复发性阿弗他溃疡患者淋巴细胞抑制功能的改变
作者：胡雁 Neil W Savage Phil B Sugerman
单位：510260 广州，广东省口腔医院(胡雁)；澳大利亚昆士兰大学牙学院(Neil W Savage、Phil B Sugerman)
关键词：T淋巴细胞；抑制因子，免疫；复发性阿弗他溃疡
中华口腔医学杂志980213 【摘要】 目的 探索复发性阿弗他溃疡(recurrent aphthous ulcer, RAU)患者T淋巴细胞的抑制功能。方法 应用刀豆碱(concanavalin A, ConA)激活产生的淋巴细胞抑制检测法探查了12例溃疡期患者外周血淋巴细胞的抑制活性。结果 患者溃疡期的T淋巴细胞抑制率在ConA为1、2、4和8mg/L时，分别是60%、40%、27%和20%，明显低于正常组的72%、56%、41%和34%(P<0.05)。结论 RAU患者外周血T淋巴细胞的抑制功能可能出现暂时性降低。
, http://www.100md.com
The changes of suppressor T-cells function in patients with RAU Hu Yan*, Neil W Savage, Phil B Sugerman.*The Stomatology Hospital of Guangdong Province, Guangzhou 510260
【Abstract】 Objective To study the change of suppressor T-cell function in patients with RAU. Methods Samples of 12 patients with RAU active phase were studied by it suppressor assay. Results The T-cell suppress rates at ConA 1,2,4 and 8 mg/L were 60%, 40%, 27% and 20% respectively, and were evidently lower when compared with normal controls′ 72%, 56%, 41% and 34% (P<0.05). Conclusion The suppressor T-cell function may be depressed in RAU patients.
, 百拇医药
【Key words】 T-lymphoctes Suppressor factors, immunologic Recurrent aphthous ulcer
复发性阿弗他溃疡(recurrent apthous ulcer, RAU)的病因目前仍不十分清楚，但大量的研究结果表明T淋巴细胞亚群平衡失调(细胞数量平衡或/和功能平衡失调)可能是其重要的致病因素[1～3]。这些研究提供了以下依据：①RAU患者淋巴细胞亚群中，CD8+(T8+)细胞增多，CD4+(T4+)细胞减少，CD4+/CD8+比例下降；②在CD4+细胞亚群中，CD4+，CD45RA-(T辅助诱导细胞)增多，CD4+，CD45RA+(T辅助诱导细胞)减少；③RAU患者淋巴细胞对促有丝分裂剂——植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)和刀豆碱(concanavalin A,ConA)的增殖反应降低[4]。这提示RAU患者T淋巴细胞的抑制功能可能降低。这一点已在口腔扁平苔藓、慢性感染性肠炎和某些自身免疫性疾病中得到证实[5]。我们运用自身淋巴细胞混合反应探索RAU患者T淋巴细胞的抑制功能。
, 百拇医药
材料和方法
1.临床资料：12例经临床确诊的溃疡期RAU患者，男性7例，女性5例；年龄20～60岁，平均23.0±3.4岁。以15例健康人作为对照组，其中男性9例，女性6例；年龄20～47岁，平均31.6±4.7岁。两组年龄差异无显著性(P>0.05)。
2.淋巴细胞的提取：每位受试者于实验当天上午8时30分取静脉血40ml，注入含肝素防凝管。运用Ficoll-Paque(Pharmacia, Uppsala, Sweden)梯度离心。所提取的淋巴细胞用RPMI-1640(Commonwealth Serum Labratories, Melbourne, Australia)洗涤2次，此时生活细胞在95%以上。用标准培养基将细胞浓度调至1010/L。培养基的组成是RPMI-1640，10%热灭活的人类AB血清(Red Cross Blood Band, Brisbane, Australia)，5×104IU/L青霉素G，50mg/L链霉素(CSL，Melbourne,Australia)和2mmol/L谷酰氨(Sihma,STL ouis, MO)。
, 百拇医药
3.诱导期：用与Sugerman等[5]同样的方法将细胞悬浮液分为3部份：①激活的效应细胞群(AE25)。②非激活的效应细胞群(NE)。③反应细胞群(SR)。AE25和NE置CO2培养箱48小时。SR于4℃时保存48小时。
4.反应期：AE25、NE和SR于48小时后进行4种自身细胞混合反应：①SR用RPMI-1640洗脱1次后，调至2×109细胞/L。②AE25和NE用含α-右旋糖苷的RPMI-1640洗脱2次后调至2×109细胞/L，并用60Co照射，抑制其增殖能力。③4种自身细胞混合反应如下：A:50μlSR+50μlAE25+100μlConA；B:50μlSR+50μlAE25+100μlTCM；C:50μlSR+50μlNE+100μlConA；D:50μlSR+50μlNE+100μlTCM。其中TCM为淋巴细胞培养液，所有反应均在96孔培养皿中进行，培养皿置37℃、5%CO2的培养箱中4天。
, 百拇医药
5.收获期：①培养的第3天，所有培养皿孔内加入3H(胸腺核苷)。②培养结束后，用细胞收获器(Titertek cell Harvester 530)将细胞收获于玻璃纤维纸上。③β-闪烁计数仪计数(β-emission counter)。
6.抑制活性的计算：不同ConA浓度下的抑制活性百分率用以下公式计算：抑制率(%)=(1-
×100%，将对照组与实验组不同ConA浓度时的抑制率做显著性u检验。
结果
将抑制率分为溃疡期组和对照组。如附图所示，两组的抑制率在ConA浓度为1、2、4、8mg/L时，差异有显著性(P<0.05)。由于ConA浓度升到16、32mg/L时出现负抑制，故未做显著性检验。
, 百拇医药
附图 溃疡期组和对照组在不同ConA浓度时抑制率的比较
讨论
由促细胞分裂素——刀豆碱(ConA)诱导产生的T抑制细胞群已较广泛地应用于体外细胞调节抑制试验中，它能够反映出受试者的抑制细胞群的功能。在本试验系统中，诱导期ConA的浓度在选择方面存在着很大差异，Davidsen和Kristensen[6]发现ConA在浓度超过20mg/L时对淋巴细胞具有毒性作用，可使其活性降低50%。本组结果表明，ConA浓度在16、32mg/L时，其淋巴细胞的抑制率出现了负性结果，说明ConA的浓度在16mg/L以下较为理想。本组RAU溃疡期患者，由ConA诱导产生的T淋巴细胞抑制率明显低于对照组(P<0.05)。由于T抑制细胞群能调节T细胞对抗原物的反应性，对特异性细胞调节免疫反应起抑制作用[7]，因此，本结果提示T淋巴细胞群抑制功能可能在RAU的致病学中起一定的作用。早在1985年，Greenspan就发现RAU患者的淋巴细胞对促有丝分裂素(PHA和ConA)的反应性降低，而Savage等[4]1988年的研究结果表明，T淋巴细胞亚群中，T4+，2H4+(CD4，CD45RA+，T抑制诱导细胞)细胞量降低。由于淋巴细胞对ConA的增殖反应主要集中在T4+，2H4+细胞群[8]，故淋巴细胞对ConA和PHA的反应性降低可能是T4+，2H4+细胞数量减少引起。另一方面，T4+，2H4+细胞群在T抑制细胞群的增殖方面起着重要作用。故本组中T淋巴细胞抑制功能降低可能是T4+，2H4+功能下降的反映。
, 百拇医药
由ConA诱导的T淋巴细胞抑制率下降在口腔扁平苔藓、系统性红斑狼疮、风湿性关节炎和青少年糖尿病等患者中均有报道[5]，而这种T淋巴细胞抑制功能的降低或减退被认为可能是T4+细胞群改变而引起[9]。T4+亚群细胞可以被分为T4+，2H4+(CD4+，CD45RA+)和T4+，2H4-(T4+,4B4+)两个细胞群[6]。T4+，2H4+细胞的主要功能之一就是诱导T8+细胞(抑制细胞)抑制IgG的合成及特异性抗体的产生[8]，从而在免疫平衡机制中起一定的作用。本研究结果提示，T4+，2H4+细胞量的减少或功能低下引起其免疫耐受力下降，从而导致患者对致病物的敏感性和非正常的自身免疫反应[3]。另一方面，T4+，2H-细胞量的增多[4]可以引起淋巴因子及某些淋巴素的过量[3]，进而引发非正常的自身免疫反应。
T淋巴细胞抑制活性降低在RAU的致病学中起一定的作用，其机理可能是抑制活性的降低导致机体的免疫耐受力下降或免疫平衡紊乱。而T淋巴细胞抑制活性降低可能是由于某些抗原物刺激(细菌、病毒)引起的CD4+，CD45RA+(T4+，2H4+)量减少而导致。大量的研究结果证实，T淋巴细胞(T4+)亚群的表现型及其功能可以被某些抗原性物质刺激后而有所改变[10]，其功能的变化将会是研究者关注的焦点。
, 百拇医药
参考文献
1 Savage NW, Seymour GJ, Kruger BJ. T-lymphocyte subset changes in recurrent aphthous stomatitis. Oral Surg Oral Med Oral Pathol, 1985,60:175-181.
2 Pedersen A, Klausen B, Hougen HP, et al. T-lympbnocyte subsets in recurrent aphthous ulceration. J Oral Pathol Med, 1989,18:59-60.
3 Landesberg R, Fallon M, Insel JR. Alterations of T helper/inducer and T suppressor/inducer cells in patients with recurrent aphthous ulcers. Oral Surg Oral Med Oral Pathol, 1990,69:205-208.
, http://www.100md.com
4 Savage NW, Mahanonda R, Seymour GJ, et al. The proportion of suppressor-inducer T-lymphocytes is reduced in recurrent aphthous stomatitis. J Oral Pathol, 1988,17:293-792.
5 Sugerman PB, Rollason PA, Savage NW, et al. Suppressor cell function in oral lichen planus. J Dent Res, 1992,71:1916-1919.
6 Davidsen B, Kristensen E. A continued evaluation of the experimental canditions of a Con A-induced suppressor test system. Acta Pathol Microbiol Immunol Scand, 1983,91:283-291.
, http://www.100md.com
7 Dorf ME, Benacerraf B. Suppressor cells and immunoregulation. Annu Rev Immunol, 1984,2:127-157.
8 Morimoto C, Letvin NL, Distaso JA, et al. The isolation and characterization of human suppressor inducer T cell subset. J Immunol, 1985,134:1508-1515.
9 Sleasman JW, Henderson M, Barrett DJ. Con A-induced suppressor cell function depends on the activation of the CD4+, CD45RA inducer T cell subpopulation. Cell Immunol, 1991,133:367-378.
10 Sanders ME, Makgoba MW, Shaw S. Human naive and memory T cells: reinterpretation of helper-inducer and suppressor-inducer subsets. Immunol Today, 1988,9:195-199.
(收稿：1997-07-22 修回：1997-11-17), 百拇医药
单位：510260 广州，广东省口腔医院(胡雁)；澳大利亚昆士兰大学牙学院(Neil W Savage、Phil B Sugerman)
关键词：T淋巴细胞；抑制因子，免疫；复发性阿弗他溃疡
中华口腔医学杂志980213 【摘要】 目的 探索复发性阿弗他溃疡(recurrent aphthous ulcer, RAU)患者T淋巴细胞的抑制功能。方法 应用刀豆碱(concanavalin A, ConA)激活产生的淋巴细胞抑制检测法探查了12例溃疡期患者外周血淋巴细胞的抑制活性。结果 患者溃疡期的T淋巴细胞抑制率在ConA为1、2、4和8mg/L时，分别是60%、40%、27%和20%，明显低于正常组的72%、56%、41%和34%(P<0.05)。结论 RAU患者外周血T淋巴细胞的抑制功能可能出现暂时性降低。
, http://www.100md.com
The changes of suppressor T-cells function in patients with RAU Hu Yan*, Neil W Savage, Phil B Sugerman.*The Stomatology Hospital of Guangdong Province, Guangzhou 510260
【Abstract】 Objective To study the change of suppressor T-cell function in patients with RAU. Methods Samples of 12 patients with RAU active phase were studied by it suppressor assay. Results The T-cell suppress rates at ConA 1,2,4 and 8 mg/L were 60%, 40%, 27% and 20% respectively, and were evidently lower when compared with normal controls′ 72%, 56%, 41% and 34% (P<0.05). Conclusion The suppressor T-cell function may be depressed in RAU patients.
, 百拇医药
【Key words】 T-lymphoctes Suppressor factors, immunologic Recurrent aphthous ulcer
复发性阿弗他溃疡(recurrent apthous ulcer, RAU)的病因目前仍不十分清楚，但大量的研究结果表明T淋巴细胞亚群平衡失调(细胞数量平衡或/和功能平衡失调)可能是其重要的致病因素[1～3]。这些研究提供了以下依据：①RAU患者淋巴细胞亚群中，CD8+(T8+)细胞增多，CD4+(T4+)细胞减少，CD4+/CD8+比例下降；②在CD4+细胞亚群中，CD4+，CD45RA-(T辅助诱导细胞)增多，CD4+，CD45RA+(T辅助诱导细胞)减少；③RAU患者淋巴细胞对促有丝分裂剂——植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)和刀豆碱(concanavalin A,ConA)的增殖反应降低[4]。这提示RAU患者T淋巴细胞的抑制功能可能降低。这一点已在口腔扁平苔藓、慢性感染性肠炎和某些自身免疫性疾病中得到证实[5]。我们运用自身淋巴细胞混合反应探索RAU患者T淋巴细胞的抑制功能。
, 百拇医药
材料和方法
1.临床资料：12例经临床确诊的溃疡期RAU患者，男性7例，女性5例；年龄20～60岁，平均23.0±3.4岁。以15例健康人作为对照组，其中男性9例，女性6例；年龄20～47岁，平均31.6±4.7岁。两组年龄差异无显著性(P>0.05)。
2.淋巴细胞的提取：每位受试者于实验当天上午8时30分取静脉血40ml，注入含肝素防凝管。运用Ficoll-Paque(Pharmacia, Uppsala, Sweden)梯度离心。所提取的淋巴细胞用RPMI-1640(Commonwealth Serum Labratories, Melbourne, Australia)洗涤2次，此时生活细胞在95%以上。用标准培养基将细胞浓度调至1010/L。培养基的组成是RPMI-1640，10%热灭活的人类AB血清(Red Cross Blood Band, Brisbane, Australia)，5×104IU/L青霉素G，50mg/L链霉素(CSL，Melbourne,Australia)和2mmol/L谷酰氨(Sihma,STL ouis, MO)。
, 百拇医药
3.诱导期：用与Sugerman等[5]同样的方法将细胞悬浮液分为3部份：①激活的效应细胞群(AE25)。②非激活的效应细胞群(NE)。③反应细胞群(SR)。AE25和NE置CO2培养箱48小时。SR于4℃时保存48小时。
4.反应期：AE25、NE和SR于48小时后进行4种自身细胞混合反应：①SR用RPMI-1640洗脱1次后，调至2×109细胞/L。②AE25和NE用含α-右旋糖苷的RPMI-1640洗脱2次后调至2×109细胞/L，并用60Co照射，抑制其增殖能力。③4种自身细胞混合反应如下：A:50μlSR+50μlAE25+100μlConA；B:50μlSR+50μlAE25+100μlTCM；C:50μlSR+50μlNE+100μlConA；D:50μlSR+50μlNE+100μlTCM。其中TCM为淋巴细胞培养液，所有反应均在96孔培养皿中进行，培养皿置37℃、5%CO2的培养箱中4天。
, 百拇医药
5.收获期：①培养的第3天，所有培养皿孔内加入3H(胸腺核苷)。②培养结束后，用细胞收获器(Titertek cell Harvester 530)将细胞收获于玻璃纤维纸上。③β-闪烁计数仪计数(β-emission counter)。
6.抑制活性的计算：不同ConA浓度下的抑制活性百分率用以下公式计算：抑制率(%)=(1-
×100%，将对照组与实验组不同ConA浓度时的抑制率做显著性u检验。结果
将抑制率分为溃疡期组和对照组。如附图所示，两组的抑制率在ConA浓度为1、2、4、8mg/L时，差异有显著性(P<0.05)。由于ConA浓度升到16、32mg/L时出现负抑制，故未做显著性检验。
, 百拇医药
附图 溃疡期组和对照组在不同ConA浓度时抑制率的比较
讨论
由促细胞分裂素——刀豆碱(ConA)诱导产生的T抑制细胞群已较广泛地应用于体外细胞调节抑制试验中，它能够反映出受试者的抑制细胞群的功能。在本试验系统中，诱导期ConA的浓度在选择方面存在着很大差异，Davidsen和Kristensen[6]发现ConA在浓度超过20mg/L时对淋巴细胞具有毒性作用，可使其活性降低50%。本组结果表明，ConA浓度在16、32mg/L时，其淋巴细胞的抑制率出现了负性结果，说明ConA的浓度在16mg/L以下较为理想。本组RAU溃疡期患者，由ConA诱导产生的T淋巴细胞抑制率明显低于对照组(P<0.05)。由于T抑制细胞群能调节T细胞对抗原物的反应性，对特异性细胞调节免疫反应起抑制作用[7]，因此，本结果提示T淋巴细胞群抑制功能可能在RAU的致病学中起一定的作用。早在1985年，Greenspan就发现RAU患者的淋巴细胞对促有丝分裂素(PHA和ConA)的反应性降低，而Savage等[4]1988年的研究结果表明，T淋巴细胞亚群中，T4+，2H4+(CD4，CD45RA+，T抑制诱导细胞)细胞量降低。由于淋巴细胞对ConA的增殖反应主要集中在T4+，2H4+细胞群[8]，故淋巴细胞对ConA和PHA的反应性降低可能是T4+，2H4+细胞数量减少引起。另一方面，T4+，2H4+细胞群在T抑制细胞群的增殖方面起着重要作用。故本组中T淋巴细胞抑制功能降低可能是T4+，2H4+功能下降的反映。
, 百拇医药
由ConA诱导的T淋巴细胞抑制率下降在口腔扁平苔藓、系统性红斑狼疮、风湿性关节炎和青少年糖尿病等患者中均有报道[5]，而这种T淋巴细胞抑制功能的降低或减退被认为可能是T4+细胞群改变而引起[9]。T4+亚群细胞可以被分为T4+，2H4+(CD4+，CD45RA+)和T4+，2H4-(T4+,4B4+)两个细胞群[6]。T4+，2H4+细胞的主要功能之一就是诱导T8+细胞(抑制细胞)抑制IgG的合成及特异性抗体的产生[8]，从而在免疫平衡机制中起一定的作用。本研究结果提示，T4+，2H4+细胞量的减少或功能低下引起其免疫耐受力下降，从而导致患者对致病物的敏感性和非正常的自身免疫反应[3]。另一方面，T4+，2H-细胞量的增多[4]可以引起淋巴因子及某些淋巴素的过量[3]，进而引发非正常的自身免疫反应。
T淋巴细胞抑制活性降低在RAU的致病学中起一定的作用，其机理可能是抑制活性的降低导致机体的免疫耐受力下降或免疫平衡紊乱。而T淋巴细胞抑制活性降低可能是由于某些抗原物刺激(细菌、病毒)引起的CD4+，CD45RA+(T4+，2H4+)量减少而导致。大量的研究结果证实，T淋巴细胞(T4+)亚群的表现型及其功能可以被某些抗原性物质刺激后而有所改变[10]，其功能的变化将会是研究者关注的焦点。
, 百拇医药
参考文献
1 Savage NW, Seymour GJ, Kruger BJ. T-lymphocyte subset changes in recurrent aphthous stomatitis. Oral Surg Oral Med Oral Pathol, 1985,60:175-181.
2 Pedersen A, Klausen B, Hougen HP, et al. T-lympbnocyte subsets in recurrent aphthous ulceration. J Oral Pathol Med, 1989,18:59-60.
3 Landesberg R, Fallon M, Insel JR. Alterations of T helper/inducer and T suppressor/inducer cells in patients with recurrent aphthous ulcers. Oral Surg Oral Med Oral Pathol, 1990,69:205-208.
, http://www.100md.com
4 Savage NW, Mahanonda R, Seymour GJ, et al. The proportion of suppressor-inducer T-lymphocytes is reduced in recurrent aphthous stomatitis. J Oral Pathol, 1988,17:293-792.
5 Sugerman PB, Rollason PA, Savage NW, et al. Suppressor cell function in oral lichen planus. J Dent Res, 1992,71:1916-1919.
6 Davidsen B, Kristensen E. A continued evaluation of the experimental canditions of a Con A-induced suppressor test system. Acta Pathol Microbiol Immunol Scand, 1983,91:283-291.
, http://www.100md.com
7 Dorf ME, Benacerraf B. Suppressor cells and immunoregulation. Annu Rev Immunol, 1984,2:127-157.
8 Morimoto C, Letvin NL, Distaso JA, et al. The isolation and characterization of human suppressor inducer T cell subset. J Immunol, 1985,134:1508-1515.
9 Sleasman JW, Henderson M, Barrett DJ. Con A-induced suppressor cell function depends on the activation of the CD4+, CD45RA inducer T cell subpopulation. Cell Immunol, 1991,133:367-378.
10 Sanders ME, Makgoba MW, Shaw S. Human naive and memory T cells: reinterpretation of helper-inducer and suppressor-inducer subsets. Immunol Today, 1988,9:195-199.
(收稿：1997-07-22 修回：1997-11-17), 百拇医药