日本血吸虫感染后血清Ⅵ型胶原水平的动态观察
作者：陈澍 翁心华 陆云 吴鸣鹤 施光峰
单位：200040 上海医科大学华山医院
关键词：Ⅵ型胶原；肝硬化；血吸虫病，日本
中华传染病杂志980411 【摘要】 目的 了解血清Ⅵ型胶原在评估日本血吸虫病肝纤维化的程度及疗效中的作用。方法 对感染日本血吸虫的小鼠和59例经秋水仙碱或安慰剂治疗的晚期血吸虫病患者血清Ⅵ型胶原水平进行动态观察，同时对小鼠肝脏病理改变及患者肝脏B超和各临床指标作了观测。结果 小鼠血清Ⅵ型胶原水平在感染后进行性升高，并与肝脏病理变化基本一致；患者血清Ⅵ型胶原较正常人也有明显升高(P<0.01)，但治疗组在治疗结束后有所下降，而对照组则显著升高，差异有显著性(P<0.01)。结论 血清Ⅵ型胶原可能是监测血吸虫病肝纤维化进展及药物疗效的敏感指标。
Monitoring of the serum collagen type Ⅵ in hepatic fibrosis of Schistosomiasis Japanicum Chen Shu, Weng Xinhua, Lu Yun, et al. Department of infectious diseases, Huashan Hospital, Shanghai Medical University, Shanghai 200040
, http://www.100md.com
【Abstract】 Objective In order to investigate the value of the surem collagen type Ⅵ in indicating hepatic fibrosis of Schistosomiasis japonic and effects of anti-fibrosis theraphy. Methods The levels of serum collagen type Ⅵ were mornitored in murine Schistosomiasis japonica and 59 Schistosomiasis patients treated with colchicine or placebo respectively, pathological changes of mice liver were detected as well as liver B-ultrosonic testing and other liver function tests were performed too.Results The levels of serum collagen type Ⅵ increased progressively in infected mice and consisted with pathological changes; colagen type Ⅵ levels in patients were higher than normal level too (P<0.01). But after treatment collagen levels in treated group decreased slightly whereas increased obviously in control group, the difference were significantly (P<0.01).Conclusion Serum collagen type Ⅵ maybe a sensitive marker for indicating hepatic fibrosis of Schistosomiasis japonica and for the assessment of the effects of anti-fibrosis agents.
, 百拇医药
【Key words】 Collagen type Ⅵ Liver cirrhosis Schitosomiasis japonica
日本血吸虫病肝纤维化程度的进展及药物疗效的评估，迄今仍无有效的方法。近年来对胶原等血清肝纤维化标志物的研究十分引人注目，并取得了一定的成绩。其中PⅢP、C-Ⅳ等胶原指标已在临床上广泛运用。但对血清C-Ⅵ的研究起步较晚，对它在疾病过程中的变化及临床意义所知甚少。我们分别对小鼠及晚血患者血清C-Ⅵ进行了动态观察，旨在明确血清C-Ⅵ在血吸虫病肝纤维化诊断及治疗监测中的价值。
材料与方法
一、实验动物
将雄性昆明种小鼠以日本血吸虫尾蚴40±5条经皮感染，并分批于感染后第3、5、7、9、12周处死，留取血清及肝脏标本待测。
, 百拇医药 二、临床资料
正常供血者20例，血清由华山医院血库提供；晚血患者59例，均来自血吸虫病流行区江西省玉山县，其中男37例，女22例，平均年龄51岁。所有患者除临床症状外粪便沉淀Kato's改良虫卵计数和血清抗虫卵抗体检查至少有一条阳性。全部患者四年内均未接受吡喹酮、秋水仙碱或其他药物治疗。所有患者肝功能均在正常范围且HBVM、HCV-IgG检测为阴性。
59例患者随机分为两组采用双盲法给予不同治疗：1. 治疗组35例予秋水仙碱(法国罗素公司产品)治疗，方案如下：每日口服1mg，每周服药6天，总疗程7个月；2. 对照组24例以一般保肝药肝泰乐作为安慰剂治疗，具体治疗方案及疗程同治疗组。所有患者治疗前后均行血清C-Ⅵ、HBVM、HCV-IgG、各肝功能指标及肝脏B超检查，同时随访了解患者胃纳、体力等临床表现的改变。
三、血清C-Ⅵ的测定
, 百拇医药
(一)、主要试剂的来源 标准C-Ⅵ的抗原和抗体由德国Schuppan教授惠赠，Iodogine试剂由华山医院核医学科提供；
(二)、C-Ⅵ放免药盒的制备 首先用Iodogine法将125I碘化标准C-Ⅵ抗原，并将其稀释至10 000cpm/100μl；然后制备各标准浓度抗原(20～640ng/ml)；最后经配比选定1∶2 000为抗体的实际工作浓度。
(三)、样本的检测 以竞争性放免法分别测定感染后各期小鼠血清以及正常人和治疗前后晚血患者血清C-Ⅵ水平。
四、统计分析
对小鼠血清感染后各期血清C-Ⅵ水平作多样本均数Bartlett's检验；对患者与正常人及治疗组、对照组治疗前后C-Ⅵ的差值作显著性t检验；对治疗组与对照组治疗前后的B超变化行卡方检验。
, 百拇医药
结 果
一、小鼠血清C-Ⅵ及肝脏病理变化
小鼠感染后第3、5、7、9、12周血清C-Ⅵ平均值分别为120、188、220、250、220ng/ml，随时间呈进行性升高，第9周为其峰值，第12周则略有下降，但仍维持在较高水平。经多样本均数Bartlett's检验各期差异有极显著的意义(P<0.01)。同时小鼠肝脏中虫卵肉芽肿形成及纤维增生亦在第9周达到最高峰，第12周与第9周则无明显区别。
二、晚血患者血清C-Ⅵ水平的变化
59例晚血患者(未经治疗)血清C-Ⅵ平均为157±53ng/ml而20例正常人C-Ⅵ则为107±12ng/ml，经t检验两者差异有显著性(P<0.01)。治疗组35例晚血患者经过7个月秋水仙碱治疗血清C-Ⅵ均值下降了7.4ng/ml，同期对照组则上升了约25.4ng/ml，两者差异有极显著性(P<0.01)。
, 百拇医药
三、治疗前后的临床表现与B超改变
所有患者均按计划完成治疗，两组均无患者死亡。治疗组除两例外，胃纳、所能耐受的劳动强度均有不同程度的提高，且无食道静脉破裂出血等并发症出现。对照组21例临床表现均无明显变化，并有一例发生食道静脉破裂出血。
治疗组35例中有17例B超表现有所改善而对照组仅有一例B超表现好转。经卡方检验两者差异有极显著性(χ2=14.42,P<0.001)。
讨 论
目前已发现肝脏中存在Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ5型胶原，纤维化过程中各型胶原增生活跃，血清中各胶原指标也有相应的变化[1]。近年来对血清胶原标志物如PⅢP、C-Ⅳ等的研究已广泛开展并为大多数学者所认可。
但是由于Ⅵ型胶原的含量相对较小故长期以来一直被认为是细胞外间质(Extracelluar Matrix,ECM)的次要成分而研究得较少。然而最近的研究发现C-Ⅵ在肝脏中起着锚合细胞与细胞、基质与基质、细胞与基质的重要作用[2]。在肝纤维化时肝脏C-Ⅵ含量显著升高，可达正常10倍以上。Takahara等[3]对C-mRNA的检测也发现不论是急性还是慢性肝纤维化Ⅵ型胶原α1、α2链的mRNA表达早期即有显著增加。反映了C-Ⅵ在肝纤维化中的重要作用。对慢性肝病C-Ⅵ血清学研究报道较少，其水平可能与肝脏病变的活动性、纤维化的状况相关，而与其他胶原指标无相关性[4]。我们观察的结果显示小鼠感染尾蚴后血清C -Ⅵ水平呈进行性升高并于第9周达到峰值，这与小鼠肝脏病理改变的程度相符，提示血清C-Ⅵ可能较好地反映了日本血吸虫病肝脏病变进展的情况。对晚血患者的检测也发现其血清C-Ⅵ水平较正常人显著升高，此外在对24例未经特殊治疗的晚血患者血清C-Ⅵ水平动态观察中发现随着时间的推移，C-Ⅵ有升高的趋势，提示血清C-Ⅵ可能是晚期血吸虫肝纤维化进展程度可行的监测指标。
, http://www.100md.com
进一步对晚血患者血清C-Ⅵ在药物治疗过程中变化的观察发现，秋水仙碱治疗组35例患者血清C-Ⅵ水平在疗程结束时平均下降了7.4ng/ml，而安慰剂对照组的24例患者则平均上升了约25ng/ml，两者差异有显著性。秋水仙碱是一种抑制细胞有丝分裂的生物碱，作为一种抗纤维化药物，它在临床上的应用，尤其是对血吸虫病肝纤维化晚期患者的治疗已取得肯定的效果。它不但可以改善临床症状、减少并发症，甚至可以逆转肝脏纤维化的程度[5～7]。从我们的结果可见经秋水仙碱治疗的患者其临床表现、B超图像均有明显好转，而对照组则无明显改变，血清C-Ⅵ的变化符合上述改变，与秋水仙碱的药理作用相一致，提示血清C-Ⅵ可能是晚期血吸虫肝纤维化药物疗效较好的监测指标。
总之，血清C-Ⅵ可能是对晚血肝纤维化进展程度及药物疗效监测的较敏感的指标。但是由于C-Ⅵ广泛地存在于人体的结缔组织中，因此如类风关、硬皮病、神经纤维瘤等多种疾病都会影响它的含量，所以对血清C-Ⅵ特异性仍需进一步研究。
, http://www.100md.com
参考文献
1 Schuppan D. Connective tissue polypeptids in serum as paramenters to monitor antifibrotic treatment in hepatic fibrogenesis. Hepotolgy,1991,13(supple-3)：s17-s25.
2 Pfaff M, Aumailley M, Sepecks U, et al. Integrin and Arg-Gly-Asp dependence of cell adhesion to native and unfolded triple helix of collagen type Ⅵ. Euper Cell Res,1993,206：167-176.
3 Takahara T, Sollberg S, Muona P, et al. Type Ⅵ collagen gene expression in experimental liver fibrosis:quantitation and spatial distribution of mRNA andimmunodetection of the protein. Liver, 1995，15：78-86.
, 百拇医药
4 Shahin M, Schuppan D, Waldherr R, et al. Serum procollagen peptides and collagen type Ⅵ for the assessment of activity and degree of hepatic fibrosis in Schistosomiasis and alcoholic liver disease. Hepatology,1992，15：637-644.
5 施光峰，徐肇玥，傅奇，等.血吸虫感染鼠血清SEAIC水平与肝脏病变关系的动态观察.中国寄生虫与寄生虫病杂志，1994，12：205-209.
6 江家婉，魏承慈，徐肇玥，等.秋水仙碱治疗家兔血吸虫病肝纤维化超微结构研究.中国寄生虫与寄生虫病杂志，1990，8：84-86.
7 魏承慈，徐肇玥，宋礼庆.秋水仙碱治疗晚期血吸虫病30例临床和病理变化.上海医学，1991，14：457-460.
(收稿：1996-10-10 修回：1997-04-08), http://www.100md.com
单位：200040 上海医科大学华山医院
关键词：Ⅵ型胶原；肝硬化；血吸虫病，日本
中华传染病杂志980411 【摘要】 目的 了解血清Ⅵ型胶原在评估日本血吸虫病肝纤维化的程度及疗效中的作用。方法 对感染日本血吸虫的小鼠和59例经秋水仙碱或安慰剂治疗的晚期血吸虫病患者血清Ⅵ型胶原水平进行动态观察，同时对小鼠肝脏病理改变及患者肝脏B超和各临床指标作了观测。结果 小鼠血清Ⅵ型胶原水平在感染后进行性升高，并与肝脏病理变化基本一致；患者血清Ⅵ型胶原较正常人也有明显升高(P<0.01)，但治疗组在治疗结束后有所下降，而对照组则显著升高，差异有显著性(P<0.01)。结论 血清Ⅵ型胶原可能是监测血吸虫病肝纤维化进展及药物疗效的敏感指标。
Monitoring of the serum collagen type Ⅵ in hepatic fibrosis of Schistosomiasis Japanicum Chen Shu, Weng Xinhua, Lu Yun, et al. Department of infectious diseases, Huashan Hospital, Shanghai Medical University, Shanghai 200040
, http://www.100md.com
【Abstract】 Objective In order to investigate the value of the surem collagen type Ⅵ in indicating hepatic fibrosis of Schistosomiasis japonic and effects of anti-fibrosis theraphy. Methods The levels of serum collagen type Ⅵ were mornitored in murine Schistosomiasis japonica and 59 Schistosomiasis patients treated with colchicine or placebo respectively, pathological changes of mice liver were detected as well as liver B-ultrosonic testing and other liver function tests were performed too.Results The levels of serum collagen type Ⅵ increased progressively in infected mice and consisted with pathological changes; colagen type Ⅵ levels in patients were higher than normal level too (P<0.01). But after treatment collagen levels in treated group decreased slightly whereas increased obviously in control group, the difference were significantly (P<0.01).Conclusion Serum collagen type Ⅵ maybe a sensitive marker for indicating hepatic fibrosis of Schistosomiasis japonica and for the assessment of the effects of anti-fibrosis agents.
, 百拇医药
【Key words】 Collagen type Ⅵ Liver cirrhosis Schitosomiasis japonica
日本血吸虫病肝纤维化程度的进展及药物疗效的评估，迄今仍无有效的方法。近年来对胶原等血清肝纤维化标志物的研究十分引人注目，并取得了一定的成绩。其中PⅢP、C-Ⅳ等胶原指标已在临床上广泛运用。但对血清C-Ⅵ的研究起步较晚，对它在疾病过程中的变化及临床意义所知甚少。我们分别对小鼠及晚血患者血清C-Ⅵ进行了动态观察，旨在明确血清C-Ⅵ在血吸虫病肝纤维化诊断及治疗监测中的价值。
材料与方法
一、实验动物
将雄性昆明种小鼠以日本血吸虫尾蚴40±5条经皮感染，并分批于感染后第3、5、7、9、12周处死，留取血清及肝脏标本待测。
, 百拇医药 二、临床资料
正常供血者20例，血清由华山医院血库提供；晚血患者59例，均来自血吸虫病流行区江西省玉山县，其中男37例，女22例，平均年龄51岁。所有患者除临床症状外粪便沉淀Kato's改良虫卵计数和血清抗虫卵抗体检查至少有一条阳性。全部患者四年内均未接受吡喹酮、秋水仙碱或其他药物治疗。所有患者肝功能均在正常范围且HBVM、HCV-IgG检测为阴性。
59例患者随机分为两组采用双盲法给予不同治疗：1. 治疗组35例予秋水仙碱(法国罗素公司产品)治疗，方案如下：每日口服1mg，每周服药6天，总疗程7个月；2. 对照组24例以一般保肝药肝泰乐作为安慰剂治疗，具体治疗方案及疗程同治疗组。所有患者治疗前后均行血清C-Ⅵ、HBVM、HCV-IgG、各肝功能指标及肝脏B超检查，同时随访了解患者胃纳、体力等临床表现的改变。
三、血清C-Ⅵ的测定
, 百拇医药
(一)、主要试剂的来源 标准C-Ⅵ的抗原和抗体由德国Schuppan教授惠赠，Iodogine试剂由华山医院核医学科提供；
(二)、C-Ⅵ放免药盒的制备 首先用Iodogine法将125I碘化标准C-Ⅵ抗原，并将其稀释至10 000cpm/100μl；然后制备各标准浓度抗原(20～640ng/ml)；最后经配比选定1∶2 000为抗体的实际工作浓度。
(三)、样本的检测 以竞争性放免法分别测定感染后各期小鼠血清以及正常人和治疗前后晚血患者血清C-Ⅵ水平。
四、统计分析
对小鼠血清感染后各期血清C-Ⅵ水平作多样本均数Bartlett's检验；对患者与正常人及治疗组、对照组治疗前后C-Ⅵ的差值作显著性t检验；对治疗组与对照组治疗前后的B超变化行卡方检验。
, 百拇医药
结 果
一、小鼠血清C-Ⅵ及肝脏病理变化
小鼠感染后第3、5、7、9、12周血清C-Ⅵ平均值分别为120、188、220、250、220ng/ml，随时间呈进行性升高，第9周为其峰值，第12周则略有下降，但仍维持在较高水平。经多样本均数Bartlett's检验各期差异有极显著的意义(P<0.01)。同时小鼠肝脏中虫卵肉芽肿形成及纤维增生亦在第9周达到最高峰，第12周与第9周则无明显区别。
二、晚血患者血清C-Ⅵ水平的变化
59例晚血患者(未经治疗)血清C-Ⅵ平均为157±53ng/ml而20例正常人C-Ⅵ则为107±12ng/ml，经t检验两者差异有显著性(P<0.01)。治疗组35例晚血患者经过7个月秋水仙碱治疗血清C-Ⅵ均值下降了7.4ng/ml，同期对照组则上升了约25.4ng/ml，两者差异有极显著性(P<0.01)。
, 百拇医药
三、治疗前后的临床表现与B超改变
所有患者均按计划完成治疗，两组均无患者死亡。治疗组除两例外，胃纳、所能耐受的劳动强度均有不同程度的提高，且无食道静脉破裂出血等并发症出现。对照组21例临床表现均无明显变化，并有一例发生食道静脉破裂出血。
治疗组35例中有17例B超表现有所改善而对照组仅有一例B超表现好转。经卡方检验两者差异有极显著性(χ2=14.42,P<0.001)。
讨 论
目前已发现肝脏中存在Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ5型胶原，纤维化过程中各型胶原增生活跃，血清中各胶原指标也有相应的变化[1]。近年来对血清胶原标志物如PⅢP、C-Ⅳ等的研究已广泛开展并为大多数学者所认可。
但是由于Ⅵ型胶原的含量相对较小故长期以来一直被认为是细胞外间质(Extracelluar Matrix,ECM)的次要成分而研究得较少。然而最近的研究发现C-Ⅵ在肝脏中起着锚合细胞与细胞、基质与基质、细胞与基质的重要作用[2]。在肝纤维化时肝脏C-Ⅵ含量显著升高，可达正常10倍以上。Takahara等[3]对C-mRNA的检测也发现不论是急性还是慢性肝纤维化Ⅵ型胶原α1、α2链的mRNA表达早期即有显著增加。反映了C-Ⅵ在肝纤维化中的重要作用。对慢性肝病C-Ⅵ血清学研究报道较少，其水平可能与肝脏病变的活动性、纤维化的状况相关，而与其他胶原指标无相关性[4]。我们观察的结果显示小鼠感染尾蚴后血清C -Ⅵ水平呈进行性升高并于第9周达到峰值，这与小鼠肝脏病理改变的程度相符，提示血清C-Ⅵ可能较好地反映了日本血吸虫病肝脏病变进展的情况。对晚血患者的检测也发现其血清C-Ⅵ水平较正常人显著升高，此外在对24例未经特殊治疗的晚血患者血清C-Ⅵ水平动态观察中发现随着时间的推移，C-Ⅵ有升高的趋势，提示血清C-Ⅵ可能是晚期血吸虫肝纤维化进展程度可行的监测指标。
, http://www.100md.com
进一步对晚血患者血清C-Ⅵ在药物治疗过程中变化的观察发现，秋水仙碱治疗组35例患者血清C-Ⅵ水平在疗程结束时平均下降了7.4ng/ml，而安慰剂对照组的24例患者则平均上升了约25ng/ml，两者差异有显著性。秋水仙碱是一种抑制细胞有丝分裂的生物碱，作为一种抗纤维化药物，它在临床上的应用，尤其是对血吸虫病肝纤维化晚期患者的治疗已取得肯定的效果。它不但可以改善临床症状、减少并发症，甚至可以逆转肝脏纤维化的程度[5～7]。从我们的结果可见经秋水仙碱治疗的患者其临床表现、B超图像均有明显好转，而对照组则无明显改变，血清C-Ⅵ的变化符合上述改变，与秋水仙碱的药理作用相一致，提示血清C-Ⅵ可能是晚期血吸虫肝纤维化药物疗效较好的监测指标。
总之，血清C-Ⅵ可能是对晚血肝纤维化进展程度及药物疗效监测的较敏感的指标。但是由于C-Ⅵ广泛地存在于人体的结缔组织中，因此如类风关、硬皮病、神经纤维瘤等多种疾病都会影响它的含量，所以对血清C-Ⅵ特异性仍需进一步研究。
, http://www.100md.com
参考文献
1 Schuppan D. Connective tissue polypeptids in serum as paramenters to monitor antifibrotic treatment in hepatic fibrogenesis. Hepotolgy,1991,13(supple-3)：s17-s25.
2 Pfaff M, Aumailley M, Sepecks U, et al. Integrin and Arg-Gly-Asp dependence of cell adhesion to native and unfolded triple helix of collagen type Ⅵ. Euper Cell Res,1993,206：167-176.
3 Takahara T, Sollberg S, Muona P, et al. Type Ⅵ collagen gene expression in experimental liver fibrosis:quantitation and spatial distribution of mRNA andimmunodetection of the protein. Liver, 1995，15：78-86.
, 百拇医药
4 Shahin M, Schuppan D, Waldherr R, et al. Serum procollagen peptides and collagen type Ⅵ for the assessment of activity and degree of hepatic fibrosis in Schistosomiasis and alcoholic liver disease. Hepatology,1992，15：637-644.
5 施光峰，徐肇玥，傅奇，等.血吸虫感染鼠血清SEAIC水平与肝脏病变关系的动态观察.中国寄生虫与寄生虫病杂志，1994，12：205-209.
6 江家婉，魏承慈，徐肇玥，等.秋水仙碱治疗家兔血吸虫病肝纤维化超微结构研究.中国寄生虫与寄生虫病杂志，1990，8：84-86.
7 魏承慈，徐肇玥，宋礼庆.秋水仙碱治疗晚期血吸虫病30例临床和病理变化.上海医学，1991，14：457-460.
(收稿：1996-10-10 修回：1997-04-08), http://www.100md.com