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编号:10238540
丹参对兔Ⅱ度烧伤创面皮肤活力的影响
http://www.100md.com 《中国修复重建外科杂志》 1998年第4期
     作者:胡俊勇*# 任林森*

    单位:* 华西医科大学附属第一医院整形烧伤科(四川成都,610041)*# 现在第一军医大学附属珠江医院整形烧伤科

    关键词:丹参;烧伤;创面愈合

    中国修复重建外科杂志980404 摘 要 为研究丹参对Ⅱ度烧伤创面皮肤活力的影响,探讨其对创面愈合的作用,以20只日本大耳白兔制成Ⅱ度烧伤模型,分为丹参治疗组和对照组,对创面组织琥珀酸脱氢酶活性、过氧化脂质含量、含水量及组织形态学进行了动态观测。结果发现,治疗组琥珀酸脱氢酶活性高于对照组,在受伤8小时以后的各时间点两者均有显著差异(P<0.05);而创面过氧化脂质含量及含水量治疗组低于对照组,在伤后8,24及48小时两组均有显著差异;组织学观察治疗组创面愈合过程优于对照组。认为,丹参有助于保护烧伤创面残存的上皮细胞,提高愈合质量。

    EXPERIMENTAL STUDY OF THE EFFECT OF DANSHEN ON THE VIABILITY OF BURNED SKIN/Hu Junyong, Ren Linsen. Department of Burn and Plastic Surgery, the First University Hospital, West China University of Medical Sciences. Chengdu, Sichuan, P.R. China 610041
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    Abstract In order to investigate the influence of Danshen on the viability of skin from Ⅱ° burned and the effect of Danshen on the wound healing, 20 rabbits having a wound from second degree burn were divided into two groups randomly. The experimental group was treated with Danshen and the control was treated with normal saline. Then succinate dehydrogenase, SDH activity, malonyl dialdehyde, MDA concentration, water content and morphological change of wound tissue were observed dynamically. The results showed that the levels of SDH activity in the experimental group were significantly higher than that of the control group (WT5BX PP<0.05), the MDA concentration and water content of the former were lower than that of the latter (P<0.05) and the morphological examination showed that the wound healing process of former were better than that of the latter. The conclusion was Danshen had a beneficial effect on the viability of the burned skin and this effect was due to its protecting the residual epithelial cells of the burned skin.
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    Key words Danshen Burns Wound healing

    Ⅱ度烧伤创面的愈合是一个由多种细胞共同参与、相互作用的生物化学和细胞学的过程[1]。其中残存上皮细胞的数量及其活力将直接影响创面愈合的时间及质量。研究Ⅱ度烧伤皮肤活力的变化,探讨其保护措施,有利于指导临床烧伤治疗,提高治疗效果。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物及分组

    日本大耳白兔20只,体重2.5 kg~3 kg,雌雄不限。实验动物在静脉氯胺酮(25 mg/kg)麻醉下,背部脱毛区浸入70℃水中10秒,制成10%体表面积Ⅱ度烧伤(病理切片证实)。随机分为丹参治疗组及对照组。治疗组伤后立即从耳缘静脉给予丹参注射液2 ml/kg(含生药1.5 g/ml),以后每天给药两次,每次2 ml。对照组相应时刻给予生理盐水2 ml/kg。1.2 检测指标及方法1.2.1 方法
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    伤前及伤后4,8,24,48和72小时,以及5,10天各取创面全层皮肤标本作含水量、丙二醛(malonyl dialdehyde, MDA)含量及琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase, SDH)活性测定,同时作病理切片行组织学观察。

    1.2.2 组织含水量测定 采用干湿比法,标本取下立即称重(湿重)后,置于50℃烘箱中48小时再称重(干重)。

    1.2.3 创面MDA含量测定 参照文献[2]方法,标本称重后,加入Tris KCl液2 ml制作匀浆,将匀浆离心(3 000 r/min)10分钟,取上清液0.3 ml与0.05 mol/L HCl 3 ml混合,加入0.67% TBA液1 ml,沸水浴30分钟,流水冷却,用15%甲醇-正丁醇4 ml抽提。充分振荡后离心(2 000 r/min)10分钟,取抽提液于波长535 nm处比色,测其光密度值,以空白管调零,与标准液比较得出结果。
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    1.2.4 测定创面皮肤SDH活性 采用贾晓明等[3]改良法,皮肤标本修剪肉膜层及痂壳后称重,剪碎放入普通试管中,加入试剂液(0.1 g红四氮唑及1.2 g琥珀酸钠加入100 ml Kreb's Ringer磷酸缓冲液,调pH值至7.2)2 ml,注入石蜡油3 ml隔绝空气,置于37℃水浴中1小时,肉眼可见皮粒表面呈红色,倒出试液。加入乙二醇乙醚2 ml室温下抽提4小时,取抽提液于波长490 nm处比色,测光密度值。

    1.3 统计学方法

    各组数据均用±s表示,各均数间比较用t检验。

    2 结果

    2.1 创面组织形态学变化
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    治疗组 伤后早期见表皮坏死,真皮浅层见凝固性坏死,真皮全层肿胀,炎细胞浸润。伤后48小时痂壳形成,真皮肿胀减轻,痂壳下较少炎细胞浸润。伤后5天见毛囊上皮增生、扩展。伤后10天上皮增生活跃,新生表皮已连接成片,表皮层厚,染色深。真皮胶原纤维排列整齐。

    对照组 伤后早期表皮坏死,脱落。真皮显著肿胀,浅层可见坏死,大量炎细胞浸润,呈灶性集中在真皮浅层,真皮深层中散在。伤后48小时痂壳形成,痂壳下有大量白细胞浸润。伤后5天未见明显上皮增生。伤后10天见上皮增生、扩展,但未完全覆盖创面;新生表皮层厚薄不一,真皮胶原纤维排列较紊乱。见图1~7。

    2.2 创面组织含水量

    如表1所示,伤后皮肤含水量迅速升高,伤后4小时即达高峰,以后逐渐下降,至伤后72小时则与正常无显著差异。治疗组高峰时含水量低于对照组,两者有显著差异(PT <0.05)。
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    2.3 创面组织MDA含量

    如表2所示,创面组织MDA含量伤后4小时即见明显升高,伤后8小时达高峰,以后逐渐下降。治疗组MDA含量低于对照组,两者在8,24和48小时均有显著差异(P<0.05)。

    图1 日本大耳白兔正常皮肤结构(HE ×40) 图2 治疗组伤后4小时,表皮脱落,真皮肿胀,浅层可见凝固性坏死,较少炎细胞浸润(HE ×100) 图THZ 3 对照组伤后4小时,表皮脱落,真皮肿胀,大量炎细胞浸润(HE ×100)

    表1 伤后皮肤含水量(BX n=10,%,n=10,%,±s) 组别

    伤前
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    伤后4 h

    8 h

    24 h

    48 h

    72 h

    5 d

    10 d

    治疗组

    67.2±2.6

    82.5±2.3

    82.1±2.7

    76.2±3.4

    71.6±3.4
, 百拇医药
    66.3±3.2

    66.1±3.1

    66.9±3.2

    对照组

    67.2±2.6

    86.2±2.2

    85.9±3.9

    80.7±3.7

    72.1±3.4

    65.1±3.0

    65.7±2.9

    66.3±3.3
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    表2 创面组织MDA含量(X n=10n=10,nmol/mg,±s) 组别

    伤前

    伤后4 h

    8 h

    24 h

    48 h

    72 h

    5 d

    10 d

    治疗组

    0.047±0.009
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    0.090±0.015

    0.21±0.033

    0.14±0.021

    0.11±0.0120

    094±0.021

    0.084±0.016

    0.078±0.015

    对照组

    0.047±0.009

    0.095±0.014

    0.27±0.030

, http://www.100md.com     0.18±0.024

    0.14±0.0170

    100±0.017

    0.095±0.019

    0.080±0.0132

    4 创面皮肤SDH活性

    如表3所示,伤后皮肤SDH活性迅速下降,至伤后24小时达最低点,24小时~72小时变化不明显,以后逐渐回升。但伤后各时间点均与伤前有显著差异(P<0.01)。治疗组SDH活性高于对照组,8小时以后各时间点两者均有显著差异(P<0.05)。

    表3 创面皮肤SDH活性(X n=10,光密度值/g,n=10,光密度值/g, ±s)±s) 组别
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    伤前

    伤后4 h

    8 h

    24 h

    48 h

    72 h

    5 d

    10 d

    治疗组

    1.62±0.20

    0.63±0.12

    0.45±0.06

    0.38±0.06
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    0.40±0.06

    0.48±0.05

    1.02±0.18

    1.41±0.20

    对照组

    1.62±0.20

    0.59±0.08

    0.30±0.04

    0.22±0.03

    0.27±0.04

    0.32±0.06

    0.81±0.11
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    1.22±0.17

    图4 治疗组伤后48小时,痂壳下较少炎细胞浸润(HE ×200) 图5 对照组伤后48小时,痂壳较厚,其下有大量炎细胞浸润(HE ×200) 图6 治疗组伤后10天,新生表皮层厚,真皮胶原纤维排列整齐(HE ×100) 图7 对照组伤后10天,新生表皮厚薄不一,真皮胶原纤维排列较紊乱(HE ×100)

    3 讨论

    SDH位于细胞线粒体内,参与三羧酸循环,细胞损伤时,此酶活性下降明显。测定此酶的活性,能较好地反映细胞活力。在皮肤内,SDH存在于表皮基底细胞、毛囊外鞘及汗腺。Ⅱ度烧伤时,创面皮肤SDH活性反映了残存的毛囊及汗腺上皮细胞的数量及活力。实验结果显示,创面皮肤SDH活性在伤后迅速下降,至伤后4小时已降至伤前1/3左右。这期间SDH活性的下降主要是由高温直接损伤表皮基底细胞和部分毛囊、汗腺上皮细胞所致,两组比较无显著差异。4小时以后,SDH活性仍持续下降,至伤后24小时达最低,24小时~72小时SDH活性维持在最低水平,以后逐渐回升。结合组织学观察及创面组织过氧化脂质含量测定,此正是创面水肿、渗出及炎细胞浸润明显时期,也与创面组织MDA含量的升高在时间上相吻合,提示伤后皮肤SDH活性下降与创面早期的微循环障碍和氧自由基损伤有密切关系。
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    氧自由基损伤在烧伤创面损害中的作用已得到广泛重视。在创面的缺血再灌注过程中,由受损的内皮细胞、血小板,以及激活的中性粒细胞产生大量的氧自由基[4]。同时,烧伤组织清除氧自由基的能力降低,使局部氧自由基浓度过高,引起组织损伤。氧自由基对组织的损伤主要是引发生物膜中的脂质过氧化和蛋白变性。脂质过氧化的稳定产物为MDA,故多测定MDA含量以反映氧自由基损伤程度[5]。在烧伤创面,氧自由基一方面直接引起残存上皮细胞的变性坏死,另一方面引起血管内皮细胞损伤,加重微循环障碍,形成恶性循环,导致组织坏死,创面加深。采取适当的措施,改善创面微循环,减轻氧自由基损伤,将有助于减轻创面的继发损害,保护创面残存上皮细胞,促进创面愈合。

    丹参是临床常用中药之一,其药理成分为丹参酮类及酚酸类化合物,药理作用主要为改善微循环、保护缺血组织、抗菌及消炎等[6]。近年来,丹参已广泛应用于临床多个领域,但其对烧伤创面的作用还未见报道。从该实验结果证明,治疗组创面水肿、渗出及炎细胞浸润均较对照组轻,创面组织MDA含量高峰期显著低于对照组,提示丹参减轻了创面微循环障碍和氧自由基的损伤,对创面组织保护是有利的。创面皮肤SDH活性测定结果及组织学观察也证实了这一点。治疗组创面皮肤SDH活性在受伤8小时以后各时间点均显著高于对照组,创面再上皮化过程发生早,愈合质量优于对照组,新生表皮层厚,真皮胶原纤维结构正常,排列整齐。说明,丹参对促进烧伤创面愈合有一定意义。但在临床的具体运用还有待进一步探讨。
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    4 参考文献

    1 Orgill D, Deming RH. Modern concept and approach to wound healing. Crit Care Med, 1988;16(9):899

    2 Angel MF, Narayanan K, Swartz WM et al. The etiologic role of free radicals in hematoma-induced flap necrosis. Plast Reconstr Surg, 1986;77(5):795

    3 贾晓明,朱兆明.皮肤内琥珀酸脱氢酶活性测定方法的改进.中华整形烧伤外科杂志,1990;6(2):219

    4 Mccord JM. Oxygen-derived free radicals in postischemia tissue injury. New Eng J Med, 1985;312(3):159

    5 冯新生主编.病理生理学.第3版,北京:人民卫生出版社,1992:220~221

    6 徐任生主编.丹参生物学及其应用.北京:科学出版社,1990:2~3)

    (收稿:1997-04-29), 百拇医药