CD44v和nm23-H1产物在复发性膀胱癌表达的意义
作者：李伯全 李玉魁 戴庆棠 朱京平 贾金钟
单位：300142 天津，解放军二五四医院泌尿外科(李伯全、李玉魁、朱京平)，信息科(戴庆棠)，病理科(贾金钟)
关键词：膀胱肿瘤；癌；基因表达
中华外科杂志/980521 【摘要】 目的 探讨CD44v和nm23-H1产物对诊断膀胱癌恶性程度和复发的意义。 方法 应用流式免疫法对45例膀胱癌标本的CD44v和nm23-H1基因产物的表达进行研究。 结果 CD44v产物的高表达和nm23-H1 产物的低表达与膀胱癌的浸润程度和复发均有关(P<0.05)。在膀胱癌中CD44v和nm23-H1基因产物表达呈负相关(r=-0.2876)，在复发性膀胱癌中两者表达亦呈负相关(r=-0.4238)。 结论 CD44v和nm23-H1 表达在膀胱癌发生发展和预后中起协同作用,同时检测 CD44v和nm23-H1 基因产物的表达能为判断膀胱癌的恶性程度和复发提供依据。
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CD44v and nm23-H1 gene product expression and its clinical significance in human recurrent bladder cancer Li Boquan,Li Yukui, Dai Qingtang, et al.Department of Urology,254th Hospital of People′s Liberation Army,Tianjin 300142.
【Abstract】 Objective To investigate the expression of the CD44v and nm23-H1 gene products and its clinical significance in human recurrent bladder cancer. Method The CD44v and nm23-H1 gene products in 45 cases of bladder cancer were analysed quantitatlively by flow cytometry and cytoimmunofluorescence staining. Result The CD44v gene product overexperssion and nm23-H1 gene product low experssion were correlated with invasive extent and recurrence of bladder cancer (P<0.05).The correlation coefficients between CD44v gene product and nm23-H1 gene product were γ=-0.2876 in bladder cancer. The correlation coefficients between CD44v gene product and nm23-H1 gene product were γ=-0.4238 in recurrent bladder cancer. Conclusion The expression of CD44v and nm23-H1 gene product cooperated in growth and progress of bladder cancer. Both CD44v and nm23-H1 gene products were an objective indication of invasive extent and recurrence of bladder cancer.
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【Key words】 Bladder neoplasms Cancinoma Gene expression
膀胱移行细胞癌是泌尿系最常见的恶性肿瘤,术后极易复发为其显著的生物学特征。已有研究认为CD44v和nm23-H1 基因产物与恶性肿瘤的预后有关[1，2]。因此,我们采用流式细胞免疫法，对存档的45例膀胱癌标本进行研究，旨在初步探讨CD44v和nm23-H1 基因产物表达与膀胱癌复发的关系。
资料与方法
选择本院存档的膀胱癌标本45例,均经病理证实为膀胱移行细胞癌,男性28例,女性17例,年龄26～78岁，平均54.6岁。肿瘤组织均经10%中性福尔马林固定,常规石蜡包埋。按WHO分级标准，Ⅰ级11例，Ⅱ级19例，Ⅲ级15例。临床分期按国际联合抗癌协会(UICC)标准，Tis-1 10例，T2-435例。
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将40 μm石蜡切片依次二甲苯脱蜡，梯度酒精水化，用网搓法制备单细胞悬液样品，然后采用间接免疫荧光标记法。第一抗体分别为1∶100鼠抗人CD44v单克隆抗体(MEM-85)(Netheriands)和1∶100鼠抗人nm23-H1 单克隆抗体(Santa Cruz Blotechnology);第二抗体为1∶20羊抗鼠FIFC-IgG(军事医学科学院微生物研究所生产)。最后采用美国BD公司生产的FACS420型流式细胞仪进行检测,免疫荧光检测同时附设阴性和阳性对照样品，用磷酸盐缓冲液代替第一抗体(CD44v单抗；nm23-H1单抗)作为阴性对照；用只加入1∶100的第一抗体100 μl作为阳性对照和只加入1∶20的第二抗体(FIFC-IgG)100 μl的阳性对照。以荧光指数(fluorescence index, FI)表示CD44v和nm23-H1 基因产物表达的相对含量。
结果
1.CD44v和nm23-H1 表达与病理分级：肿瘤浸润程度及复发情况的关系：各病理分级组间比较差异无显著性意义(P>0.05)。表浅癌与浸润癌，复发癌与未复发癌组间比较差异有显著性意义(附表)。
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附表 45例膀胱癌病理分级、肿瘤浸润程度及复发情况
与CD44v和nm23-H1 表达的关系(
±s) 项目
例数
CD44v
nm23-H1
分级
Ⅰ
11
1.35±0.10
1.19±0.11
Ⅱ
, 百拇医药
19
1.37±0.32
0.97±0.12
Ⅲ
15
1.52±0.24
0.91±0.13
浅表癌Tis-1
10
1.34±0.25
1.20±0.10
浸润癌T2'-4
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35
1.44±0.29
0.94±0.13
未复发癌
25
1.33±0.20
1.09±0.14
复发癌
20
1.52±0.23
0.89±0.13
2.CD44v和nm23-H1共同表达与膀胱癌复发的关系：45例膀胱癌的CD44v和nm23-H1产物表达量(荧光指数，FI)的相关系数为γ=-0.2876，直线相关系数的假设检验t=1.9685，P<0.05。复发性膀胱癌组为20例，CD44v和nm23-H1 产物表达量(FI)的相关系数为γ=-0.4238,直线相关系数的假设检验t=1.9859，P<0.05。 讨论
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细胞表面分子CD44v是一组细胞表面糖蛋白[1]。最先描述为淋巴细胞归巢受体(homing receptor),主要有两大类：一类主要在间质和造血源性细胞中表达,为透明质酸盐的主要表面受体,称CD44H，又称标准型(CD44s)；另一类主要在上皮源性细胞和肿瘤中表达,称CD44E ，又称变异型(CD44v)。大量实验研究表明，CD44不但在淋巴细胞功能及细胞间质相互作用中，而且在肿瘤的生长和转移中起重要作用[4，5]。本研究显示,随着膀胱癌的病理分级,浸润程度的增加，CD44v表达量渐增加(P<0.05),复发性膀胱癌的CD44v表达量，高于未复发膀胱癌的CD44v表达量，且具有显著的统计学意义(P<0.05),提示CD44v在膀胱癌中的高表达时,肿瘤浸润及复发能力增高。
nm23基因于1988年由美国国立癌症研究院的Steeg等[6]首先发现,nm23基因编码的17KD的蛋白质与核苷二磷酸激酶(NDPK)具有高度同源性,推测nm23的改变可能与肿瘤的浸润转移有关，已被认为是肿瘤转移抑制基因。该研究结果表明，浅表性膀胱癌nm23-H1 产物表达量较浸润性膀胱癌的nm23-H1产物表达量高；未复发膀胱癌的nm23-H1 产物表达量较复发膀胱癌的nm23-H1 产物表达量增多，差异均有显著意义(P<0.05)。提示nm23-H1 产物高表达与膀胱癌高分化、低浸润及良好预后有关。
, 百拇医药
事实上肿瘤发生发展及预后是受诸多内外因素影响,仅凭单一指标判断肿瘤预后是较局限的、不客观的。CD44v和nm23-H1 在膀胱癌的共同表达显示CD44v和nm23-H1呈负相关(γ=-0.2876)，在复发性膀胱癌组中两者呈负相关性更加显著(γ=-0.4238),提示膀胱癌的发生发展和(或)复发与CD44v产物高表达和nm23-H1 低表达都相关，并有协同作用。因此，为了了解膀胱癌的生物学行为和评估预后，同时检验CD44v和nm23-H1 更具有意义。但是，CD44v和nm23-H1 在膀胱癌发生、发展和预后中的确切作用如何？两者是怎样协同作用? 目前尚不完全清楚，仍需进一步研究。
参考文献
1Tanabe KK, Ellis LM, Saya H.Expression of CD44R1 adhesion molecule in colon carcinomas of metastases. Lancet, 1993, 341:725-726.
, 百拇医药
2Tokunaga Y, Urano T, Furukawa K, et al.Reduced expression of nm23-H1,but not nm23-H2, is concordant with the frequeny of lymph-node metastasis of human breast cancer. Int J Cancer, 1993, 55:66-67.
3Dalchan R,Kirkley J,Fabre JW.Monoclonal antibody to a human brain-granulocyte-T lymphocyte antigen probably homologous to the W 3/13 antigen of the rat.Eur J Immunol, 1980, 10:745-747.
4Haynes BF,Telen MJ,Hale LP，et al. CD44-a molecule involved in leukocyte adherence and T-cell activation. Imm Today, 1989, 10:423-424.
5Tarin D, Matsumura Y.Recent advancesin the study of tumour invasion and matastasis.J Clin Pathol, 1994, 47:385-386.
6Steeg PS, Beviacqua G,Kopper L,et al.Evidence for a novel gene associated with low metastatic potential.J Natl Cancer Int, 1988,80:200-202., 百拇医药
单位：300142 天津，解放军二五四医院泌尿外科(李伯全、李玉魁、朱京平)，信息科(戴庆棠)，病理科(贾金钟)
关键词：膀胱肿瘤；癌；基因表达
中华外科杂志/980521 【摘要】 目的 探讨CD44v和nm23-H1产物对诊断膀胱癌恶性程度和复发的意义。 方法 应用流式免疫法对45例膀胱癌标本的CD44v和nm23-H1基因产物的表达进行研究。 结果 CD44v产物的高表达和nm23-H1 产物的低表达与膀胱癌的浸润程度和复发均有关(P<0.05)。在膀胱癌中CD44v和nm23-H1基因产物表达呈负相关(r=-0.2876)，在复发性膀胱癌中两者表达亦呈负相关(r=-0.4238)。 结论 CD44v和nm23-H1 表达在膀胱癌发生发展和预后中起协同作用,同时检测 CD44v和nm23-H1 基因产物的表达能为判断膀胱癌的恶性程度和复发提供依据。
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CD44v and nm23-H1 gene product expression and its clinical significance in human recurrent bladder cancer Li Boquan,Li Yukui, Dai Qingtang, et al.Department of Urology,254th Hospital of People′s Liberation Army,Tianjin 300142.
【Abstract】 Objective To investigate the expression of the CD44v and nm23-H1 gene products and its clinical significance in human recurrent bladder cancer. Method The CD44v and nm23-H1 gene products in 45 cases of bladder cancer were analysed quantitatlively by flow cytometry and cytoimmunofluorescence staining. Result The CD44v gene product overexperssion and nm23-H1 gene product low experssion were correlated with invasive extent and recurrence of bladder cancer (P<0.05).The correlation coefficients between CD44v gene product and nm23-H1 gene product were γ=-0.2876 in bladder cancer. The correlation coefficients between CD44v gene product and nm23-H1 gene product were γ=-0.4238 in recurrent bladder cancer. Conclusion The expression of CD44v and nm23-H1 gene product cooperated in growth and progress of bladder cancer. Both CD44v and nm23-H1 gene products were an objective indication of invasive extent and recurrence of bladder cancer.
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【Key words】 Bladder neoplasms Cancinoma Gene expression
膀胱移行细胞癌是泌尿系最常见的恶性肿瘤,术后极易复发为其显著的生物学特征。已有研究认为CD44v和nm23-H1 基因产物与恶性肿瘤的预后有关[1，2]。因此,我们采用流式细胞免疫法，对存档的45例膀胱癌标本进行研究，旨在初步探讨CD44v和nm23-H1 基因产物表达与膀胱癌复发的关系。
资料与方法
选择本院存档的膀胱癌标本45例,均经病理证实为膀胱移行细胞癌,男性28例,女性17例,年龄26～78岁，平均54.6岁。肿瘤组织均经10%中性福尔马林固定,常规石蜡包埋。按WHO分级标准，Ⅰ级11例，Ⅱ级19例，Ⅲ级15例。临床分期按国际联合抗癌协会(UICC)标准，Tis-1 10例，T2-435例。
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将40 μm石蜡切片依次二甲苯脱蜡，梯度酒精水化，用网搓法制备单细胞悬液样品，然后采用间接免疫荧光标记法。第一抗体分别为1∶100鼠抗人CD44v单克隆抗体(MEM-85)(Netheriands)和1∶100鼠抗人nm23-H1 单克隆抗体(Santa Cruz Blotechnology);第二抗体为1∶20羊抗鼠FIFC-IgG(军事医学科学院微生物研究所生产)。最后采用美国BD公司生产的FACS420型流式细胞仪进行检测,免疫荧光检测同时附设阴性和阳性对照样品，用磷酸盐缓冲液代替第一抗体(CD44v单抗；nm23-H1单抗)作为阴性对照；用只加入1∶100的第一抗体100 μl作为阳性对照和只加入1∶20的第二抗体(FIFC-IgG)100 μl的阳性对照。以荧光指数(fluorescence index, FI)表示CD44v和nm23-H1 基因产物表达的相对含量。
结果
1.CD44v和nm23-H1 表达与病理分级：肿瘤浸润程度及复发情况的关系：各病理分级组间比较差异无显著性意义(P>0.05)。表浅癌与浸润癌，复发癌与未复发癌组间比较差异有显著性意义(附表)。
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附表 45例膀胱癌病理分级、肿瘤浸润程度及复发情况
与CD44v和nm23-H1 表达的关系(
±s) 项目例数
CD44v
nm23-H1
分级
Ⅰ
11
1.35±0.10
1.19±0.11
Ⅱ
, 百拇医药
19
1.37±0.32
0.97±0.12
Ⅲ
15
1.52±0.24
0.91±0.13
浅表癌Tis-1
10
1.34±0.25
1.20±0.10
浸润癌T2'-4
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35
1.44±0.29
0.94±0.13
未复发癌
25
1.33±0.20
1.09±0.14
复发癌
20
1.52±0.23
0.89±0.13
2.CD44v和nm23-H1共同表达与膀胱癌复发的关系：45例膀胱癌的CD44v和nm23-H1产物表达量(荧光指数，FI)的相关系数为γ=-0.2876，直线相关系数的假设检验t=1.9685，P<0.05。复发性膀胱癌组为20例，CD44v和nm23-H1 产物表达量(FI)的相关系数为γ=-0.4238,直线相关系数的假设检验t=1.9859，P<0.05。 讨论
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细胞表面分子CD44v是一组细胞表面糖蛋白[1]。最先描述为淋巴细胞归巢受体(homing receptor),主要有两大类：一类主要在间质和造血源性细胞中表达,为透明质酸盐的主要表面受体,称CD44H，又称标准型(CD44s)；另一类主要在上皮源性细胞和肿瘤中表达,称CD44E ，又称变异型(CD44v)。大量实验研究表明，CD44不但在淋巴细胞功能及细胞间质相互作用中，而且在肿瘤的生长和转移中起重要作用[4，5]。本研究显示,随着膀胱癌的病理分级,浸润程度的增加，CD44v表达量渐增加(P<0.05),复发性膀胱癌的CD44v表达量，高于未复发膀胱癌的CD44v表达量，且具有显著的统计学意义(P<0.05),提示CD44v在膀胱癌中的高表达时,肿瘤浸润及复发能力增高。
nm23基因于1988年由美国国立癌症研究院的Steeg等[6]首先发现,nm23基因编码的17KD的蛋白质与核苷二磷酸激酶(NDPK)具有高度同源性,推测nm23的改变可能与肿瘤的浸润转移有关，已被认为是肿瘤转移抑制基因。该研究结果表明，浅表性膀胱癌nm23-H1 产物表达量较浸润性膀胱癌的nm23-H1产物表达量高；未复发膀胱癌的nm23-H1 产物表达量较复发膀胱癌的nm23-H1 产物表达量增多，差异均有显著意义(P<0.05)。提示nm23-H1 产物高表达与膀胱癌高分化、低浸润及良好预后有关。
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事实上肿瘤发生发展及预后是受诸多内外因素影响,仅凭单一指标判断肿瘤预后是较局限的、不客观的。CD44v和nm23-H1 在膀胱癌的共同表达显示CD44v和nm23-H1呈负相关(γ=-0.2876)，在复发性膀胱癌组中两者呈负相关性更加显著(γ=-0.4238),提示膀胱癌的发生发展和(或)复发与CD44v产物高表达和nm23-H1 低表达都相关，并有协同作用。因此，为了了解膀胱癌的生物学行为和评估预后，同时检验CD44v和nm23-H1 更具有意义。但是，CD44v和nm23-H1 在膀胱癌发生、发展和预后中的确切作用如何？两者是怎样协同作用? 目前尚不完全清楚，仍需进一步研究。
参考文献
1Tanabe KK, Ellis LM, Saya H.Expression of CD44R1 adhesion molecule in colon carcinomas of metastases. Lancet, 1993, 341:725-726.
, 百拇医药
2Tokunaga Y, Urano T, Furukawa K, et al.Reduced expression of nm23-H1,but not nm23-H2, is concordant with the frequeny of lymph-node metastasis of human breast cancer. Int J Cancer, 1993, 55:66-67.
3Dalchan R,Kirkley J,Fabre JW.Monoclonal antibody to a human brain-granulocyte-T lymphocyte antigen probably homologous to the W 3/13 antigen of the rat.Eur J Immunol, 1980, 10:745-747.
4Haynes BF,Telen MJ,Hale LP，et al. CD44-a molecule involved in leukocyte adherence and T-cell activation. Imm Today, 1989, 10:423-424.
5Tarin D, Matsumura Y.Recent advancesin the study of tumour invasion and matastasis.J Clin Pathol, 1994, 47:385-386.
6Steeg PS, Beviacqua G,Kopper L,et al.Evidence for a novel gene associated with low metastatic potential.J Natl Cancer Int, 1988,80:200-202., 百拇医药