肝癌单抗研究应用现状与展望
作者：陈志南 边惠洁 蒋建利
单位：第四军医大学病理教研室 陕西省西安市 710032
关键词：肝肿瘤/治疗；抗体，单克隆/治疗应用
华人消化杂志980601.htm Subject headings liver neoplasms/therapy; antibodies, monoclonal/therapeutic use
中国图书资料分类号 R735.7
肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，每年全世界死于肝癌的患者估计达125万[1]，而我国是肝癌高发区，因此研究肝癌的诊断和治疗具有重要的意义. 自1975年Kohler和Milstein创建B淋巴细胞杂交瘤技术以来，各种单克隆抗体(McAb)相继出现，它们在疾病诊治的基础研究和临床应用方面发挥了积极的作用，其中肝癌单抗的研制更是为这种难治性肿瘤带来了新的希望.
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1 肝癌单抗制备研究
近二十年，肝癌单抗研究文献不足百篇，其中大多为甲胎蛋白，铁蛋白单抗，肝癌单抗研究很少，在肝癌单抗的制备方面，多数采用传统的方法，即以可溶性物质或肝癌培养细胞为免疫原，由于肿瘤抗原的变异或部分丢失，因而该方法难以获得高亲和性、高特异性的单抗. 用肿瘤新鲜组织制备细胞悬液免疫动物制备单抗已有成功报道，该法虽然筛选麻烦，但能较好地保持抗原性，不失为制备单抗的好方法，我们用该方法融合获得特异性肝癌单抗7株，其中特异性较好的HAb18肝癌免疫组化染色阳性率为75%[2]，已通过了中国药品生物制品检定所的《人用鼠源性单克隆抗体制备及质量控制要点》的要求. 此外，中科院上海细胞所谢弘et al[3]报道了一株鼠抗人原发性肝癌(PHC)细胞膜抗体Hepama-Ⅰ，研究证明对PHC细胞有较高的亲和力. 这些均为我国肝癌单抗的深入研究增添了信心.
2 肝癌单抗应用研究
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2.1 肝癌单抗在肝癌相关抗原研究中的应用 单克隆抗体的发展提供了一个发现新肿瘤相关抗原或肿瘤抗原新位点的有效手段，并用以检测这些抗原，临床用于血清学检查，具有一定临床意义. 除AFP、铁蛋白等相关抗原之外，尚未发现新的肝癌特异性的标志物. 我们[2]用HAb18 IgG交联CNBr-Sepharose 4B，亲和层析，提取肝癌膜蛋白抗原P61，其肝癌阳性检出率达70.6%，因此HAb18系统对肝癌的研究和应用有重要的意义和应用前景，是继AFP之后最新报道的另一标志物.
2.2 肝癌单抗导向研究 以单抗为载体的导向化疗，放疗及放免显象诊断，近年取得了实质性进展. ①化学药物—单抗交联物：国内外用于交联的抗癌药物有数十种，主要有MTX，MMC，DM，AM等，依肿瘤类别选择. 谢弘et al[3]用Hepama-Ⅰ IgG-BSA-MTX对肝癌细胞的IC50值为8×10-8M，而对Hela细胞的IC50值只有3×10-6M；②细胞毒素—单抗交联物：用于制备细胞毒素的有蓖麻毒蛋白，天花毒蛋白，白喉毒素，植物毒蛋白，A链类似的致核糖体失活蛋白；③同位素—单抗交联物：由于肿瘤抗原的不均一性，抗体不能到达肝癌细胞，因此用特异性放疗，效果比化疗好.
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抗体导向化疗可改变药物在体内自然分布，造成药物在瘤区浓集，从而发挥其特异性杀伤作用. 张尚权et al[4]研究了抗肝癌单抗Hepama-Ⅰ丝裂霉素结合物，经荷瘤裸鼠动物实验表明，该导向化疗药物较单纯的化疗有明显的亲和性，是其应用的前提和关键.
用放射性核素标记单抗制备而成的放免显象剂和治疗剂已成为肿瘤早期诊断，综合治疗及术后清扫的有力手段之一. 截止目前，美国约有近十种显象剂和治疗剂通过FDA，进入Ⅰ，Ⅱ期临床验证阶段，但尚无一种针对肝癌的制剂，国内这方面的研究已初露端倪. 施乐华et al[5]报道了131I-Hepama-Ⅰ经股动脉介入放免定位及治疗30例失去手术指征的原发性肝癌患者的研究，显象率为14/18，最佳显象时间在注射后96h，AFP下降率为75.0%，肿瘤部分缩小率66.6%，与对照组比较，生存时间明显延长，认为核素碘标记的Hepama-Ⅰ肝癌单抗可作为治疗晚期肝癌的综合疗法之一. 肝癌单抗HAb18也得到了广泛的应用研究，其中131I-HAb18放免显象剂和导向治疗剂均已通过国家一类新药评审，获得临床批号进入Ⅰ，Ⅱ期临床，成为我国首批通过的核素—抗体放射药品. 临床应用显示，肝癌患者的体内双核素减影阳性显象率达90.9%(40/44)，能检出的最小肝癌瘤块直径为0.5cm. 导向治疗肿瘤完全缓解率3.7%(1/27)，部分缓解率48.1%(13/27)，稳定14.3%(4/27)，无效33.3%(9/27)，2a以上生存率46.2%(6/13)，对患者血液学功能，肾功能及甲状腺功能无明显影响.
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近年，集化疗和内照射治疗于一体的“双弹头”免疫导向治疗药物已有报道[6]，隋延方et al[7,8]报道以肝癌单抗HAb18为载体，以131I，ADM为弹头，制备出肝癌双弹头组合单抗免疫导向结合物131I-HAb18-ADM，结果表明，双弹头集中了化疗与放疗的优点，二者协同提高了肝癌导向治疗的效果，该药物提高了对肿瘤细胞的抑制和杀伤作用.
应该看到，国内肝癌单抗的研究虽取得了一定的成绩，但只是开端，仍还有许多内容待深入研究，如用基因工程技术改造肝癌单抗使其人源化，用定位突变技术提高抗原—抗体结合亲和性等，这些分子工程技术应深入到肝癌单抗的研究中. 目前该领域除着眼于基础研究外，也应加快产业化进程.
陈志南，男，1952-06-02生，江苏宜兴人，汉族. 1979年西安第四军医大学医疗学系毕业，1989年第四军医大学病理专业硕士研究生毕业，教授，曾为美国南加州大学、康乃尔大学访问教授，主要从事肿瘤免疫病理，肝癌导向药物等研究，为国家863计划，1035工程项目负责人，发表论文104篇，曾获全国发明展览金奖及军队科技成果一等奖.
, 百拇医药
通讯作者 陈志南，710032，第四军医大学基础部病理教研室，陕西省西安市长乐西路17号.
Correspondence to: Department of Pathology, the Fourth Military Medical University, 17 Changle Xilu, Xi＇an 710032, Shaanxi Province, China
Tel. +86*29*3293906
收稿日期 1998-04-01
3 参考文献
1 Kanai F, Lan KH, Shiratori Y, Tanaka T, Ohashi M, Okudaira T et al. In vivo gene therapy for α-Fetoprotein-producing hepatocellular carcinoma by adenovirus-mediated transfer of cytosine deaminase gene. Cancer Res, 1997;57(1):461-464
, 百拇医药
2 陈志南，刘彦仿，杨继震. 抗人肝细胞单克隆抗体的产生及其相应抗原P60的免疫组化定位研究. 单克隆抗体通讯，1989；27(2)：33-36
3 谢弘，杨正洪，陈瑞铭，姚鑫，王宝美，郭寿延 et al. 分泌人体肝癌单克隆抗体的两个小鼠杂交瘤株及其抗体的专一性分析(简报). 实验生物学报，1985；18(2)：263-265
4 张尚权，王雄彪，潘惠忠，谈立松. 抗肝癌单克隆抗体Hepama Ⅰ丝裂霉素C结合物制备及其细胞毒特性. 第二军医大学学报，1997；18(1)：83-84
5 施乐华，吴孟超，陈汉，田建民，潘文舟，谢弘 et al. 抗人肝癌单克隆抗体的人体放射免疫定位及治疗. 中华肿瘤杂志，1997；19(2)：146-149
6 李志革，吴英德，周德南，甘友全，黄秉琰，贺海平 et al. 131I-抗AFP McAb“双弹头”免疫导向治疗原发性肝癌临床观察. 中华肿瘤杂志，1996；18(5)：368-371
7 隋延方，刘利，陈志南，刘彦仿，王文亮. 肝癌“双弹头”免疫导向药物的实验研究. 癌症，1994；13(6)：487-489
8 隋延方，何志龙，刘彦仿，陈志南，王文亮. 免疫导向治疗肝癌的实验研究. 中华医学杂志，1992；72(7)：397-400, 百拇医药
单位：第四军医大学病理教研室 陕西省西安市 710032
关键词：肝肿瘤/治疗；抗体，单克隆/治疗应用
华人消化杂志980601.htm Subject headings liver neoplasms/therapy; antibodies, monoclonal/therapeutic use
中国图书资料分类号 R735.7
肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，每年全世界死于肝癌的患者估计达125万[1]，而我国是肝癌高发区，因此研究肝癌的诊断和治疗具有重要的意义. 自1975年Kohler和Milstein创建B淋巴细胞杂交瘤技术以来，各种单克隆抗体(McAb)相继出现，它们在疾病诊治的基础研究和临床应用方面发挥了积极的作用，其中肝癌单抗的研制更是为这种难治性肿瘤带来了新的希望.
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1 肝癌单抗制备研究
近二十年，肝癌单抗研究文献不足百篇，其中大多为甲胎蛋白，铁蛋白单抗，肝癌单抗研究很少，在肝癌单抗的制备方面，多数采用传统的方法，即以可溶性物质或肝癌培养细胞为免疫原，由于肿瘤抗原的变异或部分丢失，因而该方法难以获得高亲和性、高特异性的单抗. 用肿瘤新鲜组织制备细胞悬液免疫动物制备单抗已有成功报道，该法虽然筛选麻烦，但能较好地保持抗原性，不失为制备单抗的好方法，我们用该方法融合获得特异性肝癌单抗7株，其中特异性较好的HAb18肝癌免疫组化染色阳性率为75%[2]，已通过了中国药品生物制品检定所的《人用鼠源性单克隆抗体制备及质量控制要点》的要求. 此外，中科院上海细胞所谢弘et al[3]报道了一株鼠抗人原发性肝癌(PHC)细胞膜抗体Hepama-Ⅰ，研究证明对PHC细胞有较高的亲和力. 这些均为我国肝癌单抗的深入研究增添了信心.
2 肝癌单抗应用研究
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2.1 肝癌单抗在肝癌相关抗原研究中的应用 单克隆抗体的发展提供了一个发现新肿瘤相关抗原或肿瘤抗原新位点的有效手段，并用以检测这些抗原，临床用于血清学检查，具有一定临床意义. 除AFP、铁蛋白等相关抗原之外，尚未发现新的肝癌特异性的标志物. 我们[2]用HAb18 IgG交联CNBr-Sepharose 4B，亲和层析，提取肝癌膜蛋白抗原P61，其肝癌阳性检出率达70.6%，因此HAb18系统对肝癌的研究和应用有重要的意义和应用前景，是继AFP之后最新报道的另一标志物.
2.2 肝癌单抗导向研究 以单抗为载体的导向化疗，放疗及放免显象诊断，近年取得了实质性进展. ①化学药物—单抗交联物：国内外用于交联的抗癌药物有数十种，主要有MTX，MMC，DM，AM等，依肿瘤类别选择. 谢弘et al[3]用Hepama-Ⅰ IgG-BSA-MTX对肝癌细胞的IC50值为8×10-8M，而对Hela细胞的IC50值只有3×10-6M；②细胞毒素—单抗交联物：用于制备细胞毒素的有蓖麻毒蛋白，天花毒蛋白，白喉毒素，植物毒蛋白，A链类似的致核糖体失活蛋白；③同位素—单抗交联物：由于肿瘤抗原的不均一性，抗体不能到达肝癌细胞，因此用特异性放疗，效果比化疗好.
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抗体导向化疗可改变药物在体内自然分布，造成药物在瘤区浓集，从而发挥其特异性杀伤作用. 张尚权et al[4]研究了抗肝癌单抗Hepama-Ⅰ丝裂霉素结合物，经荷瘤裸鼠动物实验表明，该导向化疗药物较单纯的化疗有明显的亲和性，是其应用的前提和关键.
用放射性核素标记单抗制备而成的放免显象剂和治疗剂已成为肿瘤早期诊断，综合治疗及术后清扫的有力手段之一. 截止目前，美国约有近十种显象剂和治疗剂通过FDA，进入Ⅰ，Ⅱ期临床验证阶段，但尚无一种针对肝癌的制剂，国内这方面的研究已初露端倪. 施乐华et al[5]报道了131I-Hepama-Ⅰ经股动脉介入放免定位及治疗30例失去手术指征的原发性肝癌患者的研究，显象率为14/18，最佳显象时间在注射后96h，AFP下降率为75.0%，肿瘤部分缩小率66.6%，与对照组比较，生存时间明显延长，认为核素碘标记的Hepama-Ⅰ肝癌单抗可作为治疗晚期肝癌的综合疗法之一. 肝癌单抗HAb18也得到了广泛的应用研究，其中131I-HAb18放免显象剂和导向治疗剂均已通过国家一类新药评审，获得临床批号进入Ⅰ，Ⅱ期临床，成为我国首批通过的核素—抗体放射药品. 临床应用显示，肝癌患者的体内双核素减影阳性显象率达90.9%(40/44)，能检出的最小肝癌瘤块直径为0.5cm. 导向治疗肿瘤完全缓解率3.7%(1/27)，部分缓解率48.1%(13/27)，稳定14.3%(4/27)，无效33.3%(9/27)，2a以上生存率46.2%(6/13)，对患者血液学功能，肾功能及甲状腺功能无明显影响.
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近年，集化疗和内照射治疗于一体的“双弹头”免疫导向治疗药物已有报道[6]，隋延方et al[7,8]报道以肝癌单抗HAb18为载体，以131I，ADM为弹头，制备出肝癌双弹头组合单抗免疫导向结合物131I-HAb18-ADM，结果表明，双弹头集中了化疗与放疗的优点，二者协同提高了肝癌导向治疗的效果，该药物提高了对肿瘤细胞的抑制和杀伤作用.
应该看到，国内肝癌单抗的研究虽取得了一定的成绩，但只是开端，仍还有许多内容待深入研究，如用基因工程技术改造肝癌单抗使其人源化，用定位突变技术提高抗原—抗体结合亲和性等，这些分子工程技术应深入到肝癌单抗的研究中. 目前该领域除着眼于基础研究外，也应加快产业化进程.
陈志南，男，1952-06-02生，江苏宜兴人，汉族. 1979年西安第四军医大学医疗学系毕业，1989年第四军医大学病理专业硕士研究生毕业，教授，曾为美国南加州大学、康乃尔大学访问教授，主要从事肿瘤免疫病理，肝癌导向药物等研究，为国家863计划，1035工程项目负责人，发表论文104篇，曾获全国发明展览金奖及军队科技成果一等奖.
, 百拇医药
通讯作者 陈志南，710032，第四军医大学基础部病理教研室，陕西省西安市长乐西路17号.
Correspondence to: Department of Pathology, the Fourth Military Medical University, 17 Changle Xilu, Xi＇an 710032, Shaanxi Province, China
Tel. +86*29*3293906
收稿日期 1998-04-01
3 参考文献
1 Kanai F, Lan KH, Shiratori Y, Tanaka T, Ohashi M, Okudaira T et al. In vivo gene therapy for α-Fetoprotein-producing hepatocellular carcinoma by adenovirus-mediated transfer of cytosine deaminase gene. Cancer Res, 1997;57(1):461-464
, 百拇医药
2 陈志南，刘彦仿，杨继震. 抗人肝细胞单克隆抗体的产生及其相应抗原P60的免疫组化定位研究. 单克隆抗体通讯，1989；27(2)：33-36
3 谢弘，杨正洪，陈瑞铭，姚鑫，王宝美，郭寿延 et al. 分泌人体肝癌单克隆抗体的两个小鼠杂交瘤株及其抗体的专一性分析(简报). 实验生物学报，1985；18(2)：263-265
4 张尚权，王雄彪，潘惠忠，谈立松. 抗肝癌单克隆抗体Hepama Ⅰ丝裂霉素C结合物制备及其细胞毒特性. 第二军医大学学报，1997；18(1)：83-84
5 施乐华，吴孟超，陈汉，田建民，潘文舟，谢弘 et al. 抗人肝癌单克隆抗体的人体放射免疫定位及治疗. 中华肿瘤杂志，1997；19(2)：146-149
6 李志革，吴英德，周德南，甘友全，黄秉琰，贺海平 et al. 131I-抗AFP McAb“双弹头”免疫导向治疗原发性肝癌临床观察. 中华肿瘤杂志，1996；18(5)：368-371
7 隋延方，刘利，陈志南，刘彦仿，王文亮. 肝癌“双弹头”免疫导向药物的实验研究. 癌症，1994；13(6)：487-489
8 隋延方，何志龙，刘彦仿，陈志南，王文亮. 免疫导向治疗肝癌的实验研究. 中华医学杂志，1992；72(7)：397-400, 百拇医药