粘液表皮样癌DNA分型与分化程度对比研究
作者：汪济广 司徒镇强 吴军正
单位：710032 西安，第四军医大学口腔医学院
关键词：
中华口腔医学杂志980228 粘液表皮样癌恶性程度的判定对该瘤的临床治疗具有重要指导意义。本研究探讨DNA含量与倍体分布及粘液表皮样癌的分化程度是否相关。
一、材料和方法
1.细胞培养：人粘液表皮样癌细胞系MEC-1(由我院建株)细胞在加有10%胎牛血清的RPMI1640培养液内常规培养，四天传代一次。
2.药物：二甲基亚砜(DMSO)，使用时用培养液稀释至所需浓度。
3.实验分组：①对照组；②1.6% DMSO作用3天组；③0.8% DMSO作用20天组。
, http://www.100md.com
4.细胞DNA含量的测定：细胞铺片取出后，混合固定液固定30分钟，常规Feulgen染色，显微分光光度计镜扫描法，单个细胞扫描，对单个细胞核DNA定量测量。每组标本随机测量50个细胞，取每个细胞核的总吸收值为相对DNA含量，并用显微分光光度计所附计算机软盘中方差分析，t检验。
另取正常腮腺组织原代培养出的上皮细胞作为正常对照细胞，制成细胞铺片后，在与上述各组细胞相同的工作条件下同时作Feulgen染色，随机测50个上皮细胞核DNA含量，联机描绘直方图，以该正常上皮细胞DNA直方图的峰值定为2C，计算各组2C细胞、超4C细胞所占百分比，并以其绝对数作显著性检验。
5.透射电镜样品制备及观察：对数生长期的各组细胞，0.25%胰酶消化、吹打、离心，细胞块用3%戊二醛固定2小时，1%锇酸固定1.5小时，常规脱水、浸透、包埋，超薄切片、铅铀双染色后，透射电镜观察。
二、结果
, 百拇医药
1.三组细胞的DNA含量及超4C细胞所占百分比：经DMSO不同处理后得到的三组MEC-1细胞的DNA含量组间差异有显著性。第1组DNA含量最多，第3组含量最少；三组细胞的、超4C细胞绝对数差异有显著性。第1组最多，第3组为0。
2.三组MEC-1细胞的超微结构：透射电镜下见第1组细胞核大，核形态不规则，胞浆内有较多游离核糖体散在分布，细胞器不发达，粗面内质网数目不多，线粒体数目少，胞浆中偶见有电子密度低的未成熟分泌颗粒。第2组细胞胞核较第1组小，胞浆内游离核糖体数目较少，粗面内质网及线粒体数目较第1组增多，胞浆内出现电子密度不均一的成熟及未成熟分泌颗粒。第3组细胞核形态较规整，细胞器发达，很少见到游离核糖体，粗面内质网及线粒体丰富，每个细胞浆内均有30～40个均质状、电子密度很高的成熟酶原颗粒。
三、讨论
粘液表皮样癌是比较多见的恶性涎腺肿瘤，约占涎腺肿瘤的10%。根据其细胞分化程度，该瘤分为低度恶性和高度恶性两型。不同分化程度的粘液表皮样癌有着明显不同的临床表现和预后。目前一般根据分化程度判断恶性程度。近年来，有报道恶性程度不同的粘液表皮样癌细胞的DNA含量及倍体分布明显不同，故提出可根据癌细胞的DNA含量及超4C细胞的百分比来判断粘液表皮样癌的恶性程度。本研究利用不同的处理得到DNA含量和超4C细胞差异有显著性的三种粘液表皮样癌细胞模型，发现此三种细胞的超微结构也明显不同。DNA含量低和超4C细胞少或无的粘液表皮样癌的细胞器发达，粗面内质网和线粒体数目多，并出现标志细胞行使正常功能的成熟分泌颗粒，表明DNA和超4C含量少的粘液表皮样癌细胞分化成熟程度高，在形态学上支持根据细胞DNA含量及倍体分布判断粘液表皮样癌恶性程度的学说。
(收稿：1996-03-24 修回：1996-12-26), http://www.100md.com
单位：710032 西安，第四军医大学口腔医学院
关键词：
中华口腔医学杂志980228 粘液表皮样癌恶性程度的判定对该瘤的临床治疗具有重要指导意义。本研究探讨DNA含量与倍体分布及粘液表皮样癌的分化程度是否相关。
一、材料和方法
1.细胞培养：人粘液表皮样癌细胞系MEC-1(由我院建株)细胞在加有10%胎牛血清的RPMI1640培养液内常规培养，四天传代一次。
2.药物：二甲基亚砜(DMSO)，使用时用培养液稀释至所需浓度。
3.实验分组：①对照组；②1.6% DMSO作用3天组；③0.8% DMSO作用20天组。
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4.细胞DNA含量的测定：细胞铺片取出后，混合固定液固定30分钟，常规Feulgen染色，显微分光光度计镜扫描法，单个细胞扫描，对单个细胞核DNA定量测量。每组标本随机测量50个细胞，取每个细胞核的总吸收值为相对DNA含量，并用显微分光光度计所附计算机软盘中方差分析，t检验。
另取正常腮腺组织原代培养出的上皮细胞作为正常对照细胞，制成细胞铺片后，在与上述各组细胞相同的工作条件下同时作Feulgen染色，随机测50个上皮细胞核DNA含量，联机描绘直方图，以该正常上皮细胞DNA直方图的峰值定为2C，计算各组2C细胞、超4C细胞所占百分比，并以其绝对数作显著性检验。
5.透射电镜样品制备及观察：对数生长期的各组细胞，0.25%胰酶消化、吹打、离心，细胞块用3%戊二醛固定2小时，1%锇酸固定1.5小时，常规脱水、浸透、包埋，超薄切片、铅铀双染色后，透射电镜观察。
二、结果
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1.三组细胞的DNA含量及超4C细胞所占百分比：经DMSO不同处理后得到的三组MEC-1细胞的DNA含量组间差异有显著性。第1组DNA含量最多，第3组含量最少；三组细胞的、超4C细胞绝对数差异有显著性。第1组最多，第3组为0。
2.三组MEC-1细胞的超微结构：透射电镜下见第1组细胞核大，核形态不规则，胞浆内有较多游离核糖体散在分布，细胞器不发达，粗面内质网数目不多，线粒体数目少，胞浆中偶见有电子密度低的未成熟分泌颗粒。第2组细胞胞核较第1组小，胞浆内游离核糖体数目较少，粗面内质网及线粒体数目较第1组增多，胞浆内出现电子密度不均一的成熟及未成熟分泌颗粒。第3组细胞核形态较规整，细胞器发达，很少见到游离核糖体，粗面内质网及线粒体丰富，每个细胞浆内均有30～40个均质状、电子密度很高的成熟酶原颗粒。
三、讨论
粘液表皮样癌是比较多见的恶性涎腺肿瘤，约占涎腺肿瘤的10%。根据其细胞分化程度，该瘤分为低度恶性和高度恶性两型。不同分化程度的粘液表皮样癌有着明显不同的临床表现和预后。目前一般根据分化程度判断恶性程度。近年来，有报道恶性程度不同的粘液表皮样癌细胞的DNA含量及倍体分布明显不同，故提出可根据癌细胞的DNA含量及超4C细胞的百分比来判断粘液表皮样癌的恶性程度。本研究利用不同的处理得到DNA含量和超4C细胞差异有显著性的三种粘液表皮样癌细胞模型，发现此三种细胞的超微结构也明显不同。DNA含量低和超4C细胞少或无的粘液表皮样癌的细胞器发达，粗面内质网和线粒体数目多，并出现标志细胞行使正常功能的成熟分泌颗粒，表明DNA和超4C含量少的粘液表皮样癌细胞分化成熟程度高，在形态学上支持根据细胞DNA含量及倍体分布判断粘液表皮样癌恶性程度的学说。
(收稿：1996-03-24 修回：1996-12-26), http://www.100md.com