放线菌酮对大鼠应激性溃疡的预防作用
作者：陈学清 潘国宗 周殿元
单位：510515 广州，第一军医大学南方医院消化科[陈学清、周殿元(陈学清现在北京协和医院消化科工作)]，中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院消化科(潘国宗)
关键词：
中华医学杂志980613 胃酸在应激性溃疡发病中的作用，文献报道颇不一致[1～3]。放线菌酮(Cycloheximide, CHX)是一种大蛋白分子合成抑制剂。我们发现，CHX能特异地诱导大鼠粘膜淋巴细胞凋亡，并能抑制胃泌素和组织胺刺激引起的胃酸分泌[4]。为进一步探讨胃酸在应激性溃疡发生中的作用，我们应用大鼠冷拘束应激性溃疡模型，观察了CHX对实验性应激性溃疡发生的影响。
一、材料和方法
1.试剂和仪器：放线菌酮购自德国Serva公司。奥美啦唑为阿斯特拉公司产品。硝基精氨酸(Nω-Nitro-L-Arginine，LNNA)购自美国Sigma公司。其它试剂为国产分析纯。Doppler激光血流仪(LDH-2型)为天津南开大学电子仪器厂产品。
, 百拇医药
2.应激性溃疡模型：雌性SD大鼠(220±20 g)禁食48小时(自由饮水)随机分组，每组5只。动物用乙醚麻醉后，打开腹腔，从十二指肠注入150 mmol/L NaCl 1.0 ml。结扎幽门和贲门，束缚后置于4℃冰箱。实验结束后，取出胃液，将大鼠胃沿大弯剪开，固定于4%中性多聚甲醛中，在解剖显微镜下计算损伤指数[3]。部分腺胃组织常规脱水包埋作病理组织学检查。根据需要，实验前1.0小时，从大鼠腹腔注射奥美啦唑1.0 mg/kg、LNNA 3.0 mg/kg或/和CHX。
动物分组：Ⅰ组为冷拘束+生理盐水；Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别为冷拘束+CHX(剂量分别为1.0、2.0和3.0 mg/kg)；Ⅴ组为冷拘束+奥美啦唑；Ⅵ组为冷拘束+CHX(3.0 mg/kg)+LNNA。
附表 放线菌酮对冷拘束大鼠胃损伤、胃酸分泌和
胃粘膜淋巴细胞凋亡的影响(
±s) 组别
, 百拇医药
鼠数
胃损伤
指数(%)
胃酸排出
量(μmol/3h)
凋亡细胞(小
体)计数(%)
Ⅰ
5
38.0±4.2
252±30
-
Ⅱ
, 百拇医药
5
30.2±1.7
212±34
14.2±2.3
Ⅲ
5
8.6±2.2**
21± 4**
41.2±2.1
Ⅳ
5
1.0±0.6**
, 百拇医药
21± 5**
59.4±6.4
Ⅴ
5
0.8±0.8**
22± 4**
-
Ⅵ
5
11.4±2.2*
45±17**
, 百拇医药 62.0±7.6
与Ⅰ组相比，* P<0.05，** P<0.01
3.活体胃小腔模型：参考文献[5]方法制备，胃粘膜面积约0.8 cm2。稳定30分钟后开始测定胃粘膜血流和胃酸分泌量，并静脉给予不同剂量的CHX。给予CHX后30分钟内为胃粘膜血流的基础值(100%)，2小时后记录为基础值%。胃粘膜血流量每次记录时间约1.5秒。
4.胃酸分泌量的测定：应激实验结束后，收集胃液，离心后用0.01 mol/L NaOH反向滴定测定胃酸，酚红为指示剂。
5.病理组织学检查：4 μm石蜡切片常规脱蜡水化，HE染色，光镜检查。淋巴细胞凋亡判断参考文献方法并做凋亡细胞(小体)计数[4]，每张切片计数50个淋巴细胞。
, 百拇医药
6.统计学处理：实验结果数据作多因素方差分析。
二、结果
1.CHX对应激性溃疡发生的保护作用：3小时应激实验结束后，Ⅲ、Ⅳ组和奥美啦唑组胃粘膜大体正常，而对照组可见胃粘膜上附有大量血痂和粘膜溃疡。Ⅱ和Ⅵ组胃粘膜损伤较对照组轻。各组的损伤指数见附表。Ⅱ～Ⅵ组的损伤指数分别为对照组的79.4%、22.6%、2.6%、2.1%和30%。
2.应激性大鼠的胃酸分泌量：结果见附表。对照组胃酸分泌量为252 μmol/3 h。CHX和奥美啦唑可明显抑制胃酸的分泌。LNNA对胃酸分泌无明显影响。
3.CHX对安静大鼠胃粘膜血流和基础胃酸分泌的影响：1.0 mg/kg剂量CHX对基础胃酸无明显影响，胃粘膜血流量轻度增加(P>0.05)。2.0～3.0 mg/kg剂量时，可明显降低基础胃酸分泌，胃粘膜血流量较对照组增加约20%～25%(P<0.01)。
, 百拇医药
4.胃粘膜的组织形态学：较大剂量CHX可诱导胃粘膜淋巴细胞凋亡。3小时实验结束后，Ⅱ组胃粘膜淋巴细胞只有少数发生凋亡改变，但Ⅲ和Ⅳ组胃粘膜有大量凋亡的淋巴细胞形成。对照组未见凋亡的淋巴细胞。各组的凋亡细胞指数见附表。淋巴细胞凋亡与胃酸的抑制在一定范围内呈平行关系。
三、讨论
胃酸在应激性溃疡中的作用存在着不同意见[1～3]。有作者报道，应激后大鼠胃酸分泌较前显著增加。但更多结果表明应激后大鼠胃酸无明显变化或分泌减少。因此，有人认为[1]，胃酸在应激胃损伤中可能不起主要作用，但可加重某种因素诱发的胃粘膜损伤或对胃粘膜损伤起允许作用。
我们发现，CHX能明显抑制冷拘束所致的大鼠应激性溃疡发生。在实验第3小时，对照组有严重的出血和溃疡。大于2.0 mg/kg剂量的CHX对胃损伤的预防作用与1.0 mg/kg剂量奥美啦唑的作用相当。本研究并没有观察胃酸在应激时确切的变化，但我们观察到，大于2.0 mg/kg剂量的CHX几乎可以完全抑制应激状态下的胃酸分泌，CHX抑制胃损伤的形成与其抑制胃酸的分泌的作用是一致的。提示胃酸至少在应激性溃疡的发生中起允许作用。
, 百拇医药
我们还观察到，CHX在抑制基础胃酸分泌的同时，可增加胃粘膜血流量。一氧化氮合酶抑制剂LNNA可增加胃损伤的指数。由于3.0 mg/kg剂量的CHX完全抑制了胃酸的分泌，LNNA致胃损伤指数仍较对照组低。我们认为，胃粘膜血流量在CHX对应激性溃疡的保护作用中可能起了一定的作用，但抑制胃酸的分泌的作用可能更为关键。
研究表明，CHX可特异地诱导粘膜的淋巴细胞凋亡，对壁细胞无明显的影响。CHX还可抑制组胺和五肽胃泌素刺激引起的胃酸分泌[4]。本研究结果也表明，CHX可诱导应激性大鼠胃粘膜淋巴细胞凋亡，细胞凋亡率与胃酸的抑制是一致的，提示CHX抑制胃酸分泌的作用可能与诱导胃粘膜淋巴细胞凋亡有关。我们推测，CHX可能通过诱导粘膜淋巴细胞凋亡，抑制胃酸分泌，从而预防应激性溃疡的发生。
参考文献
1 Cho CH, Koo MWL, Garg GP, et al. Stree-induced gastric ulceration: its aetiology and clinical implications. Scand J Gastroent, 1992,27：257-262.
, 百拇医药
2 Garrick T, Buack S, Bass P. Gastric motility is a major factor in cold restraint-induced lesion formation in rats. Am J Physiol, 1986,131：G191-199.
3 Guth PH, Aures D, Paulsen G. Topical aspirin plus HCL gastric lesion in the rat, cytoprotective effect of prostaglandin, cimetidine and probanthine. Gastroenterology, 1979,76：88-93.
4 Chen XQ, Song YG, Wan TM, et al. Induction of apoptosis in mucosal lymphocytes blocks secretion of gastric acid stimulated by gastrin and histamine in rat. Regul Peptide, 1996,64：24.
5 Chen BW, Hiu WM, Cho CH, et al. Effect of sucrafate on gastric mucosal blood flow in rats. Gut, 1989,30：1544-1551.
(收稿：1997-05-29 修回：1998-02-16), http://www.100md.com
单位：510515 广州，第一军医大学南方医院消化科[陈学清、周殿元(陈学清现在北京协和医院消化科工作)]，中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院消化科(潘国宗)
关键词：
中华医学杂志980613 胃酸在应激性溃疡发病中的作用，文献报道颇不一致[1～3]。放线菌酮(Cycloheximide, CHX)是一种大蛋白分子合成抑制剂。我们发现，CHX能特异地诱导大鼠粘膜淋巴细胞凋亡，并能抑制胃泌素和组织胺刺激引起的胃酸分泌[4]。为进一步探讨胃酸在应激性溃疡发生中的作用，我们应用大鼠冷拘束应激性溃疡模型，观察了CHX对实验性应激性溃疡发生的影响。
一、材料和方法
1.试剂和仪器：放线菌酮购自德国Serva公司。奥美啦唑为阿斯特拉公司产品。硝基精氨酸(Nω-Nitro-L-Arginine，LNNA)购自美国Sigma公司。其它试剂为国产分析纯。Doppler激光血流仪(LDH-2型)为天津南开大学电子仪器厂产品。
, 百拇医药
2.应激性溃疡模型：雌性SD大鼠(220±20 g)禁食48小时(自由饮水)随机分组，每组5只。动物用乙醚麻醉后，打开腹腔，从十二指肠注入150 mmol/L NaCl 1.0 ml。结扎幽门和贲门，束缚后置于4℃冰箱。实验结束后，取出胃液，将大鼠胃沿大弯剪开，固定于4%中性多聚甲醛中，在解剖显微镜下计算损伤指数[3]。部分腺胃组织常规脱水包埋作病理组织学检查。根据需要，实验前1.0小时，从大鼠腹腔注射奥美啦唑1.0 mg/kg、LNNA 3.0 mg/kg或/和CHX。
动物分组：Ⅰ组为冷拘束+生理盐水；Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别为冷拘束+CHX(剂量分别为1.0、2.0和3.0 mg/kg)；Ⅴ组为冷拘束+奥美啦唑；Ⅵ组为冷拘束+CHX(3.0 mg/kg)+LNNA。
附表 放线菌酮对冷拘束大鼠胃损伤、胃酸分泌和
胃粘膜淋巴细胞凋亡的影响(
±s) 组别, 百拇医药
鼠数
胃损伤
指数(%)
胃酸排出
量(μmol/3h)
凋亡细胞(小
体)计数(%)
Ⅰ
5
38.0±4.2
252±30
-
Ⅱ
, 百拇医药
5
30.2±1.7
212±34
14.2±2.3
Ⅲ
5
8.6±2.2**
21± 4**
41.2±2.1
Ⅳ
5
1.0±0.6**
, 百拇医药
21± 5**
59.4±6.4
Ⅴ
5
0.8±0.8**
22± 4**
-
Ⅵ
5
11.4±2.2*
45±17**
, 百拇医药 62.0±7.6
与Ⅰ组相比，* P<0.05，** P<0.01
3.活体胃小腔模型：参考文献[5]方法制备，胃粘膜面积约0.8 cm2。稳定30分钟后开始测定胃粘膜血流和胃酸分泌量，并静脉给予不同剂量的CHX。给予CHX后30分钟内为胃粘膜血流的基础值(100%)，2小时后记录为基础值%。胃粘膜血流量每次记录时间约1.5秒。
4.胃酸分泌量的测定：应激实验结束后，收集胃液，离心后用0.01 mol/L NaOH反向滴定测定胃酸，酚红为指示剂。
5.病理组织学检查：4 μm石蜡切片常规脱蜡水化，HE染色，光镜检查。淋巴细胞凋亡判断参考文献方法并做凋亡细胞(小体)计数[4]，每张切片计数50个淋巴细胞。
, 百拇医药
6.统计学处理：实验结果数据作多因素方差分析。
二、结果
1.CHX对应激性溃疡发生的保护作用：3小时应激实验结束后，Ⅲ、Ⅳ组和奥美啦唑组胃粘膜大体正常，而对照组可见胃粘膜上附有大量血痂和粘膜溃疡。Ⅱ和Ⅵ组胃粘膜损伤较对照组轻。各组的损伤指数见附表。Ⅱ～Ⅵ组的损伤指数分别为对照组的79.4%、22.6%、2.6%、2.1%和30%。
2.应激性大鼠的胃酸分泌量：结果见附表。对照组胃酸分泌量为252 μmol/3 h。CHX和奥美啦唑可明显抑制胃酸的分泌。LNNA对胃酸分泌无明显影响。
3.CHX对安静大鼠胃粘膜血流和基础胃酸分泌的影响：1.0 mg/kg剂量CHX对基础胃酸无明显影响，胃粘膜血流量轻度增加(P>0.05)。2.0～3.0 mg/kg剂量时，可明显降低基础胃酸分泌，胃粘膜血流量较对照组增加约20%～25%(P<0.01)。
, 百拇医药
4.胃粘膜的组织形态学：较大剂量CHX可诱导胃粘膜淋巴细胞凋亡。3小时实验结束后，Ⅱ组胃粘膜淋巴细胞只有少数发生凋亡改变，但Ⅲ和Ⅳ组胃粘膜有大量凋亡的淋巴细胞形成。对照组未见凋亡的淋巴细胞。各组的凋亡细胞指数见附表。淋巴细胞凋亡与胃酸的抑制在一定范围内呈平行关系。
三、讨论
胃酸在应激性溃疡中的作用存在着不同意见[1～3]。有作者报道，应激后大鼠胃酸分泌较前显著增加。但更多结果表明应激后大鼠胃酸无明显变化或分泌减少。因此，有人认为[1]，胃酸在应激胃损伤中可能不起主要作用，但可加重某种因素诱发的胃粘膜损伤或对胃粘膜损伤起允许作用。
我们发现，CHX能明显抑制冷拘束所致的大鼠应激性溃疡发生。在实验第3小时，对照组有严重的出血和溃疡。大于2.0 mg/kg剂量的CHX对胃损伤的预防作用与1.0 mg/kg剂量奥美啦唑的作用相当。本研究并没有观察胃酸在应激时确切的变化，但我们观察到，大于2.0 mg/kg剂量的CHX几乎可以完全抑制应激状态下的胃酸分泌，CHX抑制胃损伤的形成与其抑制胃酸的分泌的作用是一致的。提示胃酸至少在应激性溃疡的发生中起允许作用。
, 百拇医药
我们还观察到，CHX在抑制基础胃酸分泌的同时，可增加胃粘膜血流量。一氧化氮合酶抑制剂LNNA可增加胃损伤的指数。由于3.0 mg/kg剂量的CHX完全抑制了胃酸的分泌，LNNA致胃损伤指数仍较对照组低。我们认为，胃粘膜血流量在CHX对应激性溃疡的保护作用中可能起了一定的作用，但抑制胃酸的分泌的作用可能更为关键。
研究表明，CHX可特异地诱导粘膜的淋巴细胞凋亡，对壁细胞无明显的影响。CHX还可抑制组胺和五肽胃泌素刺激引起的胃酸分泌[4]。本研究结果也表明，CHX可诱导应激性大鼠胃粘膜淋巴细胞凋亡，细胞凋亡率与胃酸的抑制是一致的，提示CHX抑制胃酸分泌的作用可能与诱导胃粘膜淋巴细胞凋亡有关。我们推测，CHX可能通过诱导粘膜淋巴细胞凋亡，抑制胃酸分泌，从而预防应激性溃疡的发生。
参考文献
1 Cho CH, Koo MWL, Garg GP, et al. Stree-induced gastric ulceration: its aetiology and clinical implications. Scand J Gastroent, 1992,27：257-262.
, 百拇医药
2 Garrick T, Buack S, Bass P. Gastric motility is a major factor in cold restraint-induced lesion formation in rats. Am J Physiol, 1986,131：G191-199.
3 Guth PH, Aures D, Paulsen G. Topical aspirin plus HCL gastric lesion in the rat, cytoprotective effect of prostaglandin, cimetidine and probanthine. Gastroenterology, 1979,76：88-93.
4 Chen XQ, Song YG, Wan TM, et al. Induction of apoptosis in mucosal lymphocytes blocks secretion of gastric acid stimulated by gastrin and histamine in rat. Regul Peptide, 1996,64：24.
5 Chen BW, Hiu WM, Cho CH, et al. Effect of sucrafate on gastric mucosal blood flow in rats. Gut, 1989,30：1544-1551.
(收稿：1997-05-29 修回：1998-02-16), http://www.100md.com