新疆地区多民族丙型肝炎病毒血清学分型与基因分型的探讨
作者：张希成 王云 谭欣成 刘志华
单位：830000 兰州军区乌鲁木齐总医院肝病中心
关键词：
中华传染病杂志980412表1 不同民族感染的HCV基因型 族 别
可分型数
基 因 型
Ⅰ、Ⅱ型(%)
Ⅲ、Ⅳ型(%)
Ⅰ、Ⅱ/Ⅲ、Ⅳ
混合型
汉族
, http://www.100md.com
40
33(82.5)
6(15.0)
1(2.5)
维吾尔族
40
21(52.5)
14(35.0)
5(12.5)
哈萨克族
14
12(85.7)
1(7.1)
, 百拇医药
1(7.1)
回族
8
4(50.0)
3(37.5)
1(12.5)
蒙古族
3
2(66.7)
1(33.3)
0
合计
105
, 百拇医药
72(68.6)
25(23.8)
8(7.6)
表2 HCV血清型与基因型的关系 血清型
例数
基 因 型
Ⅰ、Ⅱ型
Ⅲ、Ⅳ型
Ⅰ、Ⅱ/Ⅲ、Ⅳ混合型
1
38
35
, 百拇医药 1
2
2
18
7
10
1
1+2
18
10
5
3
合计
74
, 百拇医药
52
16
6
目前，根据丙型肝炎病毒(HCV)核苷酸序列的差异，将HCV分为四种不同的基因型(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)[1，2]。杜绍财等[3]根据中国HCV的感染情况，设计了一项简便酶切分型方法，证实中国以Ⅱ型为主，其次为Ⅲ型。1995年陈志等[4]根据Ⅰ、Ⅱ型和Ⅲ、Ⅳ型HCV核心区特异性核酸序列，选用HCV核心区两个型特异性合成多肽做为包被抗原，将血清中抗-HCV分为1、2型。Machida等[5]研究结果表明：血清1型为基因Ⅰ、Ⅱ型，血清2型为基因Ⅲ、Ⅳ型。我们用HCV血清抗体分型方法及HaeⅢ酶切基因分型方法对新疆地区不同民族HCV感染者进行分型对比研究，现将结果报告如下。材料和方法
一、血清标本来源
, 百拇医药
1996年4～8月从新疆乌鲁木齐、阿克苏、库尔勒、伊犁、阿尔泰和克拉玛依等地防疫站及门诊患者采集汉族、维吾尔族、哈萨克族、回族和蒙古族抗-HCV阳性血清共141例，男95例，女46例，年龄4～73岁。
二、主要试剂
抗-HCV的检测试剂盒，由上海科华生物工程公司提供，HCV RNA PCR试剂盒及HCV血清分型试剂盒由北京医科大学肝炎试剂中心提供。
三、方法
(一) HCV基因分型 血清标本经PT-PCR检测，有105份为HCV RNA阳性。取上述HCV RNA阳性产物10μl与Hae Ⅲ 37℃消化1小时，电泳后根据扩增产物能否被内切酶HaeⅢ切开，判断HCV基因型[6]。基因Ⅰ/Ⅱ型，无HaeⅢ酶切位点可见145bp处一条扩增带。Ⅲ，Ⅳ型被切成89和56bp两个片段。混合型可见145bp、89bp和56bp三条扩增带。
, http://www.100md.com
(二) HCV血清型分型 按说明书操作。
结 果
一、血清学分型结果
141例抗-HCV阳性血清标本血清学分型有100例阳性，可分型率为70.9%(100/141)，其中血清1型50%(50/100)，血清2型23%(23/100)，血清1、2混合型27%(27/100)。各民族间感染的HCV血清型间比较无统计学差别。
二、基因型分型结果
141型抗-HCV阳性标本中，HCV RNA阳性者105例。对其105例HCV RNA阳性进行HaeⅢ酶切基因分型，其中Ⅰ、Ⅱ型占68.6%(72/105)，Ⅲ、Ⅳ型占23.8%(25/105)，Ⅰ、Ⅱ/Ⅲ、Ⅳ混合型占7.6%(8/105)。不同民族HCV感染者基因分型结果见表1。
, 百拇医药
三、HCV血清型与基因型的关系
不同民族100例HCV血清分型阳性标本，有74例HCV RNA阳性，对其74例进行酶切分型，重点对两种分型方法的结果，加以比较研究，血清分型与基因分型结果见表2。
讨 论
近几年来，无论是HCV核心区抗体分型(血清型)，还是HCV基因分型，都引起学者们的广泛重视。北京、上海、广州、西安等地都先后对本地区HCV感染者的HCV基因型进行了研究，但对新疆地区不同民族HCV分型研究甚少，为此，我们对新疆地区不同民族141例HCV感染者血清标本进行分型，可分型率70.9%(100/141)汉、维、哈、回、蒙等新疆地区的五个主要民族均以血清1型为主，其次为1、2混合型，血清2型感染率较低。
根据HCV5′-端非编码区扩增片段有无限制性内切酶HaeⅢ切点，将HCVⅠ、Ⅱ型和Ⅲ、Ⅳ型分开[7]。对新疆不同民族105例HCV RNA阳性者进行酶切分型，Ⅰ、Ⅱ型占68.6%(72/105)，Ⅲ、Ⅳ型占23.8%(25/105)，Ⅰ、Ⅱ/Ⅲ、Ⅳ混合型7.6%(8/105)，从基因分型结果看，除维吾尔族Ⅲ、Ⅳ型所占比例偏高外(P<0.05)，其他民族之间基因型差别不大。由于HaeⅢ酶只能将Ⅰ、Ⅱ型与Ⅲ、Ⅳ型分开，所以对不同民族是否存在着Ⅰ、Ⅳ型或者其他混合型感染，尚待继续进一步研究。
, 百拇医药
74例HCV血清型与基因型比较，型别一致(包括完全一致和部分一致)率达89.2%。证明在没有基因分型的条件下，可以用血清分型方法来替代。
参考文献
1 Nakao T, Enomoto N, Takada N, et al. Typing of hepatitis C virus genomes byrestiriction fragment length polymorphism. J Gen virol,1991，72：2105-2112.
2 Okamoto H, Sugiyuma Y, Okada S, et al. Typing hepatitis C virus by polymerase chian reaction with typespecific primeres:application to clinical surveys and tracing infetious sources. J Gen virol，1992，73：673-679.
, http://www.100md.com
3 杜绍财，陶其敏，朱凌，等.丙型肝炎病毒基因5′-末端非编码区酶切分型研究.中华医学杂志，1993，73：7-9.
4 陈志，陶其敏，郭建平，等.丙型肝炎病毒核心区抗体分型方法的研究.中华实验和临床病毒学杂志，1995，9：206-208.
5 Machide A, Ohruma H, Tsuda F, et al. Two distinct subtypes of hepstitis C virus defined by antibodies directed to the putative core protein. Hepatol, 1992，16：886-891.
6 杜绍财，陶其敏.丙型肝炎及肝癌病人HCV基因分型研究.北京医科大学学报，1992，24：353.
7 杜绍财，孙炎.双PCR检测丙型肝炎病毒RNA.北京医科大学学报，1991，23：429-431.
(收稿：1997-05-28 修回：1998-06-01), 百拇医药
单位：830000 兰州军区乌鲁木齐总医院肝病中心
关键词：
中华传染病杂志980412表1 不同民族感染的HCV基因型 族 别
可分型数
基 因 型
Ⅰ、Ⅱ型(%)
Ⅲ、Ⅳ型(%)
Ⅰ、Ⅱ/Ⅲ、Ⅳ
混合型
汉族
, http://www.100md.com
40
33(82.5)
6(15.0)
1(2.5)
维吾尔族
40
21(52.5)
14(35.0)
5(12.5)
哈萨克族
14
12(85.7)
1(7.1)
, 百拇医药
1(7.1)
回族
8
4(50.0)
3(37.5)
1(12.5)
蒙古族
3
2(66.7)
1(33.3)
0
合计
105
, 百拇医药
72(68.6)
25(23.8)
8(7.6)
表2 HCV血清型与基因型的关系 血清型
例数
基 因 型
Ⅰ、Ⅱ型
Ⅲ、Ⅳ型
Ⅰ、Ⅱ/Ⅲ、Ⅳ混合型
1
38
35
, 百拇医药 1
2
2
18
7
10
1
1+2
18
10
5
3
合计
74
, 百拇医药
52
16
6
目前，根据丙型肝炎病毒(HCV)核苷酸序列的差异，将HCV分为四种不同的基因型(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)[1，2]。杜绍财等[3]根据中国HCV的感染情况，设计了一项简便酶切分型方法，证实中国以Ⅱ型为主，其次为Ⅲ型。1995年陈志等[4]根据Ⅰ、Ⅱ型和Ⅲ、Ⅳ型HCV核心区特异性核酸序列，选用HCV核心区两个型特异性合成多肽做为包被抗原，将血清中抗-HCV分为1、2型。Machida等[5]研究结果表明：血清1型为基因Ⅰ、Ⅱ型，血清2型为基因Ⅲ、Ⅳ型。我们用HCV血清抗体分型方法及HaeⅢ酶切基因分型方法对新疆地区不同民族HCV感染者进行分型对比研究，现将结果报告如下。材料和方法
一、血清标本来源
, 百拇医药
1996年4～8月从新疆乌鲁木齐、阿克苏、库尔勒、伊犁、阿尔泰和克拉玛依等地防疫站及门诊患者采集汉族、维吾尔族、哈萨克族、回族和蒙古族抗-HCV阳性血清共141例，男95例，女46例，年龄4～73岁。
二、主要试剂
抗-HCV的检测试剂盒，由上海科华生物工程公司提供，HCV RNA PCR试剂盒及HCV血清分型试剂盒由北京医科大学肝炎试剂中心提供。
三、方法
(一) HCV基因分型 血清标本经PT-PCR检测，有105份为HCV RNA阳性。取上述HCV RNA阳性产物10μl与Hae Ⅲ 37℃消化1小时，电泳后根据扩增产物能否被内切酶HaeⅢ切开，判断HCV基因型[6]。基因Ⅰ/Ⅱ型，无HaeⅢ酶切位点可见145bp处一条扩增带。Ⅲ，Ⅳ型被切成89和56bp两个片段。混合型可见145bp、89bp和56bp三条扩增带。
, http://www.100md.com
(二) HCV血清型分型 按说明书操作。
结 果
一、血清学分型结果
141例抗-HCV阳性血清标本血清学分型有100例阳性，可分型率为70.9%(100/141)，其中血清1型50%(50/100)，血清2型23%(23/100)，血清1、2混合型27%(27/100)。各民族间感染的HCV血清型间比较无统计学差别。
二、基因型分型结果
141型抗-HCV阳性标本中，HCV RNA阳性者105例。对其105例HCV RNA阳性进行HaeⅢ酶切基因分型，其中Ⅰ、Ⅱ型占68.6%(72/105)，Ⅲ、Ⅳ型占23.8%(25/105)，Ⅰ、Ⅱ/Ⅲ、Ⅳ混合型占7.6%(8/105)。不同民族HCV感染者基因分型结果见表1。
, 百拇医药
三、HCV血清型与基因型的关系
不同民族100例HCV血清分型阳性标本，有74例HCV RNA阳性，对其74例进行酶切分型，重点对两种分型方法的结果，加以比较研究，血清分型与基因分型结果见表2。
讨 论
近几年来，无论是HCV核心区抗体分型(血清型)，还是HCV基因分型，都引起学者们的广泛重视。北京、上海、广州、西安等地都先后对本地区HCV感染者的HCV基因型进行了研究，但对新疆地区不同民族HCV分型研究甚少，为此，我们对新疆地区不同民族141例HCV感染者血清标本进行分型，可分型率70.9%(100/141)汉、维、哈、回、蒙等新疆地区的五个主要民族均以血清1型为主，其次为1、2混合型，血清2型感染率较低。
根据HCV5′-端非编码区扩增片段有无限制性内切酶HaeⅢ切点，将HCVⅠ、Ⅱ型和Ⅲ、Ⅳ型分开[7]。对新疆不同民族105例HCV RNA阳性者进行酶切分型，Ⅰ、Ⅱ型占68.6%(72/105)，Ⅲ、Ⅳ型占23.8%(25/105)，Ⅰ、Ⅱ/Ⅲ、Ⅳ混合型7.6%(8/105)，从基因分型结果看，除维吾尔族Ⅲ、Ⅳ型所占比例偏高外(P<0.05)，其他民族之间基因型差别不大。由于HaeⅢ酶只能将Ⅰ、Ⅱ型与Ⅲ、Ⅳ型分开，所以对不同民族是否存在着Ⅰ、Ⅳ型或者其他混合型感染，尚待继续进一步研究。
, 百拇医药
74例HCV血清型与基因型比较，型别一致(包括完全一致和部分一致)率达89.2%。证明在没有基因分型的条件下，可以用血清分型方法来替代。
参考文献
1 Nakao T, Enomoto N, Takada N, et al. Typing of hepatitis C virus genomes byrestiriction fragment length polymorphism. J Gen virol,1991，72：2105-2112.
2 Okamoto H, Sugiyuma Y, Okada S, et al. Typing hepatitis C virus by polymerase chian reaction with typespecific primeres:application to clinical surveys and tracing infetious sources. J Gen virol，1992，73：673-679.
, http://www.100md.com
3 杜绍财，陶其敏，朱凌，等.丙型肝炎病毒基因5′-末端非编码区酶切分型研究.中华医学杂志，1993，73：7-9.
4 陈志，陶其敏，郭建平，等.丙型肝炎病毒核心区抗体分型方法的研究.中华实验和临床病毒学杂志，1995，9：206-208.
5 Machide A, Ohruma H, Tsuda F, et al. Two distinct subtypes of hepstitis C virus defined by antibodies directed to the putative core protein. Hepatol, 1992，16：886-891.
6 杜绍财，陶其敏.丙型肝炎及肝癌病人HCV基因分型研究.北京医科大学学报，1992，24：353.
7 杜绍财，孙炎.双PCR检测丙型肝炎病毒RNA.北京医科大学学报，1991，23：429-431.
(收稿：1997-05-28 修回：1998-06-01), 百拇医药