000的异常蛋白，初步研究证实，该异常蛋白对正常淋巴细胞转化及白细胞介素2(IL-2)诱生具有明显的抑制作用[1]。在本研究中我们继续观察了该抑制物对正常小鼠巨噬细胞功能的影响。报道如下。
一、材料和方法
1.创伤兔模型制作及血清免疫抑制物的分离提取：方法详见参考文献[1]。实验分创伤组和正常对照组，每组10只兔。
, http://www.100md.com
2.巨噬细胞吞噬活性测定：选用Balb/c纯系小鼠，腹腔注入1%硫代乙醇酸钠肉汤培养基1ml，4天后收集腹腔巨噬细胞，经贴壁洗去未粘附细胞后，加入绵羊红细胞，采用无色孔雀绿吞噬着色法，测定巨噬细胞对绵羊细胞吞噬能力。
3.巨噬细胞培养上清前列腺素E2(PGE2)含量测定：无菌取Balc/c小鼠腹腔巨噬细胞，去除未粘附细胞，加入血清抑制物后，置液体蛋白质补充剂(LPS)刺激培养24小时，离心取上清检测PGE2。
4.白细胞介素(IL-1)诱生及活性测定：将无菌收集的腹腔巨噬细胞，按胸腺细胞增殖法检测IL-1诱生水平。
二、结果
1.对巨噬细胞吞噬功能的影响：在粘附前及粘附后两组分别加入抑制物。结果表明：加入抑制组巨噬细胞吞噬作用明显下降；巨噬细胞吞噬活性以吸光度(A)值表示，正常组为0.58±0.15；创伤组为0.44±0.13。贴壁4小时洗去未粘附细胞后，加入抑制物组吞噬活性明显强于粘附前加入抑制组吞噬活性明显强于粘附前加入抑制组，吸光度(A)值，正常组0.69±0.12。表明该抑制物对巨噬细胞的粘附活性具有抑制作用。
, 百拇医药
2.创伤血清抑制物对巨噬细胞PGE2合成的影响：将创办伤血清抑制物与腹腔巨噬细胞共同孵育24小时后，检测其上清PGE2，正常组为89±52pg创伤组为292±81pg。表明，抑制物可明显刺激巨噬细胞PGE2合成，达对照组的324%。
3.创伤血清抑制物对巨噬细胞IL-1生成的影响：创血清抑制物与腹腔巨噬细胞共同培养48小时后，取上清测定IL-1活性。正常组为5 453±3 380/分钟，创伤组为8 993±6 094/分钟。结果表明抑制物可刺激巨噬细胞IL-1生成(为对照组的165%)。
三、讨论
已证实，严惩烧伤病人血清存在导致机体免疫反应低下的抑制物，其分子量介于4 000~
10 000[2，3]。我们最近研究发现[1]，巨噬细胞的贴壁、吞噬和分泌功能在诱导免疫反应的过程中起着承上启下的关键作用。我们的观察结果表明，与贴壁的巨噬细胞共同培养4小时后，巨噬细胞对绵羊细胞的吞噬作用明显下降，而与未贴壁的巨噬细胞培养4小时后，巨噬细胞的吞噬作用下降更为明显。显然，该抑制物对巨噬细胞的粘附和吞噬均有明显的抑制作用。此外，在与抑制物共同培养的巨噬细胞上清中PGE2水平为正常对照的327%。高水平的PGE2无疑对巨噬细胞的贴壁、吞噬，以及其他免疫反应存在抑制作用。本实验结果提示，创伤血清免疫抑制物可能通过刺激PGE2的合成对机体免疫反应产生抑制作用。
, 百拇医药
我们曾观察到，该抑制物对正常淋巴细胞IL-2的合成具有强烈的抑制作用。在本研究中，该抑制物对巨噬细胞合成IL-1能力具有明显的刺激作用，表明，IL-2合成受抑可能并非IL-1产生不足之故。同时也说明创伤血清免疫抑制物对机体的免疫功能可能呈双向性作用。
本课题为国家自然科学基金资助项目
参考文献
1 李磊,王正国,胡承香,等.创伤血清免疫抑制物对淋巴细胞功能的影响.中华创伤杂志,1995,11:211
2 Ninnemann JL, Condie JT, davis SE, et al. Isolation of immunosuppressive serum components following thermal injury. J Trauma, 1982, 22: 837.
3 Ozkan AN, Ninnemnn JL. Progress in the charachterization of an immunosuppressive glycopeptide from patients with major thermal injury. JBCR, 1986, 7: 388.
(收稿：1995-03-25 修回：1996-01-02), 百拇医药
单位：630042 重庆，第三军医大学大坪医院野战外科研究所
关键词：
中华医学杂志960422
我们以往的研究发现，在闭合性粉碎性骨折家兔血清中有一分子量约9 000的异常蛋白，初步研究证实，该异常蛋白对正常淋巴细胞转化及白细胞介素2(IL-2)诱生具有明显的抑制作用[1]。在本研究中我们继续观察了该抑制物对正常小鼠巨噬细胞功能的影响。报道如下。
一、材料和方法
1.创伤兔模型制作及血清免疫抑制物的分离提取：方法详见参考文献[1]。实验分创伤组和正常对照组，每组10只兔。
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2.巨噬细胞吞噬活性测定：选用Balb/c纯系小鼠，腹腔注入1%硫代乙醇酸钠肉汤培养基1ml，4天后收集腹腔巨噬细胞，经贴壁洗去未粘附细胞后，加入绵羊红细胞，采用无色孔雀绿吞噬着色法，测定巨噬细胞对绵羊细胞吞噬能力。
3.巨噬细胞培养上清前列腺素E2(PGE2)含量测定：无菌取Balc/c小鼠腹腔巨噬细胞，去除未粘附细胞，加入血清抑制物后，置液体蛋白质补充剂(LPS)刺激培养24小时，离心取上清检测PGE2。
4.白细胞介素(IL-1)诱生及活性测定：将无菌收集的腹腔巨噬细胞，按胸腺细胞增殖法检测IL-1诱生水平。
二、结果
1.对巨噬细胞吞噬功能的影响：在粘附前及粘附后两组分别加入抑制物。结果表明：加入抑制组巨噬细胞吞噬作用明显下降；巨噬细胞吞噬活性以吸光度(A)值表示，正常组为0.58±0.15；创伤组为0.44±0.13。贴壁4小时洗去未粘附细胞后，加入抑制物组吞噬活性明显强于粘附前加入抑制组吞噬活性明显强于粘附前加入抑制组，吸光度(A)值，正常组0.69±0.12。表明该抑制物对巨噬细胞的粘附活性具有抑制作用。
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2.创伤血清抑制物对巨噬细胞PGE2合成的影响：将创办伤血清抑制物与腹腔巨噬细胞共同孵育24小时后，检测其上清PGE2，正常组为89±52pg创伤组为292±81pg。表明，抑制物可明显刺激巨噬细胞PGE2合成，达对照组的324%。
3.创伤血清抑制物对巨噬细胞IL-1生成的影响：创血清抑制物与腹腔巨噬细胞共同培养48小时后，取上清测定IL-1活性。正常组为5 453±3 380/分钟，创伤组为8 993±6 094/分钟。结果表明抑制物可刺激巨噬细胞IL-1生成(为对照组的165%)。
三、讨论
已证实，严惩烧伤病人血清存在导致机体免疫反应低下的抑制物，其分子量介于4 000~
10 000[2，3]。我们最近研究发现[1]，巨噬细胞的贴壁、吞噬和分泌功能在诱导免疫反应的过程中起着承上启下的关键作用。我们的观察结果表明，与贴壁的巨噬细胞共同培养4小时后，巨噬细胞对绵羊细胞的吞噬作用明显下降，而与未贴壁的巨噬细胞培养4小时后，巨噬细胞的吞噬作用下降更为明显。显然，该抑制物对巨噬细胞的粘附和吞噬均有明显的抑制作用。此外，在与抑制物共同培养的巨噬细胞上清中PGE2水平为正常对照的327%。高水平的PGE2无疑对巨噬细胞的贴壁、吞噬，以及其他免疫反应存在抑制作用。本实验结果提示，创伤血清免疫抑制物可能通过刺激PGE2的合成对机体免疫反应产生抑制作用。
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我们曾观察到，该抑制物对正常淋巴细胞IL-2的合成具有强烈的抑制作用。在本研究中，该抑制物对巨噬细胞合成IL-1能力具有明显的刺激作用，表明，IL-2合成受抑可能并非IL-1产生不足之故。同时也说明创伤血清免疫抑制物对机体的免疫功能可能呈双向性作用。
本课题为国家自然科学基金资助项目
参考文献
1 李磊,王正国,胡承香,等.创伤血清免疫抑制物对淋巴细胞功能的影响.中华创伤杂志,1995,11:211
2 Ninnemann JL, Condie JT, davis SE, et al. Isolation of immunosuppressive serum components following thermal injury. J Trauma, 1982, 22: 837.
3 Ozkan AN, Ninnemnn JL. Progress in the charachterization of an immunosuppressive glycopeptide from patients with major thermal injury. JBCR, 1986, 7: 388.
(收稿：1995-03-25 修回：1996-01-02), 百拇医药