胃癌微卫星不稳定性及其临床意义
作者：周晓东 房殿春 罗元辉 鲁 荣 王东旭
单位：630038 重庆，第三军医大学西南医院消化科
关键词：
中华医学杂志971115 为了探讨微卫星不稳定性(microsatellite instability，MSI)在胃癌发生发展中的作用，我们采用PCR为基础的方法对胃癌组织的MSI进行了研究。
一、对象与方法
1.标本：50例胃癌均为我院1994年1月～1996年7月手术切除标本。手术切下肿瘤后立即收集癌及正常组织，置-80℃冰箱保存备用。
2.DNA提取：参照文献[1]以苯酚、氯仿抽提法提取基因组DNA。
, http://www.100md.com 3.MSI分析：选用mfd26、mfd41、D17s799、D5s409四个位点，引物均由上海细胞生物研究所合成，D17s799引物序列由Garde博士提供，采用PCR方法扩增微卫星DNA，扩增产物在1.5%琼脂糖(北京中山生物公司产品)上电泳证实无杂带后，以首次扩增产物为模板，另加0.8μlα-32PdCTP进行第二次扩增，取扩增产物5μl 95℃变性3分钟后快速冷却，在10%的聚丙烯酰胺凝胶上(含7mol/L尿素)电泳(55W)2～4小时后，于-80℃下行放射自显影。
4.结果分析：与正常组织比较，胃癌组织DNA等位片段发生缺失或有额外的等位片段即可判断为MSI，MSI阳性病例经再次PCR证实。
二、结果
1.胃癌MSI检出率：50例胃癌中mfd26位点MSI检出率为42% (21/50)；mfd41位点为38%(19/50)；D5s409为44% (22/50)；D17s799为44%(22/50)。若将以上位点综合分析，MSI总检出率为66%(33/50)(附图)。3例早期胃癌MSI均阳性，进展期胃癌MSI阳性率为63.8%(30/47)。
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2.MSI与临床病理参数的关系：mfd26位点Ⅰ～Ⅱ期胃癌MSI阳性率显著高于Ⅲ～Ⅳ期胃癌(P<0.05)；mfd41位点中高分化腺癌MSI阳性率显著高于低分化腺癌(P<0.05)，Ⅰ～Ⅱ期胃癌阳性率显著高于Ⅲ～Ⅳ期胃癌(P<0.05)；D17s799和D5s409位点高中分化腺癌和无淋巴结转移组MSI检出率分别显著高于低分化癌和有淋巴结转移组(P<0.05和0.01)。若将以上4个位点综合分析，中-高分化腺癌MSI阳性率为93.3%，显著高于低分化腺癌(51.6%)(P<0.05)，无淋巴结转移组MSI阳性率(88.0%)显著高于有淋巴结转移组(44.0%)(P<0.01)，无浆膜浸润组MSI阳性率(85.0%)显著高于有浆膜浸润组(53.3%)(P<0.05)。
N：正常胃粘膜组织；T：胃癌组织；(1) mfd 26位点；(2) mfd41位点；(3) D17S799；(4)D5S409
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附图 胃癌组织MSI
三、讨论
微卫星是由2～6个核苷酸组成、具有高度多态性、简单串联排列而成的核苷酸重复序列，广泛存在于原核及真核细胞的基因组中。MSI是指由于复制错误引起的简单重复序列的改变。国外报道胃癌MSI发生率在18%～39%之间[2，3]。我们的研究结果显示胃癌MSI发生率为66%，3例早期胃癌MSI均阳性，提示在胃癌的发生中MSI起重要作用，早期胃癌MSI发生率可能较高。
胃癌发生部位与MSI的关系文献报告不尽一致。Seruca等[4]报告81.8%的MSI发生于胃窦部胃癌，而贲门癌则无MSI。本研究显示各部位胃癌之间MSI发生率差异无显著意义。Dosantos等[5]的研究结果同我们一致。造成上述差异的原因可能与检测微卫星位点、数目及病例选择的差异有关。国外研究显示，高分化腺癌MSI阳性率显著高于低分化腺癌，肠型胃癌MSI阳性率高于胃型胃癌。我们的研究结果为中-高分化腺癌MSI阳性率显著高于低分化腺癌，但胃型与肠型胃癌MSI阳性率之间则无显著差异，提示MSI阳性胃癌分化程度高，恶性度相对较低。我们的研究结果还表明mfd26和mfd41位点Ⅰ-Ⅱ期胃癌MSI阳性率显著高于Ⅲ-Ⅳ期胃癌；D17s799和D5s409位点无淋巴结转移胃癌MSI阳性率显著高于有淋巴结转移的胃癌。若将4个位点综合分析，无淋巴结转移和无浆膜浸润胃癌的MSI阳性率显著高于有淋巴结转移和浆膜浸润组，提示MSI阳性胃癌预后较好，检测胃癌组织MSI可能有助于评估胃癌患者的预后。
, 百拇医药
本课题为国家自然科学基金资助项目
参考文献
1 Zhuang ZP, Bertheau P, Emmert-Buck MR, et al. A microdissection technique archival DNA analysis of specific cell populations in lesions <1mm in size. Am J Pathol, 1995, 146：620.
2 Han H-J, Yanagisawa A, Katoy, et al. Genetic instability in pacreatic Cancer and pooly differentiated type of gastric Cancer. Cancer Rer, 1993, 53：5087.
3 Strickler JG, Zheng J, Shu Q, et al. P53 mutations and microsatellite instability in sporaelic gastric cancer: when guardians faic. Cancer Res, 1994, 54：4750.
4 Seruca R, Santos N R, David L, et al. sporadic gastric carcinoma with microsatellite instability display a particular clinicopatholigic profile, Int I Cancer, 1995, 64：32.
(收稿：1997-01-29 修回：1997-08-15), http://www.100md.com
单位：630038 重庆，第三军医大学西南医院消化科
关键词：
中华医学杂志971115 为了探讨微卫星不稳定性(microsatellite instability，MSI)在胃癌发生发展中的作用，我们采用PCR为基础的方法对胃癌组织的MSI进行了研究。
一、对象与方法
1.标本：50例胃癌均为我院1994年1月～1996年7月手术切除标本。手术切下肿瘤后立即收集癌及正常组织，置-80℃冰箱保存备用。
2.DNA提取：参照文献[1]以苯酚、氯仿抽提法提取基因组DNA。
, http://www.100md.com 3.MSI分析：选用mfd26、mfd41、D17s799、D5s409四个位点，引物均由上海细胞生物研究所合成，D17s799引物序列由Garde博士提供，采用PCR方法扩增微卫星DNA，扩增产物在1.5%琼脂糖(北京中山生物公司产品)上电泳证实无杂带后，以首次扩增产物为模板，另加0.8μlα-32PdCTP进行第二次扩增，取扩增产物5μl 95℃变性3分钟后快速冷却，在10%的聚丙烯酰胺凝胶上(含7mol/L尿素)电泳(55W)2～4小时后，于-80℃下行放射自显影。
4.结果分析：与正常组织比较，胃癌组织DNA等位片段发生缺失或有额外的等位片段即可判断为MSI，MSI阳性病例经再次PCR证实。
二、结果
1.胃癌MSI检出率：50例胃癌中mfd26位点MSI检出率为42% (21/50)；mfd41位点为38%(19/50)；D5s409为44% (22/50)；D17s799为44%(22/50)。若将以上位点综合分析，MSI总检出率为66%(33/50)(附图)。3例早期胃癌MSI均阳性，进展期胃癌MSI阳性率为63.8%(30/47)。
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2.MSI与临床病理参数的关系：mfd26位点Ⅰ～Ⅱ期胃癌MSI阳性率显著高于Ⅲ～Ⅳ期胃癌(P<0.05)；mfd41位点中高分化腺癌MSI阳性率显著高于低分化腺癌(P<0.05)，Ⅰ～Ⅱ期胃癌阳性率显著高于Ⅲ～Ⅳ期胃癌(P<0.05)；D17s799和D5s409位点高中分化腺癌和无淋巴结转移组MSI检出率分别显著高于低分化癌和有淋巴结转移组(P<0.05和0.01)。若将以上4个位点综合分析，中-高分化腺癌MSI阳性率为93.3%，显著高于低分化腺癌(51.6%)(P<0.05)，无淋巴结转移组MSI阳性率(88.0%)显著高于有淋巴结转移组(44.0%)(P<0.01)，无浆膜浸润组MSI阳性率(85.0%)显著高于有浆膜浸润组(53.3%)(P<0.05)。
N：正常胃粘膜组织；T：胃癌组织；(1) mfd 26位点；(2) mfd41位点；(3) D17S799；(4)D5S409
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附图 胃癌组织MSI
三、讨论
微卫星是由2～6个核苷酸组成、具有高度多态性、简单串联排列而成的核苷酸重复序列，广泛存在于原核及真核细胞的基因组中。MSI是指由于复制错误引起的简单重复序列的改变。国外报道胃癌MSI发生率在18%～39%之间[2，3]。我们的研究结果显示胃癌MSI发生率为66%，3例早期胃癌MSI均阳性，提示在胃癌的发生中MSI起重要作用，早期胃癌MSI发生率可能较高。
胃癌发生部位与MSI的关系文献报告不尽一致。Seruca等[4]报告81.8%的MSI发生于胃窦部胃癌，而贲门癌则无MSI。本研究显示各部位胃癌之间MSI发生率差异无显著意义。Dosantos等[5]的研究结果同我们一致。造成上述差异的原因可能与检测微卫星位点、数目及病例选择的差异有关。国外研究显示，高分化腺癌MSI阳性率显著高于低分化腺癌，肠型胃癌MSI阳性率高于胃型胃癌。我们的研究结果为中-高分化腺癌MSI阳性率显著高于低分化腺癌，但胃型与肠型胃癌MSI阳性率之间则无显著差异，提示MSI阳性胃癌分化程度高，恶性度相对较低。我们的研究结果还表明mfd26和mfd41位点Ⅰ-Ⅱ期胃癌MSI阳性率显著高于Ⅲ-Ⅳ期胃癌；D17s799和D5s409位点无淋巴结转移胃癌MSI阳性率显著高于有淋巴结转移的胃癌。若将4个位点综合分析，无淋巴结转移和无浆膜浸润胃癌的MSI阳性率显著高于有淋巴结转移和浆膜浸润组，提示MSI阳性胃癌预后较好，检测胃癌组织MSI可能有助于评估胃癌患者的预后。
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本课题为国家自然科学基金资助项目
参考文献
1 Zhuang ZP, Bertheau P, Emmert-Buck MR, et al. A microdissection technique archival DNA analysis of specific cell populations in lesions <1mm in size. Am J Pathol, 1995, 146：620.
2 Han H-J, Yanagisawa A, Katoy, et al. Genetic instability in pacreatic Cancer and pooly differentiated type of gastric Cancer. Cancer Rer, 1993, 53：5087.
3 Strickler JG, Zheng J, Shu Q, et al. P53 mutations and microsatellite instability in sporaelic gastric cancer: when guardians faic. Cancer Res, 1994, 54：4750.
4 Seruca R, Santos N R, David L, et al. sporadic gastric carcinoma with microsatellite instability display a particular clinicopatholigic profile, Int I Cancer, 1995, 64：32.
(收稿：1997-01-29 修回：1997-08-15), http://www.100md.com