术后早期腹腔内化疗对大鼠小肠吻合口愈合的影响
作者：陈 军 尹浩然 林言箴
单位：200025 上海第二医科大学附属瑞金医院外科
关键词：
中华医学杂志970925 进展期胃癌作根治性或非根治性切除后，会造成腹腔内游离癌细胞和微小癌栓的播散种植，需要行术后早期腹腔内化疗。但化疗是否会对胃肠吻合口的愈合产生影响。为此，我们设计观察了术后早期腹腔内化疗对空肠吻合口愈合的影响，为临床应用提供理论和实验依据。
一、材料和方法
1.实验动物：SD大鼠58只(上海市计划生育研究所提供)，体重175～280克，雌雄不限。
2.手术方法：术前禁食12小时，自由饮水。2.5%戊巴比妥钠腹腔麻醉后，腹部备皮消毒，取上腹部正中切口。切除大网膜，距十二指肠空肠交界5～7 cm处横断空肠，以8-0号无损伤缝线作间断单层端端吻合。0号丝线间断全层关腹。术后置5～6只大鼠于一笼，标准条件下饲养。
, 百拇医药
3.腹腔化疗：术后将大鼠随机分为5组。A组12只为乳酸林格氏液对照组；B组12只、C组12只、D组12只、E组10只，这4组表阿霉素剂量 分别为0.2、0.4、0.8、1.6 mg*kg-1*d-1。上述剂量的表阿霉素均用乳酸钠林格氏液按40 ml/kg稀释，预热至37℃后腹腔注射，术后当天起，每天1次，连续5天。所有实验动物每天于同一时间内给药。
4.观察指标：(1)动物死亡率和剖腹探查：所有动物于术后第14天，在腹腔麻醉下行剖腹术，检查腹腔脏器和吻合口情况(二周内死亡动物行同样解剖)。(2)吻合口破裂压：将吻合口空肠段(5 cm)的一端接水银压力计，另一端接注射器，用生理盐水以每分钟2 ml的速度灌注，记录肠壁破裂(漏)时的压力[1](kPa)。用同法测定吻合口远侧之相邻肠段(5 cm)破裂压，以作对照。(3)羟脯氨酸含量[2]：测定吻合口及相邻肠管的羟脯氨酸含量(μg/mg干组织 )。(4)吻合口胶原纤维直径：每组取2个吻合口标本，以2%戊二醛固定，环氧树脂618包埋，800A超薄切片，染色。于H500透射电镜放大35 000倍观察摄片后，采用VIDAS图像分析仪测量胶原纤维直径。(5)吻合口病理组织学：每组取2个吻合口标本，常规切片，HE染色，光镜下观察吻合口病理组织学变化。(6)腹主动脉采血，行白细胞计数和肝功能检测。
, 百拇医药
5.所有资料用t检验进行统计学分析。
二、结果
1.死亡率和剖腹检查：E组10只大鼠均在术后5～10天内因吻合口漏(40%)及肠坏死等而全部死亡。A组及腹腔化疗B、C、D组的死亡率均为0。剖腹见空肠吻合口愈合良好，无腹腔粘连，无腹水及化学性腹膜炎等改变；个别动物吻合口近端及十二指肠呈轻度扩张。
2.吻合口破裂压：吻合口肠段及相邻肠段破裂压的平均值见表1。
表1 吻合口及相邻肠段破裂压平均值(kPa
±s) 组 别
鼠数
吻合口肠段
, http://www.100md.com
相邻肠段
P值
A
12
28.7±3.3
27.1±2.4
>0.05
B
12
30.5±4.6
28.5±4.4
>0.05
C
, 百拇医药
12
27.1±3.2
27.1±4.5
>0.05
D
12
28.2±4.9
25.9±3.7
>0.05
3.羟脯氨酸含量(表2)表2 羟脯氨酸平均含量(μg/mg干组织±s) 组别
鼠数
, 百拇医药
吻合口
相邻肠段
A
11
18±7
14±4
B
11
17±8
12±4
C
10
20±7
, http://www.100md.com 14±7
D
10
16±5
12±4*
注：与A组比* P<0.05
4.吻合口胶原纤维直径：胶原纤维呈束簇状不规则交错排列，结构紧密，胶原纤维间可见成纤维细胞分布，胶原纤维横断面近似圆形。将电镜负片置于VIDAS图像分析仪下，测量每组胶原纤维直径150根，A、B、C、D组平均值分别为68±7 nm，61±9 nm，56±10 nm，53±7 nm。B、C、D三组与A组相比差异有非常显著意义(P<0.001)。
5.吻合口病理组织学：光镜下见各组吻合口均愈合良好，肠壁对合整齐，层次分明，伴有血管、纤维组织增生和少量脂肪组织；吻合口局部未见溃疡、坏死灶，亦无明显炎症细胞浸润。
, http://www.100md.com
6.术后第14天血白细胞计数，A、B、C、D 4组间差异无统计学意义(P>0.05)。各组动物肝功能值均在正常范围内。
三、讨论
化疗药物可引起血循环中白细胞和血小板的减少，导致创伤局部巨噬细胞、成纤维细胞、白细胞等各种因子的相应减少，随之创伤部位的结缔组织趋化性受抑制，细胞增殖率下降，胶原合成减少[3]。参照创伤愈合的生理过程，对结缔组织细胞产生趋化、增殖等刺激作用的各种因子，是在创伤修复的最初10天内出现，即创伤愈合的早期需要这些因子的参与。而抗癌药对骨髓抑制作用则通常在给药后1～2周以上才产生，因此术后进行合适的早期化疗，按理不致影响创伤的愈合。
本研究采用对胃癌有效率较高的表阿霉素，进行大鼠空肠吻合术后早期腹腔内化疗。结果表明，随着表阿霉素剂量的增加，吻合口胶原纤维直径有所缩小。提示吻合口强度主要和胶原的含量和胶原纤维的排列结构有关，而与胶原纤维直径则无明显相关。
, http://www.100md.com
本研究的结果提示，术后早期腹腔内化疗只要剂量恰当，就不致引起吻合口胶 原合成障碍和强度降低。
参考文献
1 Fumagalli U, Trabucchi E, Soligo M, et al. Effects of intraperitoneal chemotherapy on anastomotic healing in the rat. J Surg Res, 1991,50：82.
2 许志勤，高兰兴.组织羟脯氨酸测定方法的改进.解放军预防医学杂志，1990，8：40.
3 Salomon GD, Kasid A, Bernstein E, et al. Gene expression in normal and doxorubicin-impaired wounds: Importance of transforming growth factor-beta. Surgery, 1990,108：318.
(收稿：1996-08-15 修回：1997-04-12), http://www.100md.com
单位：200025 上海第二医科大学附属瑞金医院外科
关键词：
中华医学杂志970925 进展期胃癌作根治性或非根治性切除后，会造成腹腔内游离癌细胞和微小癌栓的播散种植，需要行术后早期腹腔内化疗。但化疗是否会对胃肠吻合口的愈合产生影响。为此，我们设计观察了术后早期腹腔内化疗对空肠吻合口愈合的影响，为临床应用提供理论和实验依据。
一、材料和方法
1.实验动物：SD大鼠58只(上海市计划生育研究所提供)，体重175～280克，雌雄不限。
2.手术方法：术前禁食12小时，自由饮水。2.5%戊巴比妥钠腹腔麻醉后，腹部备皮消毒，取上腹部正中切口。切除大网膜，距十二指肠空肠交界5～7 cm处横断空肠，以8-0号无损伤缝线作间断单层端端吻合。0号丝线间断全层关腹。术后置5～6只大鼠于一笼，标准条件下饲养。
, 百拇医药
3.腹腔化疗：术后将大鼠随机分为5组。A组12只为乳酸林格氏液对照组；B组12只、C组12只、D组12只、E组10只，这4组表阿霉素剂量 分别为0.2、0.4、0.8、1.6 mg*kg-1*d-1。上述剂量的表阿霉素均用乳酸钠林格氏液按40 ml/kg稀释，预热至37℃后腹腔注射，术后当天起，每天1次，连续5天。所有实验动物每天于同一时间内给药。
4.观察指标：(1)动物死亡率和剖腹探查：所有动物于术后第14天，在腹腔麻醉下行剖腹术，检查腹腔脏器和吻合口情况(二周内死亡动物行同样解剖)。(2)吻合口破裂压：将吻合口空肠段(5 cm)的一端接水银压力计，另一端接注射器，用生理盐水以每分钟2 ml的速度灌注，记录肠壁破裂(漏)时的压力[1](kPa)。用同法测定吻合口远侧之相邻肠段(5 cm)破裂压，以作对照。(3)羟脯氨酸含量[2]：测定吻合口及相邻肠管的羟脯氨酸含量(μg/mg干组织 )。(4)吻合口胶原纤维直径：每组取2个吻合口标本，以2%戊二醛固定，环氧树脂618包埋，800A超薄切片，染色。于H500透射电镜放大35 000倍观察摄片后，采用VIDAS图像分析仪测量胶原纤维直径。(5)吻合口病理组织学：每组取2个吻合口标本，常规切片，HE染色，光镜下观察吻合口病理组织学变化。(6)腹主动脉采血，行白细胞计数和肝功能检测。
, 百拇医药
5.所有资料用t检验进行统计学分析。
二、结果
1.死亡率和剖腹检查：E组10只大鼠均在术后5～10天内因吻合口漏(40%)及肠坏死等而全部死亡。A组及腹腔化疗B、C、D组的死亡率均为0。剖腹见空肠吻合口愈合良好，无腹腔粘连，无腹水及化学性腹膜炎等改变；个别动物吻合口近端及十二指肠呈轻度扩张。
2.吻合口破裂压：吻合口肠段及相邻肠段破裂压的平均值见表1。
表1 吻合口及相邻肠段破裂压平均值(kPa
±s) 组 别鼠数
吻合口肠段
, http://www.100md.com
相邻肠段
P值
A
12
28.7±3.3
27.1±2.4
>0.05
B
12
30.5±4.6
28.5±4.4
>0.05
C
, 百拇医药
12
27.1±3.2
27.1±4.5
>0.05
D
12
28.2±4.9
25.9±3.7
>0.05
3.羟脯氨酸含量(表2)表2 羟脯氨酸平均含量(μg/mg干组织
±s) 组别鼠数
, 百拇医药
吻合口
相邻肠段
A
11
18±7
14±4
B
11
17±8
12±4
C
10
20±7
, http://www.100md.com 14±7
D
10
16±5
12±4*
注：与A组比* P<0.05
4.吻合口胶原纤维直径：胶原纤维呈束簇状不规则交错排列，结构紧密，胶原纤维间可见成纤维细胞分布，胶原纤维横断面近似圆形。将电镜负片置于VIDAS图像分析仪下，测量每组胶原纤维直径150根，A、B、C、D组平均值分别为68±7 nm，61±9 nm，56±10 nm，53±7 nm。B、C、D三组与A组相比差异有非常显著意义(P<0.001)。
5.吻合口病理组织学：光镜下见各组吻合口均愈合良好，肠壁对合整齐，层次分明，伴有血管、纤维组织增生和少量脂肪组织；吻合口局部未见溃疡、坏死灶，亦无明显炎症细胞浸润。
, http://www.100md.com
6.术后第14天血白细胞计数，A、B、C、D 4组间差异无统计学意义(P>0.05)。各组动物肝功能值均在正常范围内。
三、讨论
化疗药物可引起血循环中白细胞和血小板的减少，导致创伤局部巨噬细胞、成纤维细胞、白细胞等各种因子的相应减少，随之创伤部位的结缔组织趋化性受抑制，细胞增殖率下降，胶原合成减少[3]。参照创伤愈合的生理过程，对结缔组织细胞产生趋化、增殖等刺激作用的各种因子，是在创伤修复的最初10天内出现，即创伤愈合的早期需要这些因子的参与。而抗癌药对骨髓抑制作用则通常在给药后1～2周以上才产生，因此术后进行合适的早期化疗，按理不致影响创伤的愈合。
本研究采用对胃癌有效率较高的表阿霉素，进行大鼠空肠吻合术后早期腹腔内化疗。结果表明，随着表阿霉素剂量的增加，吻合口胶原纤维直径有所缩小。提示吻合口强度主要和胶原的含量和胶原纤维的排列结构有关，而与胶原纤维直径则无明显相关。
, http://www.100md.com
本研究的结果提示，术后早期腹腔内化疗只要剂量恰当，就不致引起吻合口胶 原合成障碍和强度降低。
参考文献
1 Fumagalli U, Trabucchi E, Soligo M, et al. Effects of intraperitoneal chemotherapy on anastomotic healing in the rat. J Surg Res, 1991,50：82.
2 许志勤，高兰兴.组织羟脯氨酸测定方法的改进.解放军预防医学杂志，1990，8：40.
3 Salomon GD, Kasid A, Bernstein E, et al. Gene expression in normal and doxorubicin-impaired wounds: Importance of transforming growth factor-beta. Surgery, 1990,108：318.
(收稿：1996-08-15 修回：1997-04-12), http://www.100md.com