肾癌组织肿瘤浸润淋巴细胞成分分析及临床意义
作者：李鹰 侯树坤 张小东 张冠 朱积川 王晓峰
单位：100044 北京医科大学附属人民医院泌尿外科
关键词：淋巴细胞，肿瘤浸润；癌，肾细胞；预后
中华外科杂志/980522
【摘要】 目的 探讨肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)与肾癌患者预后的关系。方法 采用免疫组化方法对其各种主要细胞成分进行半定量研究,并就不同细胞成分与患者预后的关系分别进行分析。结果 TIL主要由T淋巴细胞构成,B淋巴细胞,单核巨噬细胞,自然杀伤细胞(NK)则较少;T淋巴细胞与预后有较强的相关性,而B淋巴细胞,单核巨噬细胞,NK细胞与预后无相关性。结论 T淋巴细胞能反映机体免疫状态,可作为判断患者预后的指标。
Subpopulations of TIL in renal cell carcinoma and their clinical significance Li Ying,Hou Shukun,Zhang Xiaodong,et al.Department of Urology,People′s Hospital,Beijing Medical University, Beijing 100044.
, 百拇医药
【Abstract】 Objective To study the relationship between tumor-infiltrating lymphocytes(TIL) and the prognosis of patients with renal cell carcinoma. Method Immunohistological chemistry method was employed to semiquantatively assess the expression of TIL and its subpopulations.The prognostic values of various TIL subpopulations were also evaluated. Result T-lymphocyte was the main component of TIL,B-lymphocyte,monocyte,and nature killer(NK) cells were also presented but in relatively small numbers. T-lymphocyte was strongly correlated to the survival probability,but this correlation was not observed between the host survival and TIL or other subpopulations.Conclusion T-lymphocyte can represent the host immunological status and can be used to judge the prognosis of patients with renal cell carcinoma.
, 百拇医药
【Key words】 Lymphocytes,tumor-infiltrating Carcinoma,renal cell Prognosis
肾癌生物学行为复杂,预后较难预料。肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)作为机体局部免疫状态的标志,在肿瘤免疫中起着重要的作用。研究证明,TIL对肿瘤细胞具有杀伤作用。但对于TIL与肾癌预后的关系目前仍有争议。我们采用免疫组化方法对肾癌组织TIL及其各种主要细胞成分进行分析,以探讨各种不同细胞成分在判断预后方面的作用。
资料与方法
1.资料:石蜡包埋的肾癌组织蜡块52例。患者年龄22～72岁,平均51岁,均只接受肾癌根治术而未经放射及化学药物治疗。随访时间平均34个月(8～62个月)。至随访终止日期,共有14例死亡。根据Robson分期,Ⅰ期 19例、Ⅱ期 16例、Ⅲ期 13例、Ⅳ期4例。
, http://www.100md.com
2.试剂与方法:采用免疫组化中的LSAB(labelled streptavidian biotin)法。所用一抗抗体分别为抗LCA(抗TIL内的各种细胞)、抗CD45RO(抗T细胞)、抗L26(抗B细胞)、抗CD57(抗NK细胞),及抗Kp1(抗单核巨噬细胞)(以上抗体均为美国DAKO公司产品)。二抗采用生物素结合性兔抗鼠血清。加入二抗后,滴加辣根过氧化物酶结合性链酶亲和素,然后浸入DAB液内染色。
3.判定标准:每一切片都选取肿瘤与正常组织交界处及肿瘤组织内的毛细血管周围作为观察区域,共选择10个不同的视野(10×40),累计每一视野内的肿瘤细胞及肿瘤浸润淋巴细胞。最后计算出每1000个观测细胞(包括TIL细胞和肿瘤细胞)中的阳性细胞个数作为该种细胞的标记指数(labelling index, LI)。
结果
一、TIL的形态学特点
, 百拇医药
TIL主要分布在肿瘤与正常组织交界处及肿瘤组织内的毛细血管周围,以T淋巴细胞为主。几种主要成分在TIL内的构成比例为:T细胞65.8%,B细胞15.2%,单核细胞14.4%,NK细胞8.0%。在TIL与肿瘤细胞的交界处,未发现肿瘤细胞坏死现象。
二、TIL对临床预后的影响
1.TIL标记指数与生存率的关系:以TIL标记指数等于100为界,将52例标本分为2组。TIL标记指数大于100组35例,小于100组17例。TIL标记指数与生存率的关系曲线表明(图1),随TIL标记指数的增加生存年限有延长趋势。但经Log Rank检验,两组间差异无显著意义(P>0.05)。
图1 TIL-LI对生存率影响的Kaplan-Meier曲线
, 百拇医药 2.T-TIL(TIL中的T淋巴细胞)标记指数与生存率的关系：采用同样的分组标准将资料分为两组。T-TIL标记指数大于100组34例,小于100组18例。T-TIL标记指数与生存率的关系曲线表明(图2),T-TIL标记指数大于100组患者的生存率明显高于T-TIL标记指数小于100组,差异有显著意义(P<0.05)。
图2 T-TIL-LI对生存率影响的Kaplan-Meier曲线
3.B淋巴细胞、单核细胞及NK细胞标记指数与生存率的关系：TIL中这三种细胞成分较少,故以标记指数等于30为界,将52例标本分为2组。标记指数0～30者,B细胞28例，单核细胞32例，NK细胞33例;标记指数大于30者,B细胞24例,单核细胞20例,NK细胞19例。
对上述三种细胞成分与生存率的关系分别进行分析,经Log-Rank检验,这几种细胞成分对生存率无显著影响(P>0.05)。
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讨论
对TIL进行原位观察与分析是研究肿瘤与TIL相互关系的重要手段之一。我们的观察结果表明,绝大多数TIL分布在癌巢周围及肿瘤组织内的毛细血管周围。近年来,有大量证据表明TIL对肿瘤细胞具有杀伤作用[1]。尽管肿瘤细胞与TIL空间关系密切,但未发现二者交界处有肿瘤细胞坏死现象,提示TIL对肿瘤细胞的杀伤可能不是通过直接接触,而是通过释放淋巴因子等途径实现的。
影响肾癌预后的因素很多,其中肾癌病理分级及分期为大家所公认。此外,手术是否采用标准根治术对预后亦有较大影响。国内报告肾癌根治术患者的5年生存率为77.7%,而单纯肾切除者则为25%,与国外报道大体相同。
对TIL与临床预后的关系,目前仍有争议。我们的结果表明,TIL与预后无明显相关。对这一结果考虑有以下两点原因:(1)肾癌的生物学行为复杂,影响其预后的因素众多,各因素之间的相互干扰可掩盖TIL与预后的关系[2]。(2)TIL由多种细胞成分构成,不同标本其TIL的细胞构成情况可有所不同。总的说来,TIL主要由T淋巴细胞组成,B淋巴细胞、单核巨噬细胞及NK细胞相对较少[3]。由于各种细胞在免疫过程中的作用并不相同,如果TIL内的细胞构成发生变化,也会影响TIL与预后的关系。T-TIL与预后显示了较好的相关性。而其他几种细胞成分则与预后无相关。这一结果与理论推测相符。在肿瘤免疫过程中,无论是肿瘤抗原的识别、呈递以及各种淋巴因子的分泌,T淋巴细胞都担负着极其重要的作用[4，5],而其他成分的作用并不肯定。尚未见报道说明肿瘤周围B淋巴细胞具有肿瘤杀伤功能。虽然肿瘤周围有巨噬细胞浸润,而且可以通过抗体介导产生ADCC作用(抗体介导的细胞毒性作用),但是这些抗体在多大程度上来源于局部浸润的B淋巴细胞还不清楚[6]。有学者认为,抗体与肿瘤特异性抗原结合后会对肿瘤起到封闭保护作用。在体外研究中,巨噬细胞可同时表现出效应细胞与抑制细胞的功能。而在体内,这两种作用的相互关系则因肿瘤的不同而异[7]。NK细胞有杀伤肿瘤的功能,但由于在肿瘤周围的数量太少[8],故对预后无明显影响。
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以上结果表明,T淋巴细胞是TIL内的主要成分,并与预后有较强的相关性，是较好的判断预后的指标。
参考文献
1Vose BM,Moore M.Human tumor-infiltrating lymphocytes: a marker of host response. Semin Hematol,1985,27:27-28.
2Lanigan D. Prognostic factors in renal cell carcinoma.Br J Urol, 1995,75:565-566.
3Svennevig JL.In situ identification of inflammatory cells in malignant,non-lymphoid human tumors.Acta Pathol Microbio Scand, 1980,88:387-388.
, http://www.100md.com
4Constantin G.T cell recognition of human tumors:implications for molecular immunotherapy of cancer.Clinical Immunol Immunopathol,1993,l66:91-92.
5Mukherji B,Chakraborty NG,Sivanandham M.T cell clones that react against autologous human tumors. Immunol Rev,1990,116:33-35.
6Dammacco F, Miglietta A, Lospolluti M, et al.Macrophages in skin cancer:quantitative and function studies.Tumor,1979,65:309-310.
, 百拇医药
7Haskill S,Koren K,Becker S,et al.Mononuclear-cell infiltration in ovarian cancer:suppressor-cell and ADCC activity of macrophages from ascites of an solid ovarian tumors. Br J Cancer, 1982,45:747-749.
8Moore M,Vose BM.Extravascular natural cytotoxicity in man: anti-K562 activity of lymphonode and tumor infiltrating lymphocytes. Int J Cancer,1981,27:265-266., 百拇医药
单位：100044 北京医科大学附属人民医院泌尿外科
关键词：淋巴细胞，肿瘤浸润；癌，肾细胞；预后
中华外科杂志/980522
【摘要】 目的 探讨肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)与肾癌患者预后的关系。方法 采用免疫组化方法对其各种主要细胞成分进行半定量研究,并就不同细胞成分与患者预后的关系分别进行分析。结果 TIL主要由T淋巴细胞构成,B淋巴细胞,单核巨噬细胞,自然杀伤细胞(NK)则较少;T淋巴细胞与预后有较强的相关性,而B淋巴细胞,单核巨噬细胞,NK细胞与预后无相关性。结论 T淋巴细胞能反映机体免疫状态,可作为判断患者预后的指标。
Subpopulations of TIL in renal cell carcinoma and their clinical significance Li Ying,Hou Shukun,Zhang Xiaodong,et al.Department of Urology,People′s Hospital,Beijing Medical University, Beijing 100044.
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【Abstract】 Objective To study the relationship between tumor-infiltrating lymphocytes(TIL) and the prognosis of patients with renal cell carcinoma. Method Immunohistological chemistry method was employed to semiquantatively assess the expression of TIL and its subpopulations.The prognostic values of various TIL subpopulations were also evaluated. Result T-lymphocyte was the main component of TIL,B-lymphocyte,monocyte,and nature killer(NK) cells were also presented but in relatively small numbers. T-lymphocyte was strongly correlated to the survival probability,but this correlation was not observed between the host survival and TIL or other subpopulations.Conclusion T-lymphocyte can represent the host immunological status and can be used to judge the prognosis of patients with renal cell carcinoma.
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【Key words】 Lymphocytes,tumor-infiltrating Carcinoma,renal cell Prognosis
肾癌生物学行为复杂,预后较难预料。肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)作为机体局部免疫状态的标志,在肿瘤免疫中起着重要的作用。研究证明,TIL对肿瘤细胞具有杀伤作用。但对于TIL与肾癌预后的关系目前仍有争议。我们采用免疫组化方法对肾癌组织TIL及其各种主要细胞成分进行分析,以探讨各种不同细胞成分在判断预后方面的作用。
资料与方法
1.资料:石蜡包埋的肾癌组织蜡块52例。患者年龄22～72岁,平均51岁,均只接受肾癌根治术而未经放射及化学药物治疗。随访时间平均34个月(8～62个月)。至随访终止日期,共有14例死亡。根据Robson分期,Ⅰ期 19例、Ⅱ期 16例、Ⅲ期 13例、Ⅳ期4例。
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2.试剂与方法:采用免疫组化中的LSAB(labelled streptavidian biotin)法。所用一抗抗体分别为抗LCA(抗TIL内的各种细胞)、抗CD45RO(抗T细胞)、抗L26(抗B细胞)、抗CD57(抗NK细胞),及抗Kp1(抗单核巨噬细胞)(以上抗体均为美国DAKO公司产品)。二抗采用生物素结合性兔抗鼠血清。加入二抗后,滴加辣根过氧化物酶结合性链酶亲和素,然后浸入DAB液内染色。
3.判定标准:每一切片都选取肿瘤与正常组织交界处及肿瘤组织内的毛细血管周围作为观察区域,共选择10个不同的视野(10×40),累计每一视野内的肿瘤细胞及肿瘤浸润淋巴细胞。最后计算出每1000个观测细胞(包括TIL细胞和肿瘤细胞)中的阳性细胞个数作为该种细胞的标记指数(labelling index, LI)。
结果
一、TIL的形态学特点
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TIL主要分布在肿瘤与正常组织交界处及肿瘤组织内的毛细血管周围,以T淋巴细胞为主。几种主要成分在TIL内的构成比例为:T细胞65.8%,B细胞15.2%,单核细胞14.4%,NK细胞8.0%。在TIL与肿瘤细胞的交界处,未发现肿瘤细胞坏死现象。
二、TIL对临床预后的影响
1.TIL标记指数与生存率的关系:以TIL标记指数等于100为界,将52例标本分为2组。TIL标记指数大于100组35例,小于100组17例。TIL标记指数与生存率的关系曲线表明(图1),随TIL标记指数的增加生存年限有延长趋势。但经Log Rank检验,两组间差异无显著意义(P>0.05)。
图1 TIL-LI对生存率影响的Kaplan-Meier曲线
, 百拇医药 2.T-TIL(TIL中的T淋巴细胞)标记指数与生存率的关系：采用同样的分组标准将资料分为两组。T-TIL标记指数大于100组34例,小于100组18例。T-TIL标记指数与生存率的关系曲线表明(图2),T-TIL标记指数大于100组患者的生存率明显高于T-TIL标记指数小于100组,差异有显著意义(P<0.05)。
图2 T-TIL-LI对生存率影响的Kaplan-Meier曲线
3.B淋巴细胞、单核细胞及NK细胞标记指数与生存率的关系：TIL中这三种细胞成分较少,故以标记指数等于30为界,将52例标本分为2组。标记指数0～30者,B细胞28例，单核细胞32例，NK细胞33例;标记指数大于30者,B细胞24例,单核细胞20例,NK细胞19例。
对上述三种细胞成分与生存率的关系分别进行分析,经Log-Rank检验,这几种细胞成分对生存率无显著影响(P>0.05)。
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讨论
对TIL进行原位观察与分析是研究肿瘤与TIL相互关系的重要手段之一。我们的观察结果表明,绝大多数TIL分布在癌巢周围及肿瘤组织内的毛细血管周围。近年来,有大量证据表明TIL对肿瘤细胞具有杀伤作用[1]。尽管肿瘤细胞与TIL空间关系密切,但未发现二者交界处有肿瘤细胞坏死现象,提示TIL对肿瘤细胞的杀伤可能不是通过直接接触,而是通过释放淋巴因子等途径实现的。
影响肾癌预后的因素很多,其中肾癌病理分级及分期为大家所公认。此外,手术是否采用标准根治术对预后亦有较大影响。国内报告肾癌根治术患者的5年生存率为77.7%,而单纯肾切除者则为25%,与国外报道大体相同。
对TIL与临床预后的关系,目前仍有争议。我们的结果表明,TIL与预后无明显相关。对这一结果考虑有以下两点原因:(1)肾癌的生物学行为复杂,影响其预后的因素众多,各因素之间的相互干扰可掩盖TIL与预后的关系[2]。(2)TIL由多种细胞成分构成,不同标本其TIL的细胞构成情况可有所不同。总的说来,TIL主要由T淋巴细胞组成,B淋巴细胞、单核巨噬细胞及NK细胞相对较少[3]。由于各种细胞在免疫过程中的作用并不相同,如果TIL内的细胞构成发生变化,也会影响TIL与预后的关系。T-TIL与预后显示了较好的相关性。而其他几种细胞成分则与预后无相关。这一结果与理论推测相符。在肿瘤免疫过程中,无论是肿瘤抗原的识别、呈递以及各种淋巴因子的分泌,T淋巴细胞都担负着极其重要的作用[4，5],而其他成分的作用并不肯定。尚未见报道说明肿瘤周围B淋巴细胞具有肿瘤杀伤功能。虽然肿瘤周围有巨噬细胞浸润,而且可以通过抗体介导产生ADCC作用(抗体介导的细胞毒性作用),但是这些抗体在多大程度上来源于局部浸润的B淋巴细胞还不清楚[6]。有学者认为,抗体与肿瘤特异性抗原结合后会对肿瘤起到封闭保护作用。在体外研究中,巨噬细胞可同时表现出效应细胞与抑制细胞的功能。而在体内,这两种作用的相互关系则因肿瘤的不同而异[7]。NK细胞有杀伤肿瘤的功能,但由于在肿瘤周围的数量太少[8],故对预后无明显影响。
, http://www.100md.com
以上结果表明,T淋巴细胞是TIL内的主要成分,并与预后有较强的相关性，是较好的判断预后的指标。
参考文献
1Vose BM,Moore M.Human tumor-infiltrating lymphocytes: a marker of host response. Semin Hematol,1985,27:27-28.
2Lanigan D. Prognostic factors in renal cell carcinoma.Br J Urol, 1995,75:565-566.
3Svennevig JL.In situ identification of inflammatory cells in malignant,non-lymphoid human tumors.Acta Pathol Microbio Scand, 1980,88:387-388.
, http://www.100md.com
4Constantin G.T cell recognition of human tumors:implications for molecular immunotherapy of cancer.Clinical Immunol Immunopathol,1993,l66:91-92.
5Mukherji B,Chakraborty NG,Sivanandham M.T cell clones that react against autologous human tumors. Immunol Rev,1990,116:33-35.
6Dammacco F, Miglietta A, Lospolluti M, et al.Macrophages in skin cancer:quantitative and function studies.Tumor,1979,65:309-310.
, 百拇医药
7Haskill S,Koren K,Becker S,et al.Mononuclear-cell infiltration in ovarian cancer:suppressor-cell and ADCC activity of macrophages from ascites of an solid ovarian tumors. Br J Cancer, 1982,45:747-749.
8Moore M,Vose BM.Extravascular natural cytotoxicity in man: anti-K562 activity of lymphonode and tumor infiltrating lymphocytes. Int J Cancer,1981,27:265-266., 百拇医药