人肝细胞癌中APC/MCC表达的研究
作者：刘荣 吴孟超
单位：100853 北京，解放军总医院(刘荣)；200433上海，东方肝胆外科医院(吴孟超)
关键词：癌；肝细胞；癌基因；；基因表达
中华肝胆外科杂志980104
【摘要】 多种癌基因产物是信号传导系统组成成分。癌基因在肿瘤细胞形
成、增殖和转移中起重要作用。APC基因是家族性多发结肠息肉的遗传易感基因，在许多肿瘤中都有突变。APC和MCC同属新近发现的抑瘤基因。本研究采用Northern
杂交法对30例人肝细胞肝癌(HCC)中APC/MCC表达进行研究。结果显示：HCC癌组
织中有21例表达APC，有19例表达MCC；HCC癌组织和癌旁组织中APC/MCC表达无
, http://www.100md.com
显著差异(P>0.05)。HCC癌组织中APC/MCC表达和HCC临床特征间无显著相关。由
于APC/MCC在成人某些特定细胞中才能表达，所以HCC中APC/MCC的表达说明
APC/MCC在HCC发生中起一定作用。
Study on APC/MCC expression in human hepatocellular cancer Liu Rong, Wu Mengchao.
*Department of Hepatobiliary Surgery, General Hospital of Peoploes Liberation Army, Beijing
100853
, 百拇医药
【Abstract】 Accumulation of genetic alterations in oncogenes and tumor suppressor genes
causes the transformation of a normal cell into a malignant one. The APC gene is responsible for
familial adenomatous polyposis and is considered to be a tumor suppressor gene associated with
development of sporadic colorectal tumors. Tumor suppressor genes APC and MCC were
, http://www.100md.com identified recently. This study investigates the relationship between APC/MCC and hepatocellular
carcinoma(HCC). In thirty surgical resection samples of HCC mRNA levels were assessed by
Northern blot hybridization. The results show that of 30 patients tested, twenty-one of thirty
hepatocellular carcinomas exhibited APC overexpression, and expression of MCC was found in
, 百拇医药
19 cases. The expression of APC/MCC mRNA in cancerous tissues was not different from the
expression in corresponding noncancerous parenchyma. There was no significant correlation
between the expression in cancerous tissues and grade of differentiation, clinical stage, AFP,HBsAg. Our results suggest that APC/MCC may play different roles in pathogenesis of HCC.
【Key words】 Carcioma, hepatocellular Oncogenes Gene expression
, http://www.100md.com
多种癌基因产物是信号传导系统组成成分。从生长因子及受体、蛋白激酶，直
到核内转录因子都可见到癌基因产物的存在。癌基因在肿瘤细胞的形成、增殖和转
移过程中起着重要的作用。本文应用分子杂交的方法对30例人肝细胞癌(HCC)中
APC/MCC表达进行了研究，以期发现APC/MCC mRNA在人肝细胞癌中的表现规律。
材料与方法
1.研究对象：30例肝癌组织标本取自1992年4月至8月间住院治疗的患者，其中男性24例，女性6例。年龄最小者30岁，最大者67岁。每例标本均于癌组
织、癌旁组织分别取材。诊断由手术及病理证实。
, http://www.100md.com
2.主要实验材料：APC及MCC质粒由美国Vogelstein B博士惠赠。
3.实验方法：RNA的抽提按一步法：1.0g组织加5ml GIT溶液，高速匀浆，依次加入2mol NaAc(pH5.0)1ml，饱和酚10ml。剧烈振荡充分混匀后，冰浴1
5min，12?000 rpm 20min，上清用2倍体积无水乙醇，1/10体积3mol NaAc于
-70℃沉淀2h。12000rpm, 15min；沉淀用70%乙醇洗2次，溶沉淀于1ml DEPC处
理水中。取5μl RNA行1%变性胶电泳和紫外分光仪定性定量。
探针用随机引物法标记：变性DNA加入随机引物标记系统及32p-dCTP，25℃标记2h，终止反应后，直接变性，加入杂交液中。
, 百拇医药
Northern blot按《分子克隆手册》进行：杂交袋内加预杂交液(6×SSPE，0.1%SDS，50%去离子甲酰胺，100μg/ml鲑鱼精DNA，5×Denharts液)预杂交2h
后，加入变性的标记探针，42℃杂交18～24h。杂交后，膜片用2×SSC，0.1%
SDS室温洗20min；用0.2×SSC，0.1%SDS68℃洗3次，每次20min。洗涤时用
monitor监测杂交膜上放射性强度至满意时，以0.2×SSC漂洗膜片。保鲜膜包裹晾
干的膜片，X线片避光压入暗盒，-70℃冰箱放置7～15d后冲洗X线片。杂交后膜
的再利用：0.1%SDS煮沸后，浇注膜片，至室温后，晾干膜片，压于暗盒观察，如果洗净探针，用β-actin再行杂交，作内对照。阳性对照、以质粒DNA代替
, 百拇医药
RNA点样；阴性对照，以rRNA代替RNA点样。
结 果
1.质粒的酶切：APC和MCC质粒用Eco RI酶切后分别回收2.1和2.3kb片段
作探针。
2.APC mRNA表达的Northern分析：癌组织、癌旁组织中APC的表达，结
果显示：癌组织中有21例表达，癌周肝组织中有17例表达。无显著差异(P>0.05)。
3.APC表达和HCC临床特征间的关系：3例Ⅱ级分化的有2例表达，22例Ⅲ级
分化的有14例表达，5例Ⅳ级分化的有5例表达。无显著相关(P>0.05)。11例
, 百拇医药
Ⅰ期HCC癌组织中有9例表达，18例Ⅱ期HCC癌组织中有11例表达，1例Ⅲ期HCC癌
组织中有表达，无显著相关(P>0.05)。12例肿瘤最小直径小于5cm者癌组织中
有9例表达，18例肿瘤最小直径大于5cm者癌组织中有12例表达，无显著相关
(P>0.05)。HBsAg阳性25例中有17例表达，HBsAg阴性5例中有4例表达，无显
著相关(P>0.05)。AFP阳性18例中有12例表达，AFP阴性12例中有9例表达，无显
著相关(P>0.05)。门静脉癌栓阳性15例中有9例表达，门静脉癌栓阴性15例中有
12例表达，无显著相关(P>0.05)。
, 百拇医药
4.MCC mRNA表达的Northern分析：癌组织、癌旁组织中MCC的表达结果显
示：癌组织中有23例表达，癌周肝组织中有19例表达。无显著差异(P>0.05)。
5.MCC表达和HCC临床特征间的关系：3例Ⅱ级分化的有1例表达，22例Ⅲ
级分化的有17例表达，5例Ⅳ级分化的有5例表达，无显著相关(P>0.05)。11例
Ⅰ期HCC癌组织中7例表达，18例Ⅱ期癌组织中15例表达，1例Ⅲ期癌组织中有
表达，无显著相关(P>0.05)。12例肿瘤最小直径小于5cm者癌组织中有8例表达，18例肿瘤最小直径大于5cm者癌组织中有15例表达，无显著相关(P>0.05)。H
BsAg阳性25例中有19例表达，HBsAg阴性5例中有4例表达，无显著相关(P>0.
, 百拇医药
05)。AFP阳性18例中有14例表达，AFP阴性12例中有9例表达，无显著相关(P
>0.05)。门静脉癌栓阳性15例中有11例表达，门静脉癌栓阴性15例中有12例
表达，无显著相关(P>0.05)。
讨 论
APC基因定位于染色体5q 21，是家族性多发结肠息肉的遗传易感基因。在
散发性结肠癌、胃癌、胰腺癌和乳癌中常有体细胞突变〔1，2〕。Fujumori用RFLP，VNTR方法在9例能提供LOH信息的肝癌中，发现有4例出现D5S84位的LOH。D5S84
位点与APC基因紧密连锁。5qLOH在伴肝硬化的肝癌中居多，5qLOH仅出现在无肝
, 百拇医药
硬化的肝癌中。在APC结构研究中发现APC基因和ral 2基因相似，表明APC基因
受ras活性的调节〔3〕。新的研究表明，APC和β-atenin结合，潜在控制细胞间
相互作用引起的生长信号〔4，5〕。野生型APC蛋白和细胞骨架中的微管活动相关。
表明APC和肿瘤转移的潜在联系。
由于MCC和APC基因的相似性，在研究APC基因的同时，必然会联系MCC的作用。
APC/MCC有一部分区域和m3蕈碱性乙酰胆碱受体(mAchR)相似。该区域可特异性调
节G蛋白偶联。APC/MCC、ral 2基因及mAchR的相似性，表明他们通过G蛋白调节
, http://www.100md.com
参与肿瘤的转移〔6〕。APC RT-PCR研究表明，APC基因在人胚胎肌肉、肝脏、皮
肤以及成人白细胞都有表达。这也反映了APC在胚胎期是存在的，而后只能在某
些特定细胞内表达。这样，我们推猜APC/MCC也能象AFP一样作为肿瘤预后的指标。
参 考 文 献
1Thompson AM, Morris RG, Wallace M, et al. Allele loss from 5q21 (APC/MCC) and
18q21(DCC) and DCC mRNA expression in breast cancer. Br J Cancer, 1993, 68: 64.
, 百拇医药
2Levy DB, Smith KJ, Beazer-Barclay Y, et al. Inactivation of both APC alleles in human
and mouse tumors. Cancer Res, 1994, 54: 5953.
3Kinzler KW, NilBert MC, Su LK, et al. Identification of FAB locus genes from
chromosome 5q21. Science, 1991, 253: 661.
4Rubinfeld B, Souza B, Albert I, et al. Association of the APC gene product with β-catenin.
, 百拇医药
Science, 1993, 262: 1731.
5Su LK, Vogelstein B. and Kinzler KW. Association of the APC tumor suppressor protein
with catenins. Science (Washington DC), 1993, 262:1734.
6Kinzler KW, NilBert MC, Vogelstein B, et al. Identification of a gene located at chromosome
5q21 that is mutated in colorectal cancers. Science, 1991, 251: 1366.
(收稿：1997-04-14), 百拇医药
单位：100853 北京，解放军总医院(刘荣)；200433上海，东方肝胆外科医院(吴孟超)
关键词：癌；肝细胞；癌基因；；基因表达
中华肝胆外科杂志980104
【摘要】 多种癌基因产物是信号传导系统组成成分。癌基因在肿瘤细胞形
成、增殖和转移中起重要作用。APC基因是家族性多发结肠息肉的遗传易感基因，在许多肿瘤中都有突变。APC和MCC同属新近发现的抑瘤基因。本研究采用Northern
杂交法对30例人肝细胞肝癌(HCC)中APC/MCC表达进行研究。结果显示：HCC癌组
织中有21例表达APC，有19例表达MCC；HCC癌组织和癌旁组织中APC/MCC表达无
, http://www.100md.com
显著差异(P>0.05)。HCC癌组织中APC/MCC表达和HCC临床特征间无显著相关。由
于APC/MCC在成人某些特定细胞中才能表达，所以HCC中APC/MCC的表达说明
APC/MCC在HCC发生中起一定作用。
Study on APC/MCC expression in human hepatocellular cancer Liu Rong, Wu Mengchao.
*Department of Hepatobiliary Surgery, General Hospital of Peoploes Liberation Army, Beijing
100853
, 百拇医药
【Abstract】 Accumulation of genetic alterations in oncogenes and tumor suppressor genes
causes the transformation of a normal cell into a malignant one. The APC gene is responsible for
familial adenomatous polyposis and is considered to be a tumor suppressor gene associated with
development of sporadic colorectal tumors. Tumor suppressor genes APC and MCC were
, http://www.100md.com identified recently. This study investigates the relationship between APC/MCC and hepatocellular
carcinoma(HCC). In thirty surgical resection samples of HCC mRNA levels were assessed by
Northern blot hybridization. The results show that of 30 patients tested, twenty-one of thirty
hepatocellular carcinomas exhibited APC overexpression, and expression of MCC was found in
, 百拇医药
19 cases. The expression of APC/MCC mRNA in cancerous tissues was not different from the
expression in corresponding noncancerous parenchyma. There was no significant correlation
between the expression in cancerous tissues and grade of differentiation, clinical stage, AFP,HBsAg. Our results suggest that APC/MCC may play different roles in pathogenesis of HCC.
【Key words】 Carcioma, hepatocellular Oncogenes Gene expression
, http://www.100md.com
多种癌基因产物是信号传导系统组成成分。从生长因子及受体、蛋白激酶，直
到核内转录因子都可见到癌基因产物的存在。癌基因在肿瘤细胞的形成、增殖和转
移过程中起着重要的作用。本文应用分子杂交的方法对30例人肝细胞癌(HCC)中
APC/MCC表达进行了研究，以期发现APC/MCC mRNA在人肝细胞癌中的表现规律。
材料与方法
1.研究对象：30例肝癌组织标本取自1992年4月至8月间住院治疗的患者，其中男性24例，女性6例。年龄最小者30岁，最大者67岁。每例标本均于癌组
织、癌旁组织分别取材。诊断由手术及病理证实。
, http://www.100md.com
2.主要实验材料：APC及MCC质粒由美国Vogelstein B博士惠赠。
3.实验方法：RNA的抽提按一步法：1.0g组织加5ml GIT溶液，高速匀浆，依次加入2mol NaAc(pH5.0)1ml，饱和酚10ml。剧烈振荡充分混匀后，冰浴1
5min，12?000 rpm 20min，上清用2倍体积无水乙醇，1/10体积3mol NaAc于
-70℃沉淀2h。12000rpm, 15min；沉淀用70%乙醇洗2次，溶沉淀于1ml DEPC处
理水中。取5μl RNA行1%变性胶电泳和紫外分光仪定性定量。
探针用随机引物法标记：变性DNA加入随机引物标记系统及32p-dCTP，25℃标记2h，终止反应后，直接变性，加入杂交液中。
, 百拇医药
Northern blot按《分子克隆手册》进行：杂交袋内加预杂交液(6×SSPE，0.1%SDS，50%去离子甲酰胺，100μg/ml鲑鱼精DNA，5×Denharts液)预杂交2h
后，加入变性的标记探针，42℃杂交18～24h。杂交后，膜片用2×SSC，0.1%
SDS室温洗20min；用0.2×SSC，0.1%SDS68℃洗3次，每次20min。洗涤时用
monitor监测杂交膜上放射性强度至满意时，以0.2×SSC漂洗膜片。保鲜膜包裹晾
干的膜片，X线片避光压入暗盒，-70℃冰箱放置7～15d后冲洗X线片。杂交后膜
的再利用：0.1%SDS煮沸后，浇注膜片，至室温后，晾干膜片，压于暗盒观察，如果洗净探针，用β-actin再行杂交，作内对照。阳性对照、以质粒DNA代替
, 百拇医药
RNA点样；阴性对照，以rRNA代替RNA点样。
结 果
1.质粒的酶切：APC和MCC质粒用Eco RI酶切后分别回收2.1和2.3kb片段
作探针。
2.APC mRNA表达的Northern分析：癌组织、癌旁组织中APC的表达，结
果显示：癌组织中有21例表达，癌周肝组织中有17例表达。无显著差异(P>0.05)。
3.APC表达和HCC临床特征间的关系：3例Ⅱ级分化的有2例表达，22例Ⅲ级
分化的有14例表达，5例Ⅳ级分化的有5例表达。无显著相关(P>0.05)。11例
, 百拇医药
Ⅰ期HCC癌组织中有9例表达，18例Ⅱ期HCC癌组织中有11例表达，1例Ⅲ期HCC癌
组织中有表达，无显著相关(P>0.05)。12例肿瘤最小直径小于5cm者癌组织中
有9例表达，18例肿瘤最小直径大于5cm者癌组织中有12例表达，无显著相关
(P>0.05)。HBsAg阳性25例中有17例表达，HBsAg阴性5例中有4例表达，无显
著相关(P>0.05)。AFP阳性18例中有12例表达，AFP阴性12例中有9例表达，无显
著相关(P>0.05)。门静脉癌栓阳性15例中有9例表达，门静脉癌栓阴性15例中有
12例表达，无显著相关(P>0.05)。
, 百拇医药
4.MCC mRNA表达的Northern分析：癌组织、癌旁组织中MCC的表达结果显
示：癌组织中有23例表达，癌周肝组织中有19例表达。无显著差异(P>0.05)。
5.MCC表达和HCC临床特征间的关系：3例Ⅱ级分化的有1例表达，22例Ⅲ
级分化的有17例表达，5例Ⅳ级分化的有5例表达，无显著相关(P>0.05)。11例
Ⅰ期HCC癌组织中7例表达，18例Ⅱ期癌组织中15例表达，1例Ⅲ期癌组织中有
表达，无显著相关(P>0.05)。12例肿瘤最小直径小于5cm者癌组织中有8例表达，18例肿瘤最小直径大于5cm者癌组织中有15例表达，无显著相关(P>0.05)。H
BsAg阳性25例中有19例表达，HBsAg阴性5例中有4例表达，无显著相关(P>0.
, 百拇医药
05)。AFP阳性18例中有14例表达，AFP阴性12例中有9例表达，无显著相关(P
>0.05)。门静脉癌栓阳性15例中有11例表达，门静脉癌栓阴性15例中有12例
表达，无显著相关(P>0.05)。
讨 论
APC基因定位于染色体5q 21，是家族性多发结肠息肉的遗传易感基因。在
散发性结肠癌、胃癌、胰腺癌和乳癌中常有体细胞突变〔1，2〕。Fujumori用RFLP，VNTR方法在9例能提供LOH信息的肝癌中，发现有4例出现D5S84位的LOH。D5S84
位点与APC基因紧密连锁。5qLOH在伴肝硬化的肝癌中居多，5qLOH仅出现在无肝
, 百拇医药
硬化的肝癌中。在APC结构研究中发现APC基因和ral 2基因相似，表明APC基因
受ras活性的调节〔3〕。新的研究表明，APC和β-atenin结合，潜在控制细胞间
相互作用引起的生长信号〔4，5〕。野生型APC蛋白和细胞骨架中的微管活动相关。
表明APC和肿瘤转移的潜在联系。
由于MCC和APC基因的相似性，在研究APC基因的同时，必然会联系MCC的作用。
APC/MCC有一部分区域和m3蕈碱性乙酰胆碱受体(mAchR)相似。该区域可特异性调
节G蛋白偶联。APC/MCC、ral 2基因及mAchR的相似性，表明他们通过G蛋白调节
, http://www.100md.com
参与肿瘤的转移〔6〕。APC RT-PCR研究表明，APC基因在人胚胎肌肉、肝脏、皮
肤以及成人白细胞都有表达。这也反映了APC在胚胎期是存在的，而后只能在某
些特定细胞内表达。这样，我们推猜APC/MCC也能象AFP一样作为肿瘤预后的指标。
参 考 文 献
1Thompson AM, Morris RG, Wallace M, et al. Allele loss from 5q21 (APC/MCC) and
18q21(DCC) and DCC mRNA expression in breast cancer. Br J Cancer, 1993, 68: 64.
, 百拇医药
2Levy DB, Smith KJ, Beazer-Barclay Y, et al. Inactivation of both APC alleles in human
and mouse tumors. Cancer Res, 1994, 54: 5953.
3Kinzler KW, NilBert MC, Su LK, et al. Identification of FAB locus genes from
chromosome 5q21. Science, 1991, 253: 661.
4Rubinfeld B, Souza B, Albert I, et al. Association of the APC gene product with β-catenin.
, 百拇医药
Science, 1993, 262: 1731.
5Su LK, Vogelstein B. and Kinzler KW. Association of the APC tumor suppressor protein
with catenins. Science (Washington DC), 1993, 262:1734.
6Kinzler KW, NilBert MC, Vogelstein B, et al. Identification of a gene located at chromosome
5q21 that is mutated in colorectal cancers. Science, 1991, 251: 1366.
(收稿：1997-04-14), 百拇医药