大黄在体内抗单纯疱疹病毒作用的实验研究
作者：罗军 刘振安 肖红 杨占秋 文利 刘建军
单位：510010 广州，广州军区总医院预防保健科(罗军、刘振安)；湖北医科大学病毒研究所(肖红、杨占秋、文利、刘建军)
关键词：
中华传染病杂志980419
大黄在细胞内对单纯疱疹病毒(HSV)的繁殖有抑制作用[1]。为了证明该药在体内的作用，我们进一步观察了对HSV感染小白鼠的治疗结果，现报告如下。
材料与方法
一、病毒、细胞与药物
(一)病毒 HSV-1 7株，HSV-2 333株，均为标准株，由美国Hersegy医学中心微生物学科Rapp教授惠赠。
, http://www.100md.com
(二)细胞 Hep-2细胞由湖北医科大学病毒研究所提供。培养用199培养基+10%小牛血清，常规加入青、链霉素。
(三)药物 药物含量为100ml含原植物100g(即生药含量100%)，详见参考文献[1]。
二、动物
(一)来源 小白鼠为昆明种，体重15±1.6g，购于中国科学院武汉病毒所实验动物中心。
(二)致病模型的建立 病毒滴度为100LD50/0.1毫升，右侧脑内注射，0.02毫升/只。20只鼠分为HSV-1感染组和HSV-2感染组。小白鼠感染病毒后第4天发病，表现为消瘦，体重下降，耸毛，倦缩，肢体麻痹，痉挛和衰竭。发病2～3天内死亡。HSV-2感染鼠发病时间较HSV-1感染鼠晚1～2天，但发病特征一致。HSV-1和HSV-2感染鼠的平均存活时间各为6.1±0.6天和6.6±0.8天。感染后第8天，两组动物均发病死亡，正常对照动物均存活。在感染鼠的血液、脑、心、肝、神经节内均可检出病毒和病毒抗原，感染组织出现线粒体变性、感染细胞空泡化等病理改变。
, 百拇医药
(三)抗病毒治疗 采用L9(3)4 正交设计方案，即按3.3、6.7、11.3、18.7g*kg-1*d-1(分别为药物对小鼠LD50的1/12、1/10、1/8、1/6)皮下给药，在病毒感染后24小时进行治疗，分别治疗5、7、9天，计算各组鼠存活率，对结果进行方差分析，选出较适治疗剂量为3.3、6.7、11.3g*kg-1*d-1，疗程7天。另设阿昔洛韦和0.9%氯化钠对照组及不用药物的对照组(含病毒对照和正常对照)。各组动物均为26只，但HSV-2对照为21只，正常对照为15只。所有动物观察40天。
(四)标本收集与处理 各组动物在治疗后定期收集血液与组织，进行病毒分离与滴定。
结 果
一、大黄抗病毒作用的疗效观察
, http://www.100md.com
HSV感染鼠经大黄、阿昔洛韦和氯化钠治疗后，动物有3种结局：一是发病死亡，症状和体征与未经药物治疗的病毒对照组鼠同，如前动物致病模型的建立所述；二是动物发病后2～3天内或更长一点时间又恢复正常，且发病症状较轻，但部分动物发育较慢，体重较正常动物轻；另一是动物不出现任何发病症状，发育和生长正常。
从存活率和平均存活时间看，各组动物间显示出明显差异。从表1可知，6.7g*kg-1*d-1治疗鼠的存活率和平均存活时间显著高于3.3、11.3g*kg-1*d-1治疗鼠，P<0.05，与氯化钠治疗鼠比较，P<0.001，与阿昔洛韦比较，P<0.05。
表1 大黄治疗的HSV感染鼠存活率和存活时间的比较 组 别
存活率(%)
平均存活时间(d,
)
, 百拇医药
HSV-1
HSV-2
HSV-1
HSV-2
大黄治疗组(g*kg-1*d-1)
3.3
0.0
0.0
6.3±0.7
6.8±0.6
6.7
61.5
, http://www.100md.com
69.2
29.4±2.1
28.6±2.7
11.3
38.5
46.2
22.8±2.7
20.5±2.1
阿昔洛韦(0.1g*kg-1*d-1)
23.1
30.8
19.0±1.5
, http://www.100md.com
28.6±2.1
0.9%NaCl
0.0
11.5
5.6±0.5
6.3±0.7
病毒对照
0.0
0.0
4.8±0.3
6.0±0.4
正常对照
100
, http://www.100md.com
40.0±0.0
表2 大黄对HSV感染鼠体内病毒滴度的影响 (pFu/ml,) 组 别
组织中病毒滴度
血液中病毒滴度
脑
心
肝
神经节
HSV-1组
剂量(g*kg-1*d-1)
, 百拇医药
3.3
5.7±0.2
5.6±0.2
5.6±0.1
5.9±0.2
6.1±0.2
6.7
1.6±0.7
1.8±0.7
1.9±0.7
2.1±0.2
2.1±0.3
, http://www.100md.com
11.3
3.5±0.4
3.2±0.2
3.0±0.2
3.4±0.2
3.7±0.1
HSV-2组
剂量(g*kg-1*d-1)
3.3
6.0±0.2
5.6±0.2
5.9±0.3
, http://www.100md.com
5.9±0.3
6.0±0.2
6.7
1.7±0.4
1.8±0.5
1.4±0.4
1.9±0.2
2.0±0.2
11.3
3.2±0.4
3.6±0.2
3.0±0.2
, 百拇医药
3.2±0.2
3.4±0.2
二、大黄对HSV感染鼠体内病毒的清除作用
从表2可以看出，大黄能加快HSV感染鼠脑、心、肝、神经节和血液内病毒的清除，且显示出量效关系，6.7g*kg-1*d-1组鼠下降较快，与3.3g*kg-1*d-1组比较，P<0.001，与11.3g*kg-1*d-1组比较，P<0.05。对不同组织中病毒的检测发现，神经节中病毒滴度下降较慢，肝脏病毒滴度下降较快。
三、大黄抗HSV作用与其他药物的比较
研究发现0.1g*kg-1*d-1阿昔洛韦治疗的HSV-1和HSV-2感染鼠体内病毒平均滴度为3.1±0.4和2.9±0.3pFu/ml，类似于11.3g*kg-1*d-1大黄治疗鼠的3.5±0.7和3.8±1.1pFu/ml，而0.03g*kg-1*d-1阿昔洛韦治疗的HSV感染鼠体内病毒平均滴度(5.2±0.2和5.5±0.3pFu/ml)高于6.7g*kg-1*d-1大黄治疗组(1.8±0.7和1.4±0.4pFu/ml)。在0.9%氯化钠治疗组鼠体内病毒滴度类似于病毒对照组，均在5.7±0.5pFu/ml以上。讨论
, 百拇医药
阿昔洛韦是治疗HSV感染的有效药物[2，3]，它安全有效，无抗药性。我们分别以0.1和0.03g*kg-1*d-1的阿昔洛韦和氯化钠作为对照来证明大黄的抗HSV作用，结果发现0.1g*kg-1*d-1的阿昔洛韦抗HSV作用类似于11.3g*kg-1*d-1的大黄，但抗病毒效果低于6.7g*kg-1*d-1的大黄(表1)。这不仅表明大黄有类似阿昔洛韦的抗HSV的作用，也进一步证实了我们过去的体外(细胞内)研究结果，即大黄有抗HSV作用的结论[1]。
参考文献
1 罗军、陈安慎、杨占秋，等.中药大黄抗单纯疱疹病毒的实验研究.中华传染病杂志，1991，9：160-163.
, 百拇医药 2 Spruance SL, Mckeough MB. Evalution of antiviral treatment for recurrent herpes simplex labialis in the dorsal cutaneous Guinea pig model. Antiviral Res, 1988,9:295-311.
3 Park NH, Pavan-cangston D, Mclean SL. Acyclovir in oral and ganglionic herpes simplex virus infection. J Infect Dis, 1979, 140:802-806.
(收稿：1997-05-22 修回：1998-02-13), 百拇医药
单位：510010 广州，广州军区总医院预防保健科(罗军、刘振安)；湖北医科大学病毒研究所(肖红、杨占秋、文利、刘建军)
关键词：
中华传染病杂志980419
大黄在细胞内对单纯疱疹病毒(HSV)的繁殖有抑制作用[1]。为了证明该药在体内的作用，我们进一步观察了对HSV感染小白鼠的治疗结果，现报告如下。
材料与方法
一、病毒、细胞与药物
(一)病毒 HSV-1 7株，HSV-2 333株，均为标准株，由美国Hersegy医学中心微生物学科Rapp教授惠赠。
, http://www.100md.com
(二)细胞 Hep-2细胞由湖北医科大学病毒研究所提供。培养用199培养基+10%小牛血清，常规加入青、链霉素。
(三)药物 药物含量为100ml含原植物100g(即生药含量100%)，详见参考文献[1]。
二、动物
(一)来源 小白鼠为昆明种，体重15±1.6g，购于中国科学院武汉病毒所实验动物中心。
(二)致病模型的建立 病毒滴度为100LD50/0.1毫升，右侧脑内注射，0.02毫升/只。20只鼠分为HSV-1感染组和HSV-2感染组。小白鼠感染病毒后第4天发病，表现为消瘦，体重下降，耸毛，倦缩，肢体麻痹，痉挛和衰竭。发病2～3天内死亡。HSV-2感染鼠发病时间较HSV-1感染鼠晚1～2天，但发病特征一致。HSV-1和HSV-2感染鼠的平均存活时间各为6.1±0.6天和6.6±0.8天。感染后第8天，两组动物均发病死亡，正常对照动物均存活。在感染鼠的血液、脑、心、肝、神经节内均可检出病毒和病毒抗原，感染组织出现线粒体变性、感染细胞空泡化等病理改变。
, 百拇医药
(三)抗病毒治疗 采用L9(3)4 正交设计方案，即按3.3、6.7、11.3、18.7g*kg-1*d-1(分别为药物对小鼠LD50的1/12、1/10、1/8、1/6)皮下给药，在病毒感染后24小时进行治疗，分别治疗5、7、9天，计算各组鼠存活率，对结果进行方差分析，选出较适治疗剂量为3.3、6.7、11.3g*kg-1*d-1，疗程7天。另设阿昔洛韦和0.9%氯化钠对照组及不用药物的对照组(含病毒对照和正常对照)。各组动物均为26只，但HSV-2对照为21只，正常对照为15只。所有动物观察40天。
(四)标本收集与处理 各组动物在治疗后定期收集血液与组织，进行病毒分离与滴定。
结 果
一、大黄抗病毒作用的疗效观察
, http://www.100md.com
HSV感染鼠经大黄、阿昔洛韦和氯化钠治疗后，动物有3种结局：一是发病死亡，症状和体征与未经药物治疗的病毒对照组鼠同，如前动物致病模型的建立所述；二是动物发病后2～3天内或更长一点时间又恢复正常，且发病症状较轻，但部分动物发育较慢，体重较正常动物轻；另一是动物不出现任何发病症状，发育和生长正常。
从存活率和平均存活时间看，各组动物间显示出明显差异。从表1可知，6.7g*kg-1*d-1治疗鼠的存活率和平均存活时间显著高于3.3、11.3g*kg-1*d-1治疗鼠，P<0.05，与氯化钠治疗鼠比较，P<0.001，与阿昔洛韦比较，P<0.05。
表1 大黄治疗的HSV感染鼠存活率和存活时间的比较 组 别
存活率(%)
平均存活时间(d,
), 百拇医药
HSV-1
HSV-2
HSV-1
HSV-2
大黄治疗组(g*kg-1*d-1)
3.3
0.0
0.0
6.3±0.7
6.8±0.6
6.7
61.5
, http://www.100md.com
69.2
29.4±2.1
28.6±2.7
11.3
38.5
46.2
22.8±2.7
20.5±2.1
阿昔洛韦(0.1g*kg-1*d-1)
23.1
30.8
19.0±1.5
, http://www.100md.com
28.6±2.1
0.9%NaCl
0.0
11.5
5.6±0.5
6.3±0.7
病毒对照
0.0
0.0
4.8±0.3
6.0±0.4
正常对照
100
, http://www.100md.com
40.0±0.0
表2 大黄对HSV感染鼠体内病毒滴度的影响 (pFu/ml,
) 组 别组织中病毒滴度
血液中病毒滴度
脑
心
肝
神经节
HSV-1组
剂量(g*kg-1*d-1)
, 百拇医药
3.3
5.7±0.2
5.6±0.2
5.6±0.1
5.9±0.2
6.1±0.2
6.7
1.6±0.7
1.8±0.7
1.9±0.7
2.1±0.2
2.1±0.3
, http://www.100md.com
11.3
3.5±0.4
3.2±0.2
3.0±0.2
3.4±0.2
3.7±0.1
HSV-2组
剂量(g*kg-1*d-1)
3.3
6.0±0.2
5.6±0.2
5.9±0.3
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5.9±0.3
6.0±0.2
6.7
1.7±0.4
1.8±0.5
1.4±0.4
1.9±0.2
2.0±0.2
11.3
3.2±0.4
3.6±0.2
3.0±0.2
, 百拇医药
3.2±0.2
3.4±0.2
二、大黄对HSV感染鼠体内病毒的清除作用
从表2可以看出，大黄能加快HSV感染鼠脑、心、肝、神经节和血液内病毒的清除，且显示出量效关系，6.7g*kg-1*d-1组鼠下降较快，与3.3g*kg-1*d-1组比较，P<0.001，与11.3g*kg-1*d-1组比较，P<0.05。对不同组织中病毒的检测发现，神经节中病毒滴度下降较慢，肝脏病毒滴度下降较快。
三、大黄抗HSV作用与其他药物的比较
研究发现0.1g*kg-1*d-1阿昔洛韦治疗的HSV-1和HSV-2感染鼠体内病毒平均滴度为3.1±0.4和2.9±0.3pFu/ml，类似于11.3g*kg-1*d-1大黄治疗鼠的3.5±0.7和3.8±1.1pFu/ml，而0.03g*kg-1*d-1阿昔洛韦治疗的HSV感染鼠体内病毒平均滴度(5.2±0.2和5.5±0.3pFu/ml)高于6.7g*kg-1*d-1大黄治疗组(1.8±0.7和1.4±0.4pFu/ml)。在0.9%氯化钠治疗组鼠体内病毒滴度类似于病毒对照组，均在5.7±0.5pFu/ml以上。讨论
, 百拇医药
阿昔洛韦是治疗HSV感染的有效药物[2，3]，它安全有效，无抗药性。我们分别以0.1和0.03g*kg-1*d-1的阿昔洛韦和氯化钠作为对照来证明大黄的抗HSV作用，结果发现0.1g*kg-1*d-1的阿昔洛韦抗HSV作用类似于11.3g*kg-1*d-1的大黄，但抗病毒效果低于6.7g*kg-1*d-1的大黄(表1)。这不仅表明大黄有类似阿昔洛韦的抗HSV的作用，也进一步证实了我们过去的体外(细胞内)研究结果，即大黄有抗HSV作用的结论[1]。
参考文献
1 罗军、陈安慎、杨占秋，等.中药大黄抗单纯疱疹病毒的实验研究.中华传染病杂志，1991，9：160-163.
, 百拇医药 2 Spruance SL, Mckeough MB. Evalution of antiviral treatment for recurrent herpes simplex labialis in the dorsal cutaneous Guinea pig model. Antiviral Res, 1988,9:295-311.
3 Park NH, Pavan-cangston D, Mclean SL. Acyclovir in oral and ganglionic herpes simplex virus infection. J Infect Dis, 1979, 140:802-806.
(收稿：1997-05-22 修回：1998-02-13), 百拇医药