寻常型银屑病患者白细胞介素1受体拮抗剂基因多态性的研究
作者：刘贞富 张军民 杨琦 许彤华
单位：(430022 武汉，同济医科大学附属协和医院皮肤科)
关键词：
中华医学杂志980718 在白细胞介素1(IL-1)α和β及IL-1的ra基因(统称为IL-1RN)编码区内含子2中有一个可变数目的重复序列[1]，构成IL-1RN多态性。而其多态性在免疫介导的炎性疾病中可能有不同的功能意义。为了解IL-1RN多态性在寻常型银屑病患者中的可能作用，我们采用聚合酶链反应(PCR)方法研究了寻常型银屑病患者血中IL-1RN多态性,现将初步结果报道如下。
一、对象和方法
1.对象：82例寻常型银屑病患者来自本院门诊和住院处，其中男46例，女36例，年龄7～45岁，平均25.7岁，病程0.5～14年，平均3.9年。82例患者中斑块状银屑病47例，点滴状银屑病35例。正常对照为130例健康献血员。
, 百拇医药
2.标本收集与处理：(1) 取被检查者静脉血2ml(依地酸抗凝)置塑料薄膜上干燥后备用；(2) 按文献[2]方法提取DNA模板和PCR。
3.PCR引物和条件：实验室所用引物参照文献[3]的引物序列：5′CTCAGCAACACTCCTAT3′和5′TCCTGGTCTGCAGGTAA3′(引物为上海细胞生物所合成)。扩增条件为50 μl反应体系含DNA样品100 ng，4种dNTP各60μmol/L(华美公司)，1U Tag DNA多聚酶(华美公司)引物各60 pmol/L，反应在小型热循环仪(美国泊金-埃尔默公司)中进行，90℃变性5分钟后进入循环，94℃1分钟，55℃1分钟，72℃2分钟35个循环后，72℃延伸5分钟。2%琼脂糖凝胶电泳检测产物,紫外灯下观察结果。
4.统计学方法：(1) 基因频率显著性检验用四格表χ2检验；(2) 携带某基
附表 两组对象的基因型分布和频率(例数) 组别
, 百拇医药
例数
基因型
频率
1，2
1，2
2，2
1，3
A1
A2
正常对照组
130
72
44
, 百拇医药 8
6
0.75
0.23
寻常型银屑病组
82
29
30
20
3
0.55
0.43
斑块状
, http://www.100md.com 47
14
19
13
1
0.51
0.48
点滴状
35
15
11
7
2
0.61
, 百拇医药
0.36
的因疾病危险性用OR值估计相对危险度。
二、结果
1.两组对象基因型及分布：(1) 有3种等位基因产物410 bp，240 bp，500 bp，分别是IL-2RN调控区内含子2中86 bp序列的4、2及5个的重复，命名为A1(等位基因1)、A2(等位基因2)及A3(等位基因3)；(2) 寻常型银屑病组A2频率较正常对照组高，其中以斑块状银屑病者增高更明显。A1频率在病例组中下降，以斑块状银屑病下降略明显。两组A3频率差异无显著意义。基因型和频率在寻常型银屑病组和对照组中分布见附表。
2.病例组与正常对照组A2携带率：寻常型银屑病A2携带率为61%(其中斑块状银屑病可高达68%，高于正常对照组为40%，两组比较χ2=8.86，P<0.01)，斑块状银屑病与正常对照组比χ2=10.91，P<0.001。
, http://www.100md.com
3.携带A2者患寻常型银屑病的危险度：携带A2者寻常型银屑病发病率与携带A2者未发生寻常型银屑病数之比OR值为2.34，表明，携带A2者患寻常型银屑病的危险度是1.34～4.09(95%可信限)。
三、讨论
许多细胞因子基因包括肿瘤坏死因子(TNF)α，IL-1α和IL-1β都具有多态性[4]。IL-1 RN位于2号染色体长臂上。Tarlow等[3]应用PCR方法及对两侧引物间碱基测序证实IL-1ra基因内含子2具有多态性,其多态性是由内含子2中86bp序列重复个数不同所致，并发现5种等位基因，分别为86bp 2，3，4，5，6个的重复。我们用PCR扩增的基因产物带为500、410和240 bp，与Tarlow报导的其中3种一致。
在银屑病病损中IL-1，IL-1r和IL-1ra之间的平衡有改变[5]，其相互之间平衡决定炎症反应程度。本研究发现，寻常型银屑病患者A2携带率明显高于正常对照，尤其是斑块状银屑病者更高于正常对照组提示，IL-1RN等位基因2与寻常型银屑病有相关性。据此，我们推测IL-1ra基因中A2可能与IL-1ra产生水平有关，A2携带率增加，导致IL-1ra产生水平下降，引起IL-1r表达,继而引起IL-1浓度升高，这可能是引起银屑病皮肤炎症性病损的重要原因。另外也提示，A2是一种与皮肤炎症有关的非HLA的又一新的免疫学基因，是否是易患寻常型银屑病的标志尚值得深入研究。参考文献
, http://www.100md.com
1 Duff GW.Peptide regulatory factors on non-malignant disease, Lancet，1989, 1：1432-1435.
2 王申五.基因诊断技术.北京：北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1993.41-43；156-162.
3 Tarlow JK,Blakemore ALF.Lennard A,et al.Polymorphism in human IL-1 receptor antagonist gene intron 2 is caused by variable numbers of an 86bp tandem repeat. Hum Genet，1993, 91：403-404.
4 Clay FE,Cork MJ,Tarlow JK, et al. Interleukin 1 receptor antagonist gene polymorphism association with lichen sclerosus. Hum Genet，1994, 94：407-410.
5 Kristensen M, Meleuran B, Eedy DJ, et al. Distribution of interleukin 1 receptor antagonist protein (IRAP), interleukin 1 recept or and interleukin 1 α in normal and psoriatic skin：decreased expression of IRAP in psoriatic lesional epidermis.Br J Dermatol，1992, 127：305-311
(收稿：1997-10-13 修回：1998-04-10), http://www.100md.com
单位：(430022 武汉，同济医科大学附属协和医院皮肤科)
关键词：
中华医学杂志980718 在白细胞介素1(IL-1)α和β及IL-1的ra基因(统称为IL-1RN)编码区内含子2中有一个可变数目的重复序列[1]，构成IL-1RN多态性。而其多态性在免疫介导的炎性疾病中可能有不同的功能意义。为了解IL-1RN多态性在寻常型银屑病患者中的可能作用，我们采用聚合酶链反应(PCR)方法研究了寻常型银屑病患者血中IL-1RN多态性,现将初步结果报道如下。
一、对象和方法
1.对象：82例寻常型银屑病患者来自本院门诊和住院处，其中男46例，女36例，年龄7～45岁，平均25.7岁，病程0.5～14年，平均3.9年。82例患者中斑块状银屑病47例，点滴状银屑病35例。正常对照为130例健康献血员。
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2.标本收集与处理：(1) 取被检查者静脉血2ml(依地酸抗凝)置塑料薄膜上干燥后备用；(2) 按文献[2]方法提取DNA模板和PCR。
3.PCR引物和条件：实验室所用引物参照文献[3]的引物序列：5′CTCAGCAACACTCCTAT3′和5′TCCTGGTCTGCAGGTAA3′(引物为上海细胞生物所合成)。扩增条件为50 μl反应体系含DNA样品100 ng，4种dNTP各60μmol/L(华美公司)，1U Tag DNA多聚酶(华美公司)引物各60 pmol/L，反应在小型热循环仪(美国泊金-埃尔默公司)中进行，90℃变性5分钟后进入循环，94℃1分钟，55℃1分钟，72℃2分钟35个循环后，72℃延伸5分钟。2%琼脂糖凝胶电泳检测产物,紫外灯下观察结果。
4.统计学方法：(1) 基因频率显著性检验用四格表χ2检验；(2) 携带某基
附表 两组对象的基因型分布和频率(例数) 组别
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例数
基因型
频率
1，2
1，2
2，2
1，3
A1
A2
正常对照组
130
72
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, 百拇医药 8
6
0.75
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寻常型银屑病组
82
29
30
20
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0.55
0.43
斑块状
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14
19
13
1
0.51
0.48
点滴状
35
15
11
7
2
0.61
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0.36
的因疾病危险性用OR值估计相对危险度。
二、结果
1.两组对象基因型及分布：(1) 有3种等位基因产物410 bp，240 bp，500 bp，分别是IL-2RN调控区内含子2中86 bp序列的4、2及5个的重复，命名为A1(等位基因1)、A2(等位基因2)及A3(等位基因3)；(2) 寻常型银屑病组A2频率较正常对照组高，其中以斑块状银屑病者增高更明显。A1频率在病例组中下降，以斑块状银屑病下降略明显。两组A3频率差异无显著意义。基因型和频率在寻常型银屑病组和对照组中分布见附表。
2.病例组与正常对照组A2携带率：寻常型银屑病A2携带率为61%(其中斑块状银屑病可高达68%，高于正常对照组为40%，两组比较χ2=8.86，P<0.01)，斑块状银屑病与正常对照组比χ2=10.91，P<0.001。
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3.携带A2者患寻常型银屑病的危险度：携带A2者寻常型银屑病发病率与携带A2者未发生寻常型银屑病数之比OR值为2.34，表明，携带A2者患寻常型银屑病的危险度是1.34～4.09(95%可信限)。
三、讨论
许多细胞因子基因包括肿瘤坏死因子(TNF)α，IL-1α和IL-1β都具有多态性[4]。IL-1 RN位于2号染色体长臂上。Tarlow等[3]应用PCR方法及对两侧引物间碱基测序证实IL-1ra基因内含子2具有多态性,其多态性是由内含子2中86bp序列重复个数不同所致，并发现5种等位基因，分别为86bp 2，3，4，5，6个的重复。我们用PCR扩增的基因产物带为500、410和240 bp，与Tarlow报导的其中3种一致。
在银屑病病损中IL-1，IL-1r和IL-1ra之间的平衡有改变[5]，其相互之间平衡决定炎症反应程度。本研究发现，寻常型银屑病患者A2携带率明显高于正常对照，尤其是斑块状银屑病者更高于正常对照组提示，IL-1RN等位基因2与寻常型银屑病有相关性。据此，我们推测IL-1ra基因中A2可能与IL-1ra产生水平有关，A2携带率增加，导致IL-1ra产生水平下降，引起IL-1r表达,继而引起IL-1浓度升高，这可能是引起银屑病皮肤炎症性病损的重要原因。另外也提示，A2是一种与皮肤炎症有关的非HLA的又一新的免疫学基因，是否是易患寻常型银屑病的标志尚值得深入研究。参考文献
, http://www.100md.com
1 Duff GW.Peptide regulatory factors on non-malignant disease, Lancet，1989, 1：1432-1435.
2 王申五.基因诊断技术.北京：北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1993.41-43；156-162.
3 Tarlow JK,Blakemore ALF.Lennard A,et al.Polymorphism in human IL-1 receptor antagonist gene intron 2 is caused by variable numbers of an 86bp tandem repeat. Hum Genet，1993, 91：403-404.
4 Clay FE,Cork MJ,Tarlow JK, et al. Interleukin 1 receptor antagonist gene polymorphism association with lichen sclerosus. Hum Genet，1994, 94：407-410.
5 Kristensen M, Meleuran B, Eedy DJ, et al. Distribution of interleukin 1 receptor antagonist protein (IRAP), interleukin 1 recept or and interleukin 1 α in normal and psoriatic skin：decreased expression of IRAP in psoriatic lesional epidermis.Br J Dermatol，1992, 127：305-311
(收稿：1997-10-13 修回：1998-04-10), http://www.100md.com