培养大鼠脑皮层神经元损伤后c-fos蛋白表达
作者：王克万 杨志焕 王正国 朱佩芳 包新民 舒斯云 陈长才
单位：王克万 杨志焕 王正国 朱佩芳 400042 重庆,第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所；包新民 舒斯云 陈长才 第一军医大学附属珠江医院神经医学中心
关键词：c-fos蛋白；神经元培养；谷氨酸；继发性脑损伤
中华创伤杂志980409 【摘要】 目的 观察培养的大鼠皮层神经元损伤后c-fos蛋白表达,探讨其在继发性脑损伤中的作用。方法 混合培养10～12天SD胎鼠的皮层神经元分别用谷氨酸和机械划痕损伤。采用SP法进行免疫组化双重标记反应。结果 谷氨酸作用后2小时,c-fos蛋白开始表达,4小时后在核中明显浓聚。创伤后2小时仅在创道边缘直接损伤部位有c-fos蛋白表达,远离创道未直接损伤区的神经元在创伤后4小时才出现;少数神经元突起远端有明显c-fos蛋白颗粒;损伤后6小时神经元突起开始崩解,但c-fos蛋白颗粒仍未消失。结论 谷氨酸损伤可引起培养的神经元c-fos蛋白的大量表达,损伤后培养皮层神经元和胶质细胞可以释放出神经毒性物质,培养神经元损伤后c-fos蛋白过度表达可能与凋亡有关。
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Expression of c-fos Protein After Cultured Cortical Neuron Injury in Rats WANG Ke-wan, YANG Zhi-huan, WANG Zheng-guo, et al. Research Institute of Surgery, Third Military Medical University, Chongqing 400042
【Abstract】 Aim To observe the expression of c-fos protein in cultured cortical neurons subject to either glutamate or mechanical injury in rats, and to study the effect of c-fos protein on brain injury. Methods Mixed cultured cortical neurons from SD rats were injured by either glutamate or mechanical force, then the expression of c-fos protein was studied with double-labeled immunohistochemistry. Results Two hours after glutamate injury, the expression of c-fos protein began in the nuclei and 4 hours later it reached peak, and c-fos protein only expressed in the direct injured area at the edge of traumatic tracts after 2 hours and began to express till 4 hours in the indirect injured area far from traumatic tracts. The positive immunoreaction of c-fos protein granule remained. Conclusion The c-fos protein expression can be induced by glutamate. Neurotoxic substances were produced in cultured medium after traumatic injury, and c-fos expression may be associated with neuron apoptosis.
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【Key words】 c-fos protein Culture neuron Glutamate Secondary brain injury
颅脑损伤和脑缺血等应激因素可诱使c-fos原癌基因在神经元中瞬间表达,为细胞代谢活动变化的标志。由于基因的表达产物c-fos蛋白可能参与细胞内信号转导,其在继发性脑损伤中的作用近年来引起人们的普遍关注。笔者利用体外培养神经元损伤模型和免疫组化双重标记技术,动态地观察c-fos蛋白在体外培养大鼠皮层神经元中损伤后的表达,并探讨其在继发性脑损伤中的作用。
材料与方法
一、混合培养胎鼠大脑皮层神经元方法
根据Banker等[1]的方法并加以改良如下:无菌分离15～18天胎龄SD胎鼠的大脑皮层,用0.125%的胰蛋白酶消化37℃、20分钟,用含血清的培养液终止消化,制备成细胞数为5×104/ml的细胞悬液,接种于直径为35mm的培养皿中预先放置的涂有多聚赖氨酸的盖玻片上。培养液为含有15%小牛血清的DMEM(Gibco公司),置于37℃、5%CO2的培养箱中培养,隔日换液,培养10～12天待细胞成熟后进行实验。
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二、损伤方法
1.谷氨酸导致的神经元损伤。根据文献[2]所述方法并稍加改良。培养10～12天的皮层神经细胞,用含1mmol/L谷氨酸(Victor公司)的培养液作用20分钟,然后去除含谷氨酸的培养液,用无谷氨酸的培养液洗涤后继续培养,分别于1,2,4,6小时用4℃、4%多聚甲醛固定30分钟。
2.损伤培养神经元方法。根据文献[3]的方法并稍加改良:用无菌注射针头机械性划破培养细胞的全层,在20mm×20mm玻片上纵横平行分别施行8条损伤径路,用DMEM洗涤后,加正常培养液继续培养,分别于1,2,4,6小时用上述方法固定。对照组不施加损伤因素,只用DMEM洗涤固定方法同上。
三、免疫组化双重标记方法
1.c-fos蛋白免疫组化染色。固定后的盖玻片用0.01mol/L PBS洗涤,然后加0.3%Triton X-100PBS作用15分钟,再用2%正常兔血清孵育20分钟,加兔抗c-fos蛋白抗体(1∶800),4℃过夜。采用链霉亲和素-生物素(SP)法进行免疫组化反应(c-fos抗体和SPKit均购自北京中山生物技术公司)。用一抗孵育的细胞洗涤后,分别经IgG/Biotin室温2小时,HRP/SP室温2小时,最后用GDN法[4]呈色,c-fos蛋白在细胞核内呈紫黑色的圆形颗粒。
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2.用NSE抗体标记神经元胞浆和突起。第一次呈色反应完毕后,用PBS冲洗玻片,2%正常兔血清封闭非特异性抗原,然后加兔抗NSE抗体(1∶2 000 Sino-American Biochemistry Co),4℃过夜。然后再分别和IgG/Biotin、HRP/SP反应,用AEC法(AEC Kit购自华美公司)或普通DAB呈色法呈色,神经元胞体和突起被染成红色(AEC法)或棕色(DAB法)。
结 果
一、谷氨酸导致的培养神经元c-fos蛋白表达
1.谷氨酸作用后2小时,细胞开始出现c-fos蛋白表达,c-fos蛋白在胞核中出现,但尚未浓聚,中间尚可见淡染的区域,表明c-fos蛋白正在由胞浆向胞核转运。另外还发现一独特现象,在少数神经元突起的远端也出现c-fos蛋白阳性反应颗粒。
2.谷氨酸作用后4小时,可见c-fos蛋白颗粒明显聚集,密度增高,表达量增加(图3)。3.谷氨酸作用后6小时,可见大量神经元突起开始出现崩解,但c-fos蛋白未见明显消失,有些神经元胞体大部分崩解后,c-fos蛋白颗粒却依然存在(图4)。未行双重标记的神经元,不能分辨胞体和突起。在对照组神经元中无明显c-fos蛋白表达。
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图3 谷氨酸作用后4小时,在突起中可见c-fos阳性反应颗粒。
c-fos-GDN法呈色、NSE-AEC法呈色双重标记 ×400
图4 谷氨酸作用后6小时,神经元开始崩解,c-fos蛋白颗粒尚未消失。
c-fos-GDN法呈色,NSE-DAB法呈色双重标记 ×400
二、创伤导致的培养神经元c-fos蛋白表达
1.创伤后2小时,创道周围的神经元有明显c-fos阳性表达,而远离创道未直接损伤的中心部位则无明显c-fos蛋白表达(图1)。
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图1 创伤后2小时,创道边缘直接损伤区神经元c-fos蛋白阳性反应。
c-fos-GDN法呈色、NSE-AEC法呈色双重标记 ×400
图2 创伤后4小时,远离创道处神经元开始出现c-fos阳性反应。
c-fos-GDN法呈色、NSE-AEC法呈色双重标记 ×200
2.创伤后4小时,在远离创道的中心部位,开始出现c-fos蛋白阳性反应(图2),说明在培养液中产生了使细胞表面受体激活的物质,使c-fos表达。
3.创伤后6小时,c-fos蛋白表达量增多,未受直接损伤区域的神经元胞体和突起也开始出现崩解,但c-fos蛋白颗粒并不消失。
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讨 论
1.c-fos原癌基因属于即刻早期基因家族,当细胞受到外界刺激时,在瞬间产生表达,其表达产物c-fos蛋白立刻转位到细胞核中。c-fos蛋白半衰期短,只有2小时,具有信号系统的特征,可能参与胞浆到胞核的信息传递。因此,c-fos表达增加说明在特定的条件下,有关神经元的功能发生了变化。研究表明,谷氨酸的NMDA受体激活在多种刺激诱导的神经元c-fos基因表达中起重要作用[5]。在本研究中,笔者发现当谷氨酸作用后2小时,培养皮层神经元c-fos蛋白出现表达,4小时后在核中明显浓聚,与基因转录翻译的时间大致相符。表明谷氨酸可激活培养皮层神经元的兴奋性氨基酸受体,引起c-fos表达。
2.损伤混合培养皮层神经元和胶质细胞可释放出神经毒性物质。在创伤后2小时,只在创伤边缘直接损伤部位有c-fos蛋白表达,而远离创道未受直接损伤的部位,在创伤后4小时才开始出现c-fos蛋白表达。说明创伤后培养液中释放出可引起神经元受体激活的物质,使细胞的功能活动发生改变。已有大量研究证实,中枢神经系统损伤可导致细胞外液谷氨酸升高,谷氨酸的NMDA受体激活是c-fos表达的主要原因之一。因此,培养皮层神经元和胶质细胞损伤后可能释放出谷氨酸等毒性物质,引起未受损伤区域的神经元产生继发性损伤。进一步深入研究损伤后细胞释放的物质,将有助于对继发性脑损伤机制的了解。
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笔者利用c-fos为敏感的细胞代谢活动标志这一特点,更直观地证明了创伤后混合培养神经元可产生某些毒性物质,引起继发性神经元损伤。利用免疫组化双标技术,可以直接观察到神经元中c-fos蛋白从开始表达、在核中聚集至细胞变性崩解的过程。另外,笔者发现在少数神经元突起远端有明显的c-fos蛋白颗粒,对这种现象的产生及在信号传递中的作用尚未见报道,有待于进一步研究。
3.c-fos蛋白过度表达与细胞凋亡有关。c-fos原癌基因的表达和许多生理反应有关,在这些情况中,c-fos是一过性表达。但Smeyne等[6]用fos-lacZ转基因小鼠证明c-fos持续过度表达与细胞凋亡有关。c-fos过度表达似乎是细胞终末分化的标志及死亡先兆,且先于细胞出现生化和死亡形态学改变数小时至数天。Draganow等[7]在鼠缺血性脑损伤中也发现神经元即刻早期基因蛋白表达后细胞的延迟性死亡不是坏死,而是凋亡。
在本研究中,笔者发现谷氨酸和创伤可引起培养神经元c-fos蛋白大量表达,c-fos蛋白颗粒持续在核中聚集,有些神经元突起已崩解,c-fos蛋白仍然存在,与细胞凋亡的形态学改变相似,而与生理情况下c-fos蛋白在短期内消失(2小时左右)明显不同。这种现象与凋亡的关系有待进一步深入研究。
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近年研究发现,NMDA受体活化及一氧化氮(NO)过度释放也与神经元调亡有关。另有研究表明NMDA受体激活在短期内引起大量c-fos表达,NMDA受体拮抗剂MK-801几乎可以完全阻断c-fos表达[8]。因此,谷氨酸引起的神经元迟发性死亡可能与NMDA受体激活、c-fos过度表达、细胞凋亡有关。但其确切机制仍不清楚。由于c-fos基因蛋白产物在复杂的细胞信号转导过程中起着重要作用,故深入研究核内信使的表达和作用将有助于了解外界的短暂信息如何使细胞功能发生长时程改变,对揭示细胞生理功能、信号转导和病理机制有深远意义。
参考文献
[1]Banker GA, Cowan WN. Rat hippocampal neurons in dispersed cell culture. Brain Res, 1977, 126∶397-425.
[2]Shimohama, Ogawa N, Tamura Y, et al. Protective effect of nerve growth factor against glutamate-induced neurotoxicity in cultured cortical neurons. Brain Res, 1993, 632∶269-302.
, 百拇医药
[3]Regan RF, Choi DW. The effect of NMDA, AMPA/kainate, and calcium channel antagonists on traumatic cortical neuronal injury in culture. Brain Res, 1994, 633∶236-242.
[4]Shu SY, JU G, Fan LZ. The glucose oxidase-DAB-Nickel method in peroxidase histochemistry of the nervous system. Neurosci Lett, 1988, 85∶169-171.
[5]Morgan JI, Cohrn DR, Hempstead JL, et al. Mapping patterns of c-fos expression in the central nervous system after seizure. Science, 1987, 237∶192-197.
, 百拇医药
[6]Smeyne RJ, Vendrell M, Hayward M, et al. Continuous c-fos expression precedes programmed cell death in vivo. Nature, 1993, 363∶166-169.
[7]Draganow M, Beilharx E, Sirimanne E, et al. Immediate-early gene protein expression in neurons undergoing delayed death, but not necrosis, following hypoxicichemic injury to the young rat brain. Brain Res Mol, 1994, 25∶19-33.
[8]Condorelli DF, Dellalbani P, Amieo C, et al. Glutamate receptor-driven activation of transcription factors in primary neuronal cultures. Neurochem Res, 1994, 19∶489-499.
(收稿:1997-05-26 修回:1998-03-19), 百拇医药
单位：王克万 杨志焕 王正国 朱佩芳 400042 重庆,第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所；包新民 舒斯云 陈长才 第一军医大学附属珠江医院神经医学中心
关键词：c-fos蛋白；神经元培养；谷氨酸；继发性脑损伤
中华创伤杂志980409 【摘要】 目的 观察培养的大鼠皮层神经元损伤后c-fos蛋白表达,探讨其在继发性脑损伤中的作用。方法 混合培养10～12天SD胎鼠的皮层神经元分别用谷氨酸和机械划痕损伤。采用SP法进行免疫组化双重标记反应。结果 谷氨酸作用后2小时,c-fos蛋白开始表达,4小时后在核中明显浓聚。创伤后2小时仅在创道边缘直接损伤部位有c-fos蛋白表达,远离创道未直接损伤区的神经元在创伤后4小时才出现;少数神经元突起远端有明显c-fos蛋白颗粒;损伤后6小时神经元突起开始崩解,但c-fos蛋白颗粒仍未消失。结论 谷氨酸损伤可引起培养的神经元c-fos蛋白的大量表达,损伤后培养皮层神经元和胶质细胞可以释放出神经毒性物质,培养神经元损伤后c-fos蛋白过度表达可能与凋亡有关。
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Expression of c-fos Protein After Cultured Cortical Neuron Injury in Rats WANG Ke-wan, YANG Zhi-huan, WANG Zheng-guo, et al. Research Institute of Surgery, Third Military Medical University, Chongqing 400042
【Abstract】 Aim To observe the expression of c-fos protein in cultured cortical neurons subject to either glutamate or mechanical injury in rats, and to study the effect of c-fos protein on brain injury. Methods Mixed cultured cortical neurons from SD rats were injured by either glutamate or mechanical force, then the expression of c-fos protein was studied with double-labeled immunohistochemistry. Results Two hours after glutamate injury, the expression of c-fos protein began in the nuclei and 4 hours later it reached peak, and c-fos protein only expressed in the direct injured area at the edge of traumatic tracts after 2 hours and began to express till 4 hours in the indirect injured area far from traumatic tracts. The positive immunoreaction of c-fos protein granule remained. Conclusion The c-fos protein expression can be induced by glutamate. Neurotoxic substances were produced in cultured medium after traumatic injury, and c-fos expression may be associated with neuron apoptosis.
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【Key words】 c-fos protein Culture neuron Glutamate Secondary brain injury
颅脑损伤和脑缺血等应激因素可诱使c-fos原癌基因在神经元中瞬间表达,为细胞代谢活动变化的标志。由于基因的表达产物c-fos蛋白可能参与细胞内信号转导,其在继发性脑损伤中的作用近年来引起人们的普遍关注。笔者利用体外培养神经元损伤模型和免疫组化双重标记技术,动态地观察c-fos蛋白在体外培养大鼠皮层神经元中损伤后的表达,并探讨其在继发性脑损伤中的作用。
材料与方法
一、混合培养胎鼠大脑皮层神经元方法
根据Banker等[1]的方法并加以改良如下:无菌分离15～18天胎龄SD胎鼠的大脑皮层,用0.125%的胰蛋白酶消化37℃、20分钟,用含血清的培养液终止消化,制备成细胞数为5×104/ml的细胞悬液,接种于直径为35mm的培养皿中预先放置的涂有多聚赖氨酸的盖玻片上。培养液为含有15%小牛血清的DMEM(Gibco公司),置于37℃、5%CO2的培养箱中培养,隔日换液,培养10～12天待细胞成熟后进行实验。
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二、损伤方法
1.谷氨酸导致的神经元损伤。根据文献[2]所述方法并稍加改良。培养10～12天的皮层神经细胞,用含1mmol/L谷氨酸(Victor公司)的培养液作用20分钟,然后去除含谷氨酸的培养液,用无谷氨酸的培养液洗涤后继续培养,分别于1,2,4,6小时用4℃、4%多聚甲醛固定30分钟。
2.损伤培养神经元方法。根据文献[3]的方法并稍加改良:用无菌注射针头机械性划破培养细胞的全层,在20mm×20mm玻片上纵横平行分别施行8条损伤径路,用DMEM洗涤后,加正常培养液继续培养,分别于1,2,4,6小时用上述方法固定。对照组不施加损伤因素,只用DMEM洗涤固定方法同上。
三、免疫组化双重标记方法
1.c-fos蛋白免疫组化染色。固定后的盖玻片用0.01mol/L PBS洗涤,然后加0.3%Triton X-100PBS作用15分钟,再用2%正常兔血清孵育20分钟,加兔抗c-fos蛋白抗体(1∶800),4℃过夜。采用链霉亲和素-生物素(SP)法进行免疫组化反应(c-fos抗体和SPKit均购自北京中山生物技术公司)。用一抗孵育的细胞洗涤后,分别经IgG/Biotin室温2小时,HRP/SP室温2小时,最后用GDN法[4]呈色,c-fos蛋白在细胞核内呈紫黑色的圆形颗粒。
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2.用NSE抗体标记神经元胞浆和突起。第一次呈色反应完毕后,用PBS冲洗玻片,2%正常兔血清封闭非特异性抗原,然后加兔抗NSE抗体(1∶2 000 Sino-American Biochemistry Co),4℃过夜。然后再分别和IgG/Biotin、HRP/SP反应,用AEC法(AEC Kit购自华美公司)或普通DAB呈色法呈色,神经元胞体和突起被染成红色(AEC法)或棕色(DAB法)。
结 果
一、谷氨酸导致的培养神经元c-fos蛋白表达
1.谷氨酸作用后2小时,细胞开始出现c-fos蛋白表达,c-fos蛋白在胞核中出现,但尚未浓聚,中间尚可见淡染的区域,表明c-fos蛋白正在由胞浆向胞核转运。另外还发现一独特现象,在少数神经元突起的远端也出现c-fos蛋白阳性反应颗粒。
2.谷氨酸作用后4小时,可见c-fos蛋白颗粒明显聚集,密度增高,表达量增加(图3)。3.谷氨酸作用后6小时,可见大量神经元突起开始出现崩解,但c-fos蛋白未见明显消失,有些神经元胞体大部分崩解后,c-fos蛋白颗粒却依然存在(图4)。未行双重标记的神经元,不能分辨胞体和突起。在对照组神经元中无明显c-fos蛋白表达。
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图3 谷氨酸作用后4小时,在突起中可见c-fos阳性反应颗粒。
c-fos-GDN法呈色、NSE-AEC法呈色双重标记 ×400
图4 谷氨酸作用后6小时,神经元开始崩解,c-fos蛋白颗粒尚未消失。
c-fos-GDN法呈色,NSE-DAB法呈色双重标记 ×400
二、创伤导致的培养神经元c-fos蛋白表达
1.创伤后2小时,创道周围的神经元有明显c-fos阳性表达,而远离创道未直接损伤的中心部位则无明显c-fos蛋白表达(图1)。
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图1 创伤后2小时,创道边缘直接损伤区神经元c-fos蛋白阳性反应。
c-fos-GDN法呈色、NSE-AEC法呈色双重标记 ×400
图2 创伤后4小时,远离创道处神经元开始出现c-fos阳性反应。
c-fos-GDN法呈色、NSE-AEC法呈色双重标记 ×200
2.创伤后4小时,在远离创道的中心部位,开始出现c-fos蛋白阳性反应(图2),说明在培养液中产生了使细胞表面受体激活的物质,使c-fos表达。
3.创伤后6小时,c-fos蛋白表达量增多,未受直接损伤区域的神经元胞体和突起也开始出现崩解,但c-fos蛋白颗粒并不消失。
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1.c-fos原癌基因属于即刻早期基因家族,当细胞受到外界刺激时,在瞬间产生表达,其表达产物c-fos蛋白立刻转位到细胞核中。c-fos蛋白半衰期短,只有2小时,具有信号系统的特征,可能参与胞浆到胞核的信息传递。因此,c-fos表达增加说明在特定的条件下,有关神经元的功能发生了变化。研究表明,谷氨酸的NMDA受体激活在多种刺激诱导的神经元c-fos基因表达中起重要作用[5]。在本研究中,笔者发现当谷氨酸作用后2小时,培养皮层神经元c-fos蛋白出现表达,4小时后在核中明显浓聚,与基因转录翻译的时间大致相符。表明谷氨酸可激活培养皮层神经元的兴奋性氨基酸受体,引起c-fos表达。
2.损伤混合培养皮层神经元和胶质细胞可释放出神经毒性物质。在创伤后2小时,只在创伤边缘直接损伤部位有c-fos蛋白表达,而远离创道未受直接损伤的部位,在创伤后4小时才开始出现c-fos蛋白表达。说明创伤后培养液中释放出可引起神经元受体激活的物质,使细胞的功能活动发生改变。已有大量研究证实,中枢神经系统损伤可导致细胞外液谷氨酸升高,谷氨酸的NMDA受体激活是c-fos表达的主要原因之一。因此,培养皮层神经元和胶质细胞损伤后可能释放出谷氨酸等毒性物质,引起未受损伤区域的神经元产生继发性损伤。进一步深入研究损伤后细胞释放的物质,将有助于对继发性脑损伤机制的了解。
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笔者利用c-fos为敏感的细胞代谢活动标志这一特点,更直观地证明了创伤后混合培养神经元可产生某些毒性物质,引起继发性神经元损伤。利用免疫组化双标技术,可以直接观察到神经元中c-fos蛋白从开始表达、在核中聚集至细胞变性崩解的过程。另外,笔者发现在少数神经元突起远端有明显的c-fos蛋白颗粒,对这种现象的产生及在信号传递中的作用尚未见报道,有待于进一步研究。
3.c-fos蛋白过度表达与细胞凋亡有关。c-fos原癌基因的表达和许多生理反应有关,在这些情况中,c-fos是一过性表达。但Smeyne等[6]用fos-lacZ转基因小鼠证明c-fos持续过度表达与细胞凋亡有关。c-fos过度表达似乎是细胞终末分化的标志及死亡先兆,且先于细胞出现生化和死亡形态学改变数小时至数天。Draganow等[7]在鼠缺血性脑损伤中也发现神经元即刻早期基因蛋白表达后细胞的延迟性死亡不是坏死,而是凋亡。
在本研究中,笔者发现谷氨酸和创伤可引起培养神经元c-fos蛋白大量表达,c-fos蛋白颗粒持续在核中聚集,有些神经元突起已崩解,c-fos蛋白仍然存在,与细胞凋亡的形态学改变相似,而与生理情况下c-fos蛋白在短期内消失(2小时左右)明显不同。这种现象与凋亡的关系有待进一步深入研究。
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近年研究发现,NMDA受体活化及一氧化氮(NO)过度释放也与神经元调亡有关。另有研究表明NMDA受体激活在短期内引起大量c-fos表达,NMDA受体拮抗剂MK-801几乎可以完全阻断c-fos表达[8]。因此,谷氨酸引起的神经元迟发性死亡可能与NMDA受体激活、c-fos过度表达、细胞凋亡有关。但其确切机制仍不清楚。由于c-fos基因蛋白产物在复杂的细胞信号转导过程中起着重要作用,故深入研究核内信使的表达和作用将有助于了解外界的短暂信息如何使细胞功能发生长时程改变,对揭示细胞生理功能、信号转导和病理机制有深远意义。
参考文献
[1]Banker GA, Cowan WN. Rat hippocampal neurons in dispersed cell culture. Brain Res, 1977, 126∶397-425.
[2]Shimohama, Ogawa N, Tamura Y, et al. Protective effect of nerve growth factor against glutamate-induced neurotoxicity in cultured cortical neurons. Brain Res, 1993, 632∶269-302.
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[3]Regan RF, Choi DW. The effect of NMDA, AMPA/kainate, and calcium channel antagonists on traumatic cortical neuronal injury in culture. Brain Res, 1994, 633∶236-242.
[4]Shu SY, JU G, Fan LZ. The glucose oxidase-DAB-Nickel method in peroxidase histochemistry of the nervous system. Neurosci Lett, 1988, 85∶169-171.
[5]Morgan JI, Cohrn DR, Hempstead JL, et al. Mapping patterns of c-fos expression in the central nervous system after seizure. Science, 1987, 237∶192-197.
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[6]Smeyne RJ, Vendrell M, Hayward M, et al. Continuous c-fos expression precedes programmed cell death in vivo. Nature, 1993, 363∶166-169.
[7]Draganow M, Beilharx E, Sirimanne E, et al. Immediate-early gene protein expression in neurons undergoing delayed death, but not necrosis, following hypoxicichemic injury to the young rat brain. Brain Res Mol, 1994, 25∶19-33.
[8]Condorelli DF, Dellalbani P, Amieo C, et al. Glutamate receptor-driven activation of transcription factors in primary neuronal cultures. Neurochem Res, 1994, 19∶489-499.
(收稿:1997-05-26 修回:1998-03-19), 百拇医药