微波组织凝固对晚期肝癌患者抗肿瘤免疫力的影响
作者：管军* 姚晓平 吴孟超 沈茜
单位：200433上海东方肝胆外科研究所(管军、姚晓平、吴孟超)；上海长海医院免疫室(沈茜)；*现在上海长征医院急救科
关键词：肝肿瘤/治疗；微波/治疗应用；肝肿瘤/免疫学
980313.htm 摘 要 目的 观察晚期不可切除肝癌患者行微波组织凝固治疗前后抗肿瘤免疫力的变化。方法 病人分为微波固化组(n=9)、切除组(n=12)和肝动脉栓塞化疗(transarterial embolization,TAE)组(n=11)。 分别于治疗前后检测NK活性、LAK活性和T细胞亚群。结果 微波固化组存活最长的一例至随访时已有22个月。微波固化组患者治疗后NK活性、LAK活性及CD3百分比均显著高于治疗前(P<0.01)。而切除组及TAE组治疗前后无显著变化。结论 微波固化后留置可以刺激宿主的抗肿瘤免疫力。其机理及意义有待进一步研究。
, 百拇医药
中图号 R735.7
Effect of Microwave Tissue Coagulation on the Anti-tumor Immunity of Advanced Hepatoma Patients Guan Jun，Yao Xiaoping，Wu Mengchao，et al.East Institute of Hepatobiliary Surgery，Shanghai200433
Abstract Objective To investigate the effect of microwave tissue coagulation(MTC) on the anti-tumor immunity of patients with advanced unresectable hepatoma.Methods Patients were divided into three groups:MTC group(n=9),resection group(n=12),transarterial embolization(TAE) group(n=11).NK activity,LAK activity and T lymphocytes subsets were examined in all patients before and after the treatment respectively.Results The longest survival in MTC group was 22 months during follow-up.NK activity,LAK activity and CD3 percentage increased significantly(P<0.01) after MTC treatment,which were not seen after resection and TAE(P>0.05).Conclusion Indwelling hepatoma after MTC treatment could activize the anti-tumor immunity of the patients.The mechanisms and the role of the effect need further study.
, 百拇医药
Key words liver neoplasms/ther;microwaves/ther use;liver neoplasms/immol
微波固化治疗肝癌的临床报道已为数不少〔1～4〕，集中在中国和日本。利用微波固化作肝切除术已取得一致认同，公认它能大大减少出血量，提高肝癌切除率，对破裂的肝癌能直接固化止血。对无法切除的肿瘤，进行固化留置治疗，目前尚未见大宗病例报道。固化治疗肿瘤对宿主免疫力的影响，这方面的临床报道更少。本文现将结果报告如下。
资 料 与 方 法
一、分组
1.微波固化留置组:9例，均为男性，年龄平均为43岁，为1993年11月～1994年10月在我科行肝癌微波固化后留置治疗的病人。病人的选择标准主要是术中发现肿瘤太大或位置险恶或已广泛多发播散而不宜行手术切除者。微波固化方法：将插入式微波组织凝固器(福建福嘉医疗器械有限公司制造，长海医院监制)的天线插入预固化的肝癌实体内，功率100瓦，持续1分钟，固化后的肝癌呈蜡黄色，范围约为直径1厘米。再同法依次逐点固化，点与点之间的距离为1厘米。尽可能将表面可触及的瘤体全部固化。
, 百拇医药
2.手术切除组:12例，10例男性，2例女性，平均45岁。为同期随机选择的行手术切除的肝癌病人。
3.肝动脉栓塞化疗(transarterial embolization,TAE)组:11例，9例男性，2例女性，平均50岁。为同期随机选择的在我科或康复部行TAE治疗的肝癌病人。
二、检测指标与取样方法
外周血NK活性，LAK活性，T细胞亚群(CD3、CD4、CD8)。采用双盲法，标本送长海医院免疫室检测。上述所有病人均于治疗前检测一次，治疗后第一周起，根据随访条件，检测1～5次不等。
三、NK、LAK活性检测
用〔3H〕TdR(中国科学院原子能研究所)释放法测NK、LAK细胞杀伤活性。用液闪仪(TRI-CARB 460CD，美国PACKARD公司产品)测定上清中的释放活性。
, 百拇医药
杀伤率＝(试验孔计数-自然释放孔计数)÷(最大释放孔计数-自然释放孔计数)×100%
四、T淋巴细胞亚群检测
ABC法检测CD3、CD4、CD8。高倍镜下计数200个有核细胞，其中细胞膜上或细胞浆内有棕黄色标记物明显着色者为阳性细胞，计数百分比。
五、统计方法
由于肝癌病人免疫状态差异很大，故以治疗前后病人的免疫指标作比较。治疗后的指标以治疗后第一次为准，作配对t检验。用BASE医用统计软件包。
结 果
一、临床观察
微波固化组选择的病人都是晚期肝癌病人，术中发现不能行手术切除治疗，只能作姑息性的微波固化治疗。经过微波固化后的病人，只要身体条件许可，患者可继续作介入治疗或放射治疗或其他综合治疗。据不完全的随访记录，患者多数在3至6个月内死亡，有两例超过1年，最长的至随访时已存活22个月，并已行二期手术切除。术后病理证实微波固化均已为纤维细胞浸润。
, 百拇医药
二、患者治疗前后免疫指标的变化
见表1。在单纯微波固化留置组，9名患者的术后NK活性、LAK活性及CD3百分比均高于术前，P<0.01，CD4与CD8的比值无显著差异。微波固化治疗后免疫指标的变化趋势基本上有一个先上升后下降的趋势，不同病人，治疗后免疫指标开始下降的时间也不同，早的在治疗后第二周就开始下降，晚的也在治疗后第四周下降，但是在我们检测的时间内，治疗后的指标均高于术前。表2是一典型患者的免疫指标的变化。
表1 各组治疗前后免疫指标的变化 分组
免疫指标
术前
术后第一次
P值
, 百拇医药
固化组(n=9)
NK活性
30.9±4.7
38.5±8.8
<0.01
LAK活性
19.8±3.4
25.0±5.4
<0.01
CD3百分比
54.7±3.0
58.0±1.95
, 百拇医药
<0.01
切除组(n=12)
NK活性
32.1±9.2
30.5±14.7
>0.05
LAK活性
19.8±9.2
18.0±7.7
>0.05
CD3百分比
55.8±4.0
, http://www.100md.com
55.3±4.55
>0.05
TAE组(n=11)
NK活性
21.4±13.3
20.2±10.2
>0.05
LAK活性
14.9±9.1
12.4±5.6
>0.05
CD3百分比
, 百拇医药
56.0±3.8
54.1±3.0
>0.05
表2 典型肝癌病人微波组织凝固前后细胞免疫力的变化
术前
术后
第1周
第3周
第5周
第6周
第8周
NK活性(%)
, http://www.100md.com 28.2
43.1
41.1
33.2
29.0
31.2
LAK活性(%)
19.4
27.4
34.5
26.3
21.7
27.2
, 百拇医药
CD3(%)
54.3
57.2
60.8
60.7
57.2
57.0
CD4(%)
42.0
41.0
41.7
41.0
, http://www.100md.com
40.5
41.0
CD8(%)
31.0
32.0
29.0
31.2
30.0
33.0
在手术切除组，3例患者术后的NK活性和LAK活性高于术前，9例患者低于术前。术后平均略低于术前，无显著差异(P>0.05)。
在TAE组，5例患者治疗后的NK活性和LAK活性高于治疗前，6例患者低于治疗前。治疗后平均略低于治疗前，无显著差异(P>0.05)。讨 论
, 百拇医药
一、微波组织凝固治疗晚期肝癌的临床效果
Hamazoe等〔5〕报道用微波固化治疗8例不可切除的肝癌，其中5例是术中只使用了微波固化留置肿瘤，生存期最长为一年半，平均1年。Murakami等〔6〕报道了9例经皮穿刺微波固化治疗肝癌，其中5例完全治愈，2例肿瘤较大的病人则分别存活了4个月和6个月。杨彤翰等〔7〕报道4例单纯高温固化、15例肝局部切除、12例局部切除加高温固化、10例TAE治疗肝癌的治疗效果，结果为术后平均存活期，局部切除加高温固化组为1136天，局部切除组为428.8天，TAE组为145.6天，单纯高温固化组为103.3天。我们的临床治疗结果与上述相仿。我们的印象是影响微波固化治疗肿瘤效果的关键在于微波固化肿瘤的彻底性，这也是微波组织凝固技术上的难点。目前插入式微波固化其热型图是以微波天线根部为中心点的圆锥形体，有效深度为3.08厘米。因此，尽管逐针固化，表面肿瘤全部坏死，在深部仍有热力达不到的死角，若肿瘤较厚，则更是如此。如何改善微波固化的热力分布及加强固化深度以提高微波固化肿瘤的彻底性，是今后的研究方向之一。
, 百拇医药
二、微波组织凝固对荷瘤宿主免疫力的影响
微波固化治疗肿瘤对宿主免疫力的影响，这方面的临床报道很少。1984年，Shoji等〔8〕用微波固化治疗1例晚期骨肉瘤病人，发现患者淋巴细胞总数和淋巴细胞转化率增高，但患者还是在治疗后3个月因肿瘤进展而死亡。Stawarz等〔9〕报道了用微波局部高温治疗15例晚期前列腺癌的结果，发现治疗后，患者的CD3总数、淋巴细胞对ConA的有丝分裂反应、CD4/CD8和NK活性均显著提高，而同期观察的15例良性前列腺增生患者和30例志愿者则无此反应，作者还发现治疗效果与NK活性有一定的相关性。单根法等〔10〕报道了用微波固化治疗10例恶性肿瘤，发现治疗后，NK活性和淋巴细胞转化率明显增高，而抗体滴度与治疗前相比无显著差异。我们的临床观察表明：微波固化肝癌留置确实可以提高宿主的细胞免疫力，而手术切除和肝动脉栓塞化疗则无此作用，甚至可能由于创伤使宿主在短期内有个免疫抑制期。微波固化后刺激细胞免疫力提高，其机理还不清楚，我们推测可能是①微波固化直接杀死肿瘤，减少肿瘤负荷，减轻了肿瘤引起的免疫抑制;②微波固化在肿瘤局部造成炎性环境，有利于抗原提呈细胞聚集，提取、加工肿瘤抗原，诱发抗肿瘤免疫。此外，微波固化后刺激机体细胞免疫力提高其临床意义尚有待进一步研究，因为目前肝癌治疗的关键仍是尽早彻底清除肿瘤。
, 百拇医药
参 考 文 献
1 Tabuse K,Katsumi M,Kobashi Y,et al.Microwave surgery:hepatectomy using a microwave tissue coagulator.World J Surg,1985,9(1):136-143.
2 Xin-Da Zhou,Zhao-You,Ye-Qin Yu,et al.Microwave surgery in the treatment of hepatocellular carcinoma.Semiars in Surgical Oncology,1993,9(2):318-322.
3 Po-Huang Lee,Yue-Jau Chang,Ren-Hua Hu,et al.Use of microwave tissue coagulation in hepatocellular carcinoma resection:compared with Lin's hepatic clamp.J Formos Med Assoc,1994,93(8):696-690.
, 百拇医药
4 谢伯祥,鄂云翔,王化勇,等.局部高温固化治疗肝癌.肿瘤,1993,13(4):152-155.
5 Hamazoe R,Hirooka Y,Ohtani S,et al.Intraoperative microwave tissue coagulation as treatment for patients with nonresectable hepatocellular carcinoma.Cancer,1995,75(3):794-800.
6 Murakami R,Yoshimatsu S,Yamashita Y,et al.Treatment of hepatocellular carcinoma:value of percutaneous microwave coagulation.AJR,1995,164:1159-1167.
7 杨彤翰,黄皎琳.肝叶切除、肝动脉栓塞、高温固化在原发性肝癌治疗中的疗效探讨.中华肿瘤杂志,1992,14(2):313.
, http://www.100md.com
8 Shoji S,Yamue H,Tabuse K,et al.Microwave tissue coagulation for the treatment of advanced inoperable sarcoma.Arch Jpn Chir,1984,53(6):786-793.
9 Stawarz B,Zielinski H,Szmigiei S,et al.Transrectal hyperthermia as palliative treatment for advanced adenocarcinoma of prostate and studies of cell-mediated immunity.Urology,1993,41(6):548-553.
10 单根法,隆桂麟,李国庆,等.微波组织凝固抗肿瘤效应研究.中华理疗杂志,1990,4:203-204.
(收稿 1998-01-06 修回 1998-05-10), 百拇医药(管军* 姚晓平 吴孟超 沈茜)
单位：200433上海东方肝胆外科研究所(管军、姚晓平、吴孟超)；上海长海医院免疫室(沈茜)；*现在上海长征医院急救科
关键词：肝肿瘤/治疗；微波/治疗应用；肝肿瘤/免疫学
980313.htm 摘 要 目的 观察晚期不可切除肝癌患者行微波组织凝固治疗前后抗肿瘤免疫力的变化。方法 病人分为微波固化组(n=9)、切除组(n=12)和肝动脉栓塞化疗(transarterial embolization,TAE)组(n=11)。 分别于治疗前后检测NK活性、LAK活性和T细胞亚群。结果 微波固化组存活最长的一例至随访时已有22个月。微波固化组患者治疗后NK活性、LAK活性及CD3百分比均显著高于治疗前(P<0.01)。而切除组及TAE组治疗前后无显著变化。结论 微波固化后留置可以刺激宿主的抗肿瘤免疫力。其机理及意义有待进一步研究。
, 百拇医药
中图号 R735.7
Effect of Microwave Tissue Coagulation on the Anti-tumor Immunity of Advanced Hepatoma Patients Guan Jun，Yao Xiaoping，Wu Mengchao，et al.East Institute of Hepatobiliary Surgery，Shanghai200433
Abstract Objective To investigate the effect of microwave tissue coagulation(MTC) on the anti-tumor immunity of patients with advanced unresectable hepatoma.Methods Patients were divided into three groups:MTC group(n=9),resection group(n=12),transarterial embolization(TAE) group(n=11).NK activity,LAK activity and T lymphocytes subsets were examined in all patients before and after the treatment respectively.Results The longest survival in MTC group was 22 months during follow-up.NK activity,LAK activity and CD3 percentage increased significantly(P<0.01) after MTC treatment,which were not seen after resection and TAE(P>0.05).Conclusion Indwelling hepatoma after MTC treatment could activize the anti-tumor immunity of the patients.The mechanisms and the role of the effect need further study.
, 百拇医药
Key words liver neoplasms/ther;microwaves/ther use;liver neoplasms/immol
微波固化治疗肝癌的临床报道已为数不少〔1～4〕，集中在中国和日本。利用微波固化作肝切除术已取得一致认同，公认它能大大减少出血量，提高肝癌切除率，对破裂的肝癌能直接固化止血。对无法切除的肿瘤，进行固化留置治疗，目前尚未见大宗病例报道。固化治疗肿瘤对宿主免疫力的影响，这方面的临床报道更少。本文现将结果报告如下。
资 料 与 方 法
一、分组
1.微波固化留置组:9例，均为男性，年龄平均为43岁，为1993年11月～1994年10月在我科行肝癌微波固化后留置治疗的病人。病人的选择标准主要是术中发现肿瘤太大或位置险恶或已广泛多发播散而不宜行手术切除者。微波固化方法：将插入式微波组织凝固器(福建福嘉医疗器械有限公司制造，长海医院监制)的天线插入预固化的肝癌实体内，功率100瓦，持续1分钟，固化后的肝癌呈蜡黄色，范围约为直径1厘米。再同法依次逐点固化，点与点之间的距离为1厘米。尽可能将表面可触及的瘤体全部固化。
, 百拇医药
2.手术切除组:12例，10例男性，2例女性，平均45岁。为同期随机选择的行手术切除的肝癌病人。
3.肝动脉栓塞化疗(transarterial embolization,TAE)组:11例，9例男性，2例女性，平均50岁。为同期随机选择的在我科或康复部行TAE治疗的肝癌病人。
二、检测指标与取样方法
外周血NK活性，LAK活性，T细胞亚群(CD3、CD4、CD8)。采用双盲法，标本送长海医院免疫室检测。上述所有病人均于治疗前检测一次，治疗后第一周起，根据随访条件，检测1～5次不等。
三、NK、LAK活性检测
用〔3H〕TdR(中国科学院原子能研究所)释放法测NK、LAK细胞杀伤活性。用液闪仪(TRI-CARB 460CD，美国PACKARD公司产品)测定上清中的释放活性。
, 百拇医药
杀伤率＝(试验孔计数-自然释放孔计数)÷(最大释放孔计数-自然释放孔计数)×100%
四、T淋巴细胞亚群检测
ABC法检测CD3、CD4、CD8。高倍镜下计数200个有核细胞，其中细胞膜上或细胞浆内有棕黄色标记物明显着色者为阳性细胞，计数百分比。
五、统计方法
由于肝癌病人免疫状态差异很大，故以治疗前后病人的免疫指标作比较。治疗后的指标以治疗后第一次为准，作配对t检验。用BASE医用统计软件包。
结 果
一、临床观察
微波固化组选择的病人都是晚期肝癌病人，术中发现不能行手术切除治疗，只能作姑息性的微波固化治疗。经过微波固化后的病人，只要身体条件许可，患者可继续作介入治疗或放射治疗或其他综合治疗。据不完全的随访记录，患者多数在3至6个月内死亡，有两例超过1年，最长的至随访时已存活22个月，并已行二期手术切除。术后病理证实微波固化均已为纤维细胞浸润。
, 百拇医药
二、患者治疗前后免疫指标的变化
见表1。在单纯微波固化留置组，9名患者的术后NK活性、LAK活性及CD3百分比均高于术前，P<0.01，CD4与CD8的比值无显著差异。微波固化治疗后免疫指标的变化趋势基本上有一个先上升后下降的趋势，不同病人，治疗后免疫指标开始下降的时间也不同，早的在治疗后第二周就开始下降，晚的也在治疗后第四周下降，但是在我们检测的时间内，治疗后的指标均高于术前。表2是一典型患者的免疫指标的变化。
表1 各组治疗前后免疫指标的变化 分组
免疫指标
术前
术后第一次
P值
, 百拇医药
固化组(n=9)
NK活性
30.9±4.7
38.5±8.8
<0.01
LAK活性
19.8±3.4
25.0±5.4
<0.01
CD3百分比
54.7±3.0
58.0±1.95
, 百拇医药
<0.01
切除组(n=12)
NK活性
32.1±9.2
30.5±14.7
>0.05
LAK活性
19.8±9.2
18.0±7.7
>0.05
CD3百分比
55.8±4.0
, http://www.100md.com
55.3±4.55
>0.05
TAE组(n=11)
NK活性
21.4±13.3
20.2±10.2
>0.05
LAK活性
14.9±9.1
12.4±5.6
>0.05
CD3百分比
, 百拇医药
56.0±3.8
54.1±3.0
>0.05
表2 典型肝癌病人微波组织凝固前后细胞免疫力的变化
术前
术后
第1周
第3周
第5周
第6周
第8周
NK活性(%)
, http://www.100md.com 28.2
43.1
41.1
33.2
29.0
31.2
LAK活性(%)
19.4
27.4
34.5
26.3
21.7
27.2
, 百拇医药
CD3(%)
54.3
57.2
60.8
60.7
57.2
57.0
CD4(%)
42.0
41.0
41.7
41.0
, http://www.100md.com
40.5
41.0
CD8(%)
31.0
32.0
29.0
31.2
30.0
33.0
在手术切除组，3例患者术后的NK活性和LAK活性高于术前，9例患者低于术前。术后平均略低于术前，无显著差异(P>0.05)。
在TAE组，5例患者治疗后的NK活性和LAK活性高于治疗前，6例患者低于治疗前。治疗后平均略低于治疗前，无显著差异(P>0.05)。讨 论
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一、微波组织凝固治疗晚期肝癌的临床效果
Hamazoe等〔5〕报道用微波固化治疗8例不可切除的肝癌，其中5例是术中只使用了微波固化留置肿瘤，生存期最长为一年半，平均1年。Murakami等〔6〕报道了9例经皮穿刺微波固化治疗肝癌，其中5例完全治愈，2例肿瘤较大的病人则分别存活了4个月和6个月。杨彤翰等〔7〕报道4例单纯高温固化、15例肝局部切除、12例局部切除加高温固化、10例TAE治疗肝癌的治疗效果，结果为术后平均存活期，局部切除加高温固化组为1136天，局部切除组为428.8天，TAE组为145.6天，单纯高温固化组为103.3天。我们的临床治疗结果与上述相仿。我们的印象是影响微波固化治疗肿瘤效果的关键在于微波固化肿瘤的彻底性，这也是微波组织凝固技术上的难点。目前插入式微波固化其热型图是以微波天线根部为中心点的圆锥形体，有效深度为3.08厘米。因此，尽管逐针固化，表面肿瘤全部坏死，在深部仍有热力达不到的死角，若肿瘤较厚，则更是如此。如何改善微波固化的热力分布及加强固化深度以提高微波固化肿瘤的彻底性，是今后的研究方向之一。
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二、微波组织凝固对荷瘤宿主免疫力的影响
微波固化治疗肿瘤对宿主免疫力的影响，这方面的临床报道很少。1984年，Shoji等〔8〕用微波固化治疗1例晚期骨肉瘤病人，发现患者淋巴细胞总数和淋巴细胞转化率增高，但患者还是在治疗后3个月因肿瘤进展而死亡。Stawarz等〔9〕报道了用微波局部高温治疗15例晚期前列腺癌的结果，发现治疗后，患者的CD3总数、淋巴细胞对ConA的有丝分裂反应、CD4/CD8和NK活性均显著提高，而同期观察的15例良性前列腺增生患者和30例志愿者则无此反应，作者还发现治疗效果与NK活性有一定的相关性。单根法等〔10〕报道了用微波固化治疗10例恶性肿瘤，发现治疗后，NK活性和淋巴细胞转化率明显增高，而抗体滴度与治疗前相比无显著差异。我们的临床观察表明：微波固化肝癌留置确实可以提高宿主的细胞免疫力，而手术切除和肝动脉栓塞化疗则无此作用，甚至可能由于创伤使宿主在短期内有个免疫抑制期。微波固化后刺激细胞免疫力提高，其机理还不清楚，我们推测可能是①微波固化直接杀死肿瘤，减少肿瘤负荷，减轻了肿瘤引起的免疫抑制;②微波固化在肿瘤局部造成炎性环境，有利于抗原提呈细胞聚集，提取、加工肿瘤抗原，诱发抗肿瘤免疫。此外，微波固化后刺激机体细胞免疫力提高其临床意义尚有待进一步研究，因为目前肝癌治疗的关键仍是尽早彻底清除肿瘤。
, 百拇医药
参 考 文 献
1 Tabuse K,Katsumi M,Kobashi Y,et al.Microwave surgery:hepatectomy using a microwave tissue coagulator.World J Surg,1985,9(1):136-143.
2 Xin-Da Zhou,Zhao-You,Ye-Qin Yu,et al.Microwave surgery in the treatment of hepatocellular carcinoma.Semiars in Surgical Oncology,1993,9(2):318-322.
3 Po-Huang Lee,Yue-Jau Chang,Ren-Hua Hu,et al.Use of microwave tissue coagulation in hepatocellular carcinoma resection:compared with Lin's hepatic clamp.J Formos Med Assoc,1994,93(8):696-690.
, 百拇医药
4 谢伯祥,鄂云翔,王化勇,等.局部高温固化治疗肝癌.肿瘤,1993,13(4):152-155.
5 Hamazoe R,Hirooka Y,Ohtani S,et al.Intraoperative microwave tissue coagulation as treatment for patients with nonresectable hepatocellular carcinoma.Cancer,1995,75(3):794-800.
6 Murakami R,Yoshimatsu S,Yamashita Y,et al.Treatment of hepatocellular carcinoma:value of percutaneous microwave coagulation.AJR,1995,164:1159-1167.
7 杨彤翰,黄皎琳.肝叶切除、肝动脉栓塞、高温固化在原发性肝癌治疗中的疗效探讨.中华肿瘤杂志,1992,14(2):313.
, http://www.100md.com
8 Shoji S,Yamue H,Tabuse K,et al.Microwave tissue coagulation for the treatment of advanced inoperable sarcoma.Arch Jpn Chir,1984,53(6):786-793.
9 Stawarz B,Zielinski H,Szmigiei S,et al.Transrectal hyperthermia as palliative treatment for advanced adenocarcinoma of prostate and studies of cell-mediated immunity.Urology,1993,41(6):548-553.
10 单根法,隆桂麟,李国庆,等.微波组织凝固抗肿瘤效应研究.中华理疗杂志,1990,4:203-204.
(收稿 1998-01-06 修回 1998-05-10), 百拇医药(管军* 姚晓平 吴孟超 沈茜)