骨肉瘤雌、孕激素受体的病理学研究
作者：刘金钊 乐兴祥 李玉军
单位：266003 青岛大学医学院附属医院骨科(刘金钊、乐兴祥)，病理科(李玉军)
关键词：骨肉瘤；受体，雌激素；受体，孕酮；病理学，临床
中华外科杂志/980417 【摘要】 目的 探讨雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)与骨肉瘤病理特征的关系。方法 应用免疫组化SP方法(改良SP法)对65例骨肉瘤蜡块组织进行了ER、PR检测。骨肉瘤的病理分型及分级按刘子君法划分。结果 (1)阳性率：ER40%(26例),PR32.3%(21例)；(2)阳性颗粒分布于胞浆和胞核;(3)高分化组ER、PR阳性率高于低分化组,差异有显著性意义(P<0.05);(4)病理分型与ER、PR阳性率无明显相关关系(P>0.05)。结论 骨肉瘤瘤细胞中存在ER、PR,其阳性率与肿瘤分化程度呈正相关。
Pathological study of ER and PR in osteosarcoma Liu Jinzhao,Le Xingxiang,Li Yujun. Department of Orthopaedics, Affiliated Hospital of Medical College，Qingdao University,Qingdao 266003.
, http://www.100md.com
【Abstract】 Objective To determine the relationship between estrogen receptor(ER)，progesterone receptor(PR) and pathological characteristics of osteosarcoma. Method ER and PR were detected by streptavidin/peroxidase(SP) method immunohistochemically using the paraffin embedded tissues from 65 cases of osteosarcoma.The patients were typed and graded pathologically according to Liu Zijun's classification. Result The positive rates of ER and PR were 40%(26/65),32.3%(21/65) respectively. The positive particles were distributed in cytoplasm and nucleus.The positive rates of ER and PR in osteosarcoma with higher cell differentiation grade were higher than those in the tumor with lower one.The differences were statistically significant (P<0.05 ).There were no relations to the pathological type. Conclusion ER and PR exist in osteosarcoma and their positive rates are related to the cell differentiation of osteosarcoma.
, 百拇医药
【Key words】 Osteosarcoma Receptors,estrogen Receptors,progesterone Pathology,clinical
1980年Stedman[1]首次用凝胶过滤法在骨肉瘤组织中的瘤细胞检测到雌激素受体(ER),其后又有学者通过细胞培养技术和免疫组化法对骨肉瘤细胞中性激素受体进行了检测[2],而性激素受体与骨肉瘤病理特征的关系尚未见研究报道。我们应用链菌素亲生物蛋白-过氧化酶联结法即改良SP方法[3](Streptavidin Peroxidase Conjugated Method)对65例骨肉瘤蜡块组织的瘤细胞内ER、PR进行了检测,以探讨瘤组织细胞中性激素受体水平及其与骨肉瘤病理特征的关系。
材料与方法
1.一般资料:本组65例标本为经我院病理证实的典型的骨肉瘤的蜡块组织。取材部位:股骨31例，胫骨17例,腓骨6例,下颌骨4例,髂骨3例,肱骨2例,肩胛骨2例。病理分型及分级按刘子君法[4]划分,Ⅰ型骨母细胞型30例(包括Ⅰa高分化型6例;Ⅰb中分化型10例;Ⅰc低分化型14例);Ⅱ型软骨母细胞型12例;Ⅲ型纤维母细胞型10例;Ⅳ型混合型9例;Ⅴ型血管扩张型4例。所有患者术前均未接受内分泌治疗。
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2.试剂：兔抗雌二醇(即用型)；兔抗孕酮(即用型);SP-9001试剂盒(美国Zymed公司)。
3.检测方法:应用改良SP法[3]：石蜡切片，常规脱蜡，水化；3%H2O2孵育5分钟，消除内源性过氧化酶的活性；蒸馏水冲洗,磷酸盐缓冲溶液(PBS)浸泡5分钟；10%正常羊血清(PBS稀释)室温10分钟；倾去血清，加入一抗(分别为兔抗雌二醇,兔抗孕酮)37℃孵育30分钟;PBS冲洗,5分钟×3次;滴加经1∶1000 PBS稀释并以生物素标记的二抗羊抗兔IgG，37℃孵育10分钟;PBS冲洗,3分钟×3次;过氧化酶标记的链酶卵白素,PBS 1∶100稀释,37℃孵育10分钟;PBS冲洗,3分钟×3次;DAB(含H2O2)显色(镜下控制显色时间);自来水充分冲洗,1%苏木素复染,脱水,透明,封片,观察。
阳性标准：形态完整,结构清晰,胞浆和(或)胞核有棕黄色颗粒为阳性细胞,阳性细胞多于20%为ER、PR阳性。
, 百拇医药
采用χ2检验对所得数据进行统计学处理。
结 果
1.ER、PR的表达：本组65例中，Ⅰ～Ⅴ型共检测出ER阳性者26例(40%)，PR阳性者21例(32.3%)。骨肉瘤ER、PR阳性表达与病理特征的关系见附表。
附表 骨肉瘤ER、PR阳性表达与病理特征的关系 病理特征
例数
ER阳性(例)
PR阳性(例)
病理分型*
Ⅰ
30
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13
11
Ⅱ
12
5
4
Ⅲ
10
4
3
Ⅳ
9
3
2
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Ⅴ
4
1
1
病理分级△
Ⅰa
6
5
3
Ⅰb
10
5
4
Ⅰc
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14
3
4
注：*各分型间比较P>0.05，△各分级间比较P<0.05 2.阳性颗粒的分布状态：阳性颗粒为棕黄色，位于胞浆和(或)胞核；常见整个细胞团均为阳性细胞；也有阳性细胞与阴性细胞相间的状态(图1，2)。
讨 论
1.ER、PR在骨肉瘤中的表达：本研究结果显示ER阳性率40%，PR阳性率32.3%，说明骨肉瘤有一定水平的雌、孕激素受体存在，从而为根据受体状态指导临床进行内分泌治疗提供了依据。本研究在骨肉瘤细胞核和细胞浆中均检测到ER、PR阳性染色，这与Ikegmi等[2]用细胞培养技术和免疫组化法对骨肉瘤性激素受体的研究结果一致。
, 百拇医药
2.ER、PR与骨肉瘤病理特征的关系：Stedman[1]和Ikegmi等[2]分别用不同方法对骨肉瘤细胞中性激素受体进行了检测,但没有与病理特征联系起来进行分析。本研究结果显示，尽管不同的病理分型骨肉瘤细胞ER、PR阳性率不同，但经统计学处理差异无显著性意义(P>0.05)。因此可以认为，ER、PR阳性率与病理分型无明显相关关系。根据刘子君分级[4]将Ⅰ型骨母细胞型分为高、中、低分化组,检测结果显示瘤细胞ER,PR的表达与分化程度呈正相关。即肿瘤分化程度高者(Ⅰa),ER、PR阳性率也高(分别为83.3%和50%),肿瘤分化程度低者(Ⅰc)，ER、PR阳性率也低(分别为21.4%和28.6%)，经统计学处理差异有显著性意义(P<0.05),这一研究结果与乳腺癌研究的发现相似[5，6]。因此，我们认为，用免疫组化改良SP法在骨肉瘤石蜡切片上检测瘤细胞内的ER、PR，可作为判断骨肉瘤分化程度高低的生物学指标之一。
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图1 整个瘤细胞团全为阳性细胞，阳性颗粒位于胞浆和胞核 ×400
图2 大量瘤巨细胞呈阳性染色，阳性颗粒们于胞浆和胞核 ×400
参 考 文 献
1Stedman KE.Estrogen receptor proteins in diverse human tumors.Arch Surg，1980，115:244-247.
2Ikegmi A,Inoue S,Hosoi T,et al.Immunohistochemical detection andnorthern blot analysis of estrogen receptor in osteoblastic cells.J Bone Miner Res,1993,8:1103-1109.
3唐建林,高东宸.用改良LSAB法检测乳腺癌雌激素受体和孕激素受体.中华病理学杂志,1994,23:120-121.
4刘子君,主编.骨关节病理学.北京：人民卫生出版社,1992.142.
5许良中,许世明,刘亦法,等.101例乳腺癌雌激素受体的测定.肿瘤,1984,4:18-20.
6王保太,吴强.乳腺癌性类固醇激素的测定及意义.临床与实验病理学杂志,1992,8:165-167., http://www.100md.com
单位：266003 青岛大学医学院附属医院骨科(刘金钊、乐兴祥)，病理科(李玉军)
关键词：骨肉瘤；受体，雌激素；受体，孕酮；病理学，临床
中华外科杂志/980417 【摘要】 目的 探讨雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)与骨肉瘤病理特征的关系。方法 应用免疫组化SP方法(改良SP法)对65例骨肉瘤蜡块组织进行了ER、PR检测。骨肉瘤的病理分型及分级按刘子君法划分。结果 (1)阳性率：ER40%(26例),PR32.3%(21例)；(2)阳性颗粒分布于胞浆和胞核;(3)高分化组ER、PR阳性率高于低分化组,差异有显著性意义(P<0.05);(4)病理分型与ER、PR阳性率无明显相关关系(P>0.05)。结论 骨肉瘤瘤细胞中存在ER、PR,其阳性率与肿瘤分化程度呈正相关。
Pathological study of ER and PR in osteosarcoma Liu Jinzhao,Le Xingxiang,Li Yujun. Department of Orthopaedics, Affiliated Hospital of Medical College，Qingdao University,Qingdao 266003.
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【Abstract】 Objective To determine the relationship between estrogen receptor(ER)，progesterone receptor(PR) and pathological characteristics of osteosarcoma. Method ER and PR were detected by streptavidin/peroxidase(SP) method immunohistochemically using the paraffin embedded tissues from 65 cases of osteosarcoma.The patients were typed and graded pathologically according to Liu Zijun's classification. Result The positive rates of ER and PR were 40%(26/65),32.3%(21/65) respectively. The positive particles were distributed in cytoplasm and nucleus.The positive rates of ER and PR in osteosarcoma with higher cell differentiation grade were higher than those in the tumor with lower one.The differences were statistically significant (P<0.05 ).There were no relations to the pathological type. Conclusion ER and PR exist in osteosarcoma and their positive rates are related to the cell differentiation of osteosarcoma.
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【Key words】 Osteosarcoma Receptors,estrogen Receptors,progesterone Pathology,clinical
1980年Stedman[1]首次用凝胶过滤法在骨肉瘤组织中的瘤细胞检测到雌激素受体(ER),其后又有学者通过细胞培养技术和免疫组化法对骨肉瘤细胞中性激素受体进行了检测[2],而性激素受体与骨肉瘤病理特征的关系尚未见研究报道。我们应用链菌素亲生物蛋白-过氧化酶联结法即改良SP方法[3](Streptavidin Peroxidase Conjugated Method)对65例骨肉瘤蜡块组织的瘤细胞内ER、PR进行了检测,以探讨瘤组织细胞中性激素受体水平及其与骨肉瘤病理特征的关系。
材料与方法
1.一般资料:本组65例标本为经我院病理证实的典型的骨肉瘤的蜡块组织。取材部位:股骨31例，胫骨17例,腓骨6例,下颌骨4例,髂骨3例,肱骨2例,肩胛骨2例。病理分型及分级按刘子君法[4]划分,Ⅰ型骨母细胞型30例(包括Ⅰa高分化型6例;Ⅰb中分化型10例;Ⅰc低分化型14例);Ⅱ型软骨母细胞型12例;Ⅲ型纤维母细胞型10例;Ⅳ型混合型9例;Ⅴ型血管扩张型4例。所有患者术前均未接受内分泌治疗。
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2.试剂：兔抗雌二醇(即用型)；兔抗孕酮(即用型);SP-9001试剂盒(美国Zymed公司)。
3.检测方法:应用改良SP法[3]：石蜡切片，常规脱蜡，水化；3%H2O2孵育5分钟，消除内源性过氧化酶的活性；蒸馏水冲洗,磷酸盐缓冲溶液(PBS)浸泡5分钟；10%正常羊血清(PBS稀释)室温10分钟；倾去血清，加入一抗(分别为兔抗雌二醇,兔抗孕酮)37℃孵育30分钟;PBS冲洗,5分钟×3次;滴加经1∶1000 PBS稀释并以生物素标记的二抗羊抗兔IgG，37℃孵育10分钟;PBS冲洗,3分钟×3次;过氧化酶标记的链酶卵白素,PBS 1∶100稀释,37℃孵育10分钟;PBS冲洗,3分钟×3次;DAB(含H2O2)显色(镜下控制显色时间);自来水充分冲洗,1%苏木素复染,脱水,透明,封片,观察。
阳性标准：形态完整,结构清晰,胞浆和(或)胞核有棕黄色颗粒为阳性细胞,阳性细胞多于20%为ER、PR阳性。
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采用χ2检验对所得数据进行统计学处理。
结 果
1.ER、PR的表达：本组65例中，Ⅰ～Ⅴ型共检测出ER阳性者26例(40%)，PR阳性者21例(32.3%)。骨肉瘤ER、PR阳性表达与病理特征的关系见附表。
附表 骨肉瘤ER、PR阳性表达与病理特征的关系 病理特征
例数
ER阳性(例)
PR阳性(例)
病理分型*
Ⅰ
30
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13
11
Ⅱ
12
5
4
Ⅲ
10
4
3
Ⅳ
9
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Ⅴ
4
1
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病理分级△
Ⅰa
6
5
3
Ⅰb
10
5
4
Ⅰc
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14
3
4
注：*各分型间比较P>0.05，△各分级间比较P<0.05 2.阳性颗粒的分布状态：阳性颗粒为棕黄色，位于胞浆和(或)胞核；常见整个细胞团均为阳性细胞；也有阳性细胞与阴性细胞相间的状态(图1，2)。
讨 论
1.ER、PR在骨肉瘤中的表达：本研究结果显示ER阳性率40%，PR阳性率32.3%，说明骨肉瘤有一定水平的雌、孕激素受体存在，从而为根据受体状态指导临床进行内分泌治疗提供了依据。本研究在骨肉瘤细胞核和细胞浆中均检测到ER、PR阳性染色，这与Ikegmi等[2]用细胞培养技术和免疫组化法对骨肉瘤性激素受体的研究结果一致。
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2.ER、PR与骨肉瘤病理特征的关系：Stedman[1]和Ikegmi等[2]分别用不同方法对骨肉瘤细胞中性激素受体进行了检测,但没有与病理特征联系起来进行分析。本研究结果显示，尽管不同的病理分型骨肉瘤细胞ER、PR阳性率不同，但经统计学处理差异无显著性意义(P>0.05)。因此可以认为，ER、PR阳性率与病理分型无明显相关关系。根据刘子君分级[4]将Ⅰ型骨母细胞型分为高、中、低分化组,检测结果显示瘤细胞ER,PR的表达与分化程度呈正相关。即肿瘤分化程度高者(Ⅰa),ER、PR阳性率也高(分别为83.3%和50%),肿瘤分化程度低者(Ⅰc)，ER、PR阳性率也低(分别为21.4%和28.6%)，经统计学处理差异有显著性意义(P<0.05),这一研究结果与乳腺癌研究的发现相似[5，6]。因此，我们认为，用免疫组化改良SP法在骨肉瘤石蜡切片上检测瘤细胞内的ER、PR，可作为判断骨肉瘤分化程度高低的生物学指标之一。
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图1 整个瘤细胞团全为阳性细胞，阳性颗粒位于胞浆和胞核 ×400
图2 大量瘤巨细胞呈阳性染色，阳性颗粒们于胞浆和胞核 ×400
参 考 文 献
1Stedman KE.Estrogen receptor proteins in diverse human tumors.Arch Surg，1980，115:244-247.
2Ikegmi A,Inoue S,Hosoi T,et al.Immunohistochemical detection andnorthern blot analysis of estrogen receptor in osteoblastic cells.J Bone Miner Res,1993,8:1103-1109.
3唐建林,高东宸.用改良LSAB法检测乳腺癌雌激素受体和孕激素受体.中华病理学杂志,1994,23:120-121.
4刘子君,主编.骨关节病理学.北京：人民卫生出版社,1992.142.
5许良中,许世明,刘亦法,等.101例乳腺癌雌激素受体的测定.肿瘤,1984,4:18-20.
6王保太,吴强.乳腺癌性类固醇激素的测定及意义.临床与实验病理学杂志,1992,8:165-167., http://www.100md.com