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编号:10232608
中药对烧伤患者免疫功能及急性期蛋白的影响
http://www.100md.com 《中华外科杂志》 1998年第6期
     作者:罗中华 黄文华 王甲汉 余斌 崔义泽 廖震 黎鳌

    单位:400038 重庆,第三军医大学西南医院烧伤研究所(罗中华、黄文华、王甲汉、余斌、崔义泽、黎鳌);重庆市第一人民医院(廖震)

    关键词:烧伤;中草药;免疫,细胞;急相蛋白质类

    中华外科杂志/980617 【摘要】 目的 观察中药对伤后细胞免疫功能和4种急性期反应蛋白(ARP)的作用。 方法 在过去动物实验的基础上,将中药配伍后用于烧伤患者。 结果 能使受损严重的患者淋巴细胞增殖反应及白细胞介素2产生能力,得到显著的改善。对伤后患者血中变化的触珠蛋白、前白蛋白、α1-酸性糖蛋白和转铁蛋白均有不同程度的影响。 结论 中药合用对烧伤患者失衡的免疫防御系统功能和ARP具有调理功效。

    The effects of Chinese medicine herb mixture on cell-mediated immune functions and four kinds of acute-phase reaction proteins in burn patients Luo Zhonghua,Huang Wenhua, Wang Jiahan,et al.Burn Reseach Institute,Third Military Medical University,Chongqing 400038.
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    【Abstract】 Objective To search for immunomodulators to improve postburn immune function disorder.Method We studied the Chinese medicinal herbs. On the basis of previous data,we prepared a kind of Chinese medicinal herbal mixture and studied its effects in vivo and in vitro. Result The mixture could restore the cell-mediated immune response such as the production of interleukin 2 and the T cell proliferative ability, and could also adjust the levels of serum acute-phase reaction proteins, i.e, haptoglobin, prealbumin, transferrin and α1-acid glycoprotein. Conclusion The Chinese herbal mixture showed immure regulatory effects on body defence imbalance and also on acute phase reaction proteins in burn patients.
, 百拇医药
    【Key words】 Burns Drugs,Chinese herbal Immunity,cellular Acute-phase proteins

    烧伤后免疫功能紊乱是感染和多器官功能受损,甚至是导致死亡的重要原因之一。伤后免疫紊乱,多功能失调的同时,某些急性期反应蛋白(acutephase reactions protein,ARP)也发生明显变化。ARP的变化与机体组织损伤、感染、免疫反应和炎症过程的诱导密切相关。我们在动物实验基础上[1~3],观察中药三七(panax pseudo-ginseng wall)、虎杖(polygonum cuspidatun)和金银花(lonicera japonica thunb)配合应用对烧伤患者受损细胞免疫功能的调理作用,及对4种急性期反应蛋白变化的影响。现将结果报告如下。

    临床资料

    一、病例及分组
, 百拇医药
    烧伤患者54例,年龄30.8±8.5岁(20~49岁)。烧伤总面积:48.8%±16.7%(30%~70%),Ⅲ度烧伤面积为28.4%±14.2%(15%~49%)。将其分为:服药组27例,烧伤总面积48.9%±16.2%,Ⅲ度烧伤面积28.8%±14.8%;不服药对照组27例,烧伤总面积48.7%±18.8%,Ⅲ度烧伤面积28.6±16.3%,两组伤情、年龄和临床其它治疗用药尽量配对。将27例对照组与27例治疗组及相互配对间总面积和Ⅲ度烧伤面积行单因素方差分析比较,差异无显著意义(P>0.05)。另设正常人组20例,年龄29.8±14.4岁(20~50岁)。

    二、药物及给药方法

    1.中药合剂制备:取三七、金银花、虎杖分别用粉碎机打成细粉。加双蒸水浸泡后用组织匀浆器充分匀浆。以生物截流法提取小分子混合成分,100 g湿生药制成100 ml药液。该方法提取的药液用紫外分光光度计进行全波长扫描。结果三七液在195 nm、215 nm、275 nm、320 nm波长处各有一个吸收峰,金银花在195 nm、215 nm、238 nm、295 nm、320 nm处有吸收峰,虎杖在210 nm、260 nm、285 nm、317 nm处有吸收峰,说明提取液中有多种成分。分别取三种药液,根据动物实验研究结果,以40%三七、40%金银花、20%虎杖的比例进行配伍,加适当调味剂后备用。此合剂经动物毒理和安全实验后,用于临床患者。
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    2.给药方法:在烧伤后48小时开始给药,口服10 ml/次,3次/日,连续服药20天(超过48小时入院者不列入本实验)。

    三、观察指标

    以下观察指标均采取临床用药临床采取标本送实验室检测的双盲法进行。分别在服药前(0天)、服药后5天、10天、15天、20天采取标本。

    1.淋巴细胞(LT)增殖反应:取患者抗凝血,以淋巴细胞分离液分离淋巴细胞,用RPMI1640培养液洗3次后,以培养液调成5×106个/ml的细胞悬液,加于96孔细胞培养板,0.2 ml/孔,加入终浓度5 μg/ml植物血凝素(PHA)。对照孔同样方法不加PHA,置5%CO2 37℃培养48小时后,测定细胞的4-甲基伞形酮-乙酰氨基葡萄糖醛酸酶(NAG)活性(通过测定细胞NAG酶活性的方法反应细胞的增殖情况)。每个标本作3个复孔,计算出增殖指数后,取均值表示结果。
, 百拇医药
    2.白细胞介素2(IL-2)产生能力:取患者抗凝血,分离LT,用PRMI1640培养液调成5×106个/ml细胞悬液,加入终浓度5 μl/mlPHA,置5%CO2,37℃孵育48小时,取出离心,2000 r/min,去沉淀物,取上清备用。另取生长良好的IL-2依赖细胞株,CTLL细胞调成5×106个/ml细胞悬液,加入96孔细胞培养板0.1 ml/孔。再于每孔加入用培养液作1:2稀释的上述LT培养上清0.1 ml。对照孔同样方法以1640液代替培养上清。置37℃ CO2细胞培养箱24小时,测定CTLL细胞NAG酶。每个标本作三复孔。取均值表示。

    3.急性期蛋白的检测:分别采取患者血,分离血清。送本院检验科用beckman蛋白测定系统(beckman array protein system)进行检测。结果取均值表示。

    四、数据处理
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    各数据均以正常组平均值为100%,计算得出相应百分率变化,并行单因素方差分析比较对照组与服药治疗组间的差异显著性。

    五、治疗结果

    1.LT增殖反应:烧伤患者LT增殖反应达及正常人的42.6%±2.2%。经三种配伍中药治疗到10天,可使患者受损的LT增殖反应能力提高到正常人的水平,药物用至20天效果更佳。不用药对照组到15天也未见其反应有明显的改善。至20天时的反应与0天(未用药)比较从数据上看有所增高,但差异没有显著性意义。而与用药组比较差异有显著性意义。结果见表1。

    2.IL-2产生能力:患者IL-2产生能力显著降低,只有正常人的59.3%±8.8%,用药组从10天开始能显著增强患者的IL-2产生能力。对照组至20天与0天比较也有明显增高。与用药治疗组比较差异仍有显著意义(P<0.05),结果列于表2。

    3.3种中药配伍对烧伤患者4种血清ARP的调理作用:患者血清触珠蛋白(haptoglobin,HP)至5天已显著高于正常人的水平,并且不用药组有逐步升高的趋势,至20天达高峰。用药组在15天与不用药对照组比较有显著的降低,用药至20天可使升高的HP回至接近正常人水平。不用药对照组血清中前白蛋白(prealbumn,PAL)显著低于正常水平,服药组至20天比对照组有显著的升高,达95%以上。伤后患者血清α1-酸性糖蛋白(α1-acidglycoprotein,α1-
, 百拇医药
    表1 3种中药配伍对烧伤患者LT增殖反应的影响(±s)(n=27) 分组

    0天

    5天

    10天

    15天

    20天

    用药组

    42.6±2.2

    54.9±3.1

    101.9±16.2*

    103.7±9.8*
, 百拇医药
    109.6±5.7*

    对照组

    42.6±2.2

    42.9±2.7

    33.6±1.5

    33.1±1.2

    51.6±1.8

    注:表中数据是以20例正常人为100%得出的相应百分率变化。*与对照组比较P<0.05,以下相同 表2 中药配伍对烧伤患者IL-2产生能力的调理(±s)(n=27) 分组

    0天
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    5天

    10天

    15天

    20天

    用药组

    59.3±8.8

    55.7±5.2

    100.9±10.1*

    106.0±9.3*

    118.6±12.2*

    对照组

    59.3±8.8
, 百拇医药
    56.8±4.7

    69.1±8.2

    72.0±6.4

    75.4±9.2

    AG)显著高于正常,48小时内是正常人的147.4%±20.3%,连续服药10天未见明显改善。并且,对照组随时间的延长,更加升高,至20天仍保持较高水平。治疗组服药到15天与对照组比较,有显著降低,到20天恢复到正常水平。患者血中转铁蛋白(transferrin,Tf)显著低于正常,只及正常人的55.5%±4.8%,对照组随时间延长降低更甚。服药至15天与对照组比较有显著的改善,继续服药至20天,效果更好。但仍未能恢复到正常人的水平。结果见表3。

    表3 3种中药配伍对烧伤患者血清中4种ARP的影响(n=27)(±s) ARP
, 百拇医药
    分组

    0天

    5天

    10天

    15天

    20天

    HP

    用药组

    112.3±30.1

    192.1±44.0

    285.7±29.1

    154.2±15.2

, http://www.100md.com     106.7±7.8

    对照组

    112.3±30.1

    189.3±38.4

    296.6±28.2

    16.0±29.3

    369.9±35.2

    PAL

    用药组

    46.1±4.2

    39.4±4.3

    39.8±5.2*
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    67.9±4.4*

    95.9±10.2*

    对照组

    46.1±4.2

    41.5±3.1

    38.6±7.1

    49.8±5.0

    53.6±5.1

    α1-AG

    用药组

    147.4±20.3

    228.1±20.1
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    260.4±23.8

    156.2±15.4*

    99.5±7.6*

    对照组

    147.4±20.3

    219.9±16.4

    265.3±40.2

    224.5±20.1

    213.2±23.1

    Tf

    用药组
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    55.5±4.8

    48.2±4.1

    41.8±3.2

    64.1±4.6*

    84.5±4.4*

    对照组

    55.5±4.8

    47.9±3.3

    46.3±2.8

    45.2±6.7

    42.1±2.5

, 百拇医药     注:表中数据是以正常人组为100%计算得出的相应百分率变化。与对照组比较P<0.05 讨论

    烧伤后机体多功能系统受损,导致机体内环境紊乱,免疫功能和代谢活动异常,某些血清蛋白异常变化。若对其进行调理,将有利于机体抗感染[4],提高治愈率及预后。本研究结果显示,烧伤后患者细胞免疫功能受损严重。不用中药对照组患者经过临床挽救治疗的处理至20天也未见其细胞免疫功能有明显的恢复,而LT增殖反应仍只为正常人的51.6%±1.8%。经3种中药治疗组到10天可观察到受损细胞免疫功能有显著的改善(P<0.05),治疗至20天作用更佳。提示3种中药合用对烧伤患者受损的细胞免疫功能具有调理作用。烧伤患者血中4种ARP与正常人比较有明显的变化,其中HP在烧伤后48小时内稍高于正常,其后逐渐升高,至20天处于本实验最高水平。有关报道[5~7]也与本实验相似。PAL和Tf伤后显著低于正常人水平。α1-AG显著高于正常。经用中药治疗后,对患者血中4种ARP的变化都有不同程度的改善,用药至15天时与对照组比较;经过治疗的组已有显著的改善作用,继续用药至20天,HP、PAL和α1-AG已恢复到接近正常人的水平,对Tf的作用虽不如前三者好,但也有使其升到正常人的84.5%±4.4%水平。说明3种中药合用不仅对患者的细胞介导免疫功能有调理作用。而且对患者组织损伤后的修复、抗感染,减轻炎症过程、改善营养代谢、缓减贫血等均有较好的效果。
, 百拇医药
    T淋巴细胞介导的免疫功能,在免疫防御系统中起着很重要的作用,其产生的IL-2更具有广泛的免疫调控效应,是免疫网络中最关键的淋巴因子之一。因此调理伤后机体细胞免疫功能对防治烧伤感染和多器官功能受损具有很重要的意义[4,8]

    ARP由肝脏合成,其异常变化与严重创伤、烧伤、细菌感染等疾病有关。Fisher认为其变化可作为对某些疾病的诊断,病程观察和判断预后的指标,也可作为临床治疗效果的监测手段[5]。HP是一种多功能的蛋白质,正常人血中极低。它可与血红蛋白结合后形成复合物,并被机体单核吞噬细胞系统降解。适量情况下对机体有保护作用,并具有过氧化物酶样活性,拮抗损伤组织和白细胞释放的组织蛋白酶B对组织细胞产生的溶解破坏作用,以及自血浆中清除游离铁而作为一种天然抑制菌剂[9]。过度升高则对机体不利,其中之一可抑制机体免疫系统功能,可抑制有丝分裂原刺激的淋巴细胞母细胞化反应,降低B淋巴细胞增殖反应。抑制混合淋巴细胞培养反应和NK细胞杀伤功能。抑制IL-2产生和IL-2R表达[10],以及抑制单核细胞趋化和杀菌功能等。本实验显示,在烧伤后48小时内测得HP量稍高于正常人组(0天)。但随时间延长至5天时已显著高于正常组。说明患者机体内环境紊乱导致的损害在加重。其中HP升高也加重了细胞免疫功能的抑制。该3种中药合用可降低过度升高的HP量,从而减轻其对细胞免疫功能的进一步损伤,提示该3种中药具调理内环境紊乱,保护机体,重建免疫系统功能的作用。
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    PAL和Tf分别是甲状腺素的载体蛋白和血中的铁转运蛋白。Tf可结合血浆游离铁并将其转运至生红细胞骨髓和网状内皮系统如肝、脾等有助于红细胞生成。PAL与肝脏功能及蛋白质代谢紊乱密切相关。烧伤后机体多功能发生变化,肝脏功能也受不同程度损害,肝脏合成ARP也发生变化。本研究显示Tf和PAL均较正常低,从而可使对铁离子结合缺乏和对甲状腺素运载能力降低,导致因营养不良和代谢活动功能降低,贫血等引起的免疫防御系统功能紊乱。也使机体对感染的敏感性增加。使患者易于发生感染。α1-AG主要参与蛋白质及细胞内酶的代谢。有报道指出,其可作为判断炎症和组织坏死的指标[5]。它轻度升高时对机体组织细胞及脏器都具保护作用。当过度降低或过度升高,将导致细胞和蛋白质代谢低下或过盛,影响机体内环境,甚至影响机体的防御系统功能,机体免疫防御系统功能受损又加重了组织细胞和脏器功能的损害。本实验的中药对烧伤后变化的PAL、Tf和α1-AG的调理,也许反映了其对机体受损的组织细胞功能,脏器功能的保护和对紊乱的代谢活动功能,营养不良及贫血等的调理[11]
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    我们认为适当的应用中草药于烧伤患者进行治疗,对机体受损的细胞介导免疫功能和伤后紊乱的内环境的调理或恢复正常运行都具有重要意义。但是,其作用是先通过调理受损免疫功能,还是先通过恢复受损组织细胞或损伤的脏器功能而达到改善异常ARP的,都有待作进一步的研究。不过机体是一个整体,当免疫功能受损时会导致抵抗力降低,使脏器或组织细胞发生感染和损伤,ARP发生变化。当脏器或组织细胞发生损害和感染,也会致免疫系统功能的紊乱和ARP的异常。所以,只要某种药物对其具有调理作用,也许提示对机体是有利的。实验中我们还发现对总面积70%,Ⅲ度烧伤49%的治疗效果,从数据上看不如总面积30%,Ⅲ度15%的好,但差异未见有显著性意义。故可认为中药合用对重度烧伤后受损的免疫功能及异常ARP的调理也有较好的疗效。

    参考文献

    1罗中华,黄文华,胡祖祥,等.中草药对改善烫伤小鼠受损免疫功能的作用.中华整形烧伤外科杂志,1993, 9:56-58.
, 百拇医药
    2罗中华,黄文华,刘敬,等.三七等四种中药对烫伤小鼠巨噬细胞功能的作用.中华医学杂志,1994, 74:634-635.

    3罗中华,黄文华,刘敬,等.四种中药对烫伤小鼠受损淋巴细胞功能的改善.中华外科杂志,1995, 33:571-573.

    4Horgan PG, Mannick JA, Dubravec DB, et al.Effect of low does recombinant interleukin 2 plus indomethaci on mortality after sepsis in a murine burn model.Br J Surg,1990,77:401-406.

    5Fisher CL. Acute-phase protein in serucm protein abnormalities.New York: Alan, 1982.331-350.
, 百拇医药
    6吴军正,黄文华,黎鳌,等.烧伤患者血清补体成份和载体蛋白的变化及临床意义.中华创伤杂志,1988,4:2-5.

    7解伟光,黎鳌,汪仕良,等.某些血清蛋白与烧伤后能量代谢的关系.中华整形烧伤外科杂志,1992,8:108-112.

    8Teodorczky-Injeyan JA, Sparkes BG, Mills GB,et al.Impaired expression of interleukin 2 receptor in the immunosuppressed burned patient:reversa by exogenous IL-2.J Trauma,1987,27:180-185.

    9Mestan J,Digel W,Mittnachts K,et al.Antiviral effects of recombinant tumour necrosis fator in vitro.Nature,1986,323:816-819.

    10王凤君,黄文华,黎鳌.烧伤后血清触珠蛋白对T淋巴细胞功能的影响.中国免疫学杂志, 1994, 10:173-176.

    11第三军医大学烧伤协作组.烧伤治疗学.北京:人民卫生出版社,1977.677-680., 百拇医药