银屑病患者血清可溶性肿瘤坏死因子受体水平的检测
作者：张开明 刘梅青 尹兴平 杨小英
单位：030009 太原市中心医院皮肤科
关键词：
中华医学杂志980717 由于肿瘤坏死因子(TNF)α在银屑病发病中具有重要的作用[1，2]，故推测可溶性TNF受体(sTNFR)在银屑病发病中可能也有一定的意义。为此，我们检测了银屑病患者血清中sTNFRⅠ与sTNFRⅡ水平，现将结果报道如下。
一、对象与方法
1.对象：为1996年9月～1997年5月门诊及住院的寻常性银屑病患者，共57例，年龄平均38岁，其中男33例，女24例。57例中进行期和静止期银屑病患者分别为28例和29例，皮损程度计算按照PASI积分法(积分均数为32.6)。对照组56例，平均37岁，均为健康者。
, 百拇医药
2.方法：sTNFRⅠ与sTNFRⅡ试剂盒为比利时Medgenix公司产品。抽出被检测者静脉血2 ml分离血清，-40℃备用待测，所有样品的sTNFRⅠ与sTNFRⅡ均是一次同步测定，采用双抗体夹心ELISA法，主要步骤为：将sTNFRⅠ及sTNFRⅡ标准品、待测血清及空白(生理盐水)加入已包被的96孔酶板中，每孔50 μι，均为复孔，再加入辣根过氧化物酶标记的羊抗人sTNFRⅠ(或sTNFRⅡ)单克隆抗体，每孔200 μι，室温振荡(700r/min)孵育l小时，弃去孔内液体，用0.01 mol pH7.4磷酸盐缓冲液(每次每孔400 μι)洗涤3次，然后加入显色液，每孔50 μι，室温振荡孵育15分钟，最后每孔加入200 μι0.15 mol H2SO4终止反应，置全自动酶标仪450 nm和650 nm(双波长法)处测吸光度(A)值，用标准品А值(复孔均值)及浓度绘制标准曲线，从中求得样品中 sTNFRⅠ与sTNFRⅡ实际含量，单位：ng/ml。
3.统计处理：将上述复孔均值数据输入电脑，采用SPSS软件包进行两样本均数t检验及相关分析。
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二、结果
1.sTNFRⅠ及sTNFRⅡ水平：银屑病患者血清中sTNFRⅠ与sTNFRⅡ水平比对照组明显增高，见附表。进行期与静止期患者血清中 sTNFRⅠ分别为2.2±1.4及2.1±1.3(ng/ml)，t=1.36，P>0.05；sTNFRⅡ分别为8±6及8±6(ng/ml)，t=1.27，P>0.05。
附表 两组对象血清sTNFRⅠ与
sTNFRⅡ水平(ng/ml，
±s) 组别
例数
sTNFRⅠ
sTNFRⅡ
, http://www.100md.com
银屑病组
57
2.2±1.4
7.9±6.1
对照组
56
1.3±0.7
4.3±1.7
t值
1.96
2.32
P值
<0.05
, http://www.100md.com
<0.02
2.相关分析：sTNFRⅠ与sTNFRⅡ经相关分析，银屑病患者组r=0.81，P<0.001，正常对照组r=0.50，P<0.02。sTNFRⅡ与皮损程度相关分析为，r=0.36，P<0.05。sTNFRⅠ与皮损程度相关分析为，r=0.29，P>0.05。
三、讨论
因TNFα与银屑病发病密切相关，而TNFα的效应必须通过TNFR才可产生，所以研究sTNFR对于了解银屑病发病机理非常重要。本实验显示：(1) 银屑病患者血清中sTNFRⅠ与sTNFRⅡ水平明显增高，sTNFRⅡ又明显高于sTNFRⅠ水平。表明，sTNFR在银屑病发病机理中有一定的作用；(2) 相关分析表明，sTNFRⅠ与sTNFRⅡ在正常人及银屑病组均具有正相关关系，两组内sTNFRⅡ含量均高于sTNFRⅠ，提示，银屑病患者产生sTNFRⅠ与sTNFRⅡ能力虽然增高，但其产生sTNFR的规律却无明显异常改变。本结果还显示，sTNFRⅡ与皮损程度有一定的平行关系；(3) 进行期与静止期患者血清sTNFRⅠ与sTNFRⅡ比较差异无显著意义。最近Griffiths等[3]观察到银屑病皮损中TNFRⅠ浓度比正常对照组明显增高，与临床严重程度相关；而Bonifati等[4]认为TNFRⅠ主要在正常皮肤的成纤维细胞的核及核质中表达，在银屑病皮损表达明显减少。由于sTNFR和TNFα的作用均是双重性，两者作用相互依赖，故深入了解银屑病患者血清中sTNFR/TNFα浓度比与银屑病皮疹之间的关系，对于指导TNFα治疗银屑病将具有重要的意义。参考文献
, http://www.100md.com
1 陈周，饶汉珍，郭实士.银屑病患者白介素6和肿瘤坏死因子α的测定.中华皮肤科杂志，1996，29：82-84.
2 张开明，刘梅青，周敏，等.银屑病患者白介素8含量测定.中华皮肤科杂志, 1995，28：319-321.
3 Griffiths CEM, Boffa MJ, Gallatin WM, et al. Elevated levels of circulating intercellular adhesion mole-cule-3 (CICAM-3) in psoriasis. Arth Derm, 1996, 76：2-6.
4 Bonifati C,Trento E,Carducci M,et al. Soluble E-selectin&127;and&127;soluble tumour necrosis factor recep-tor(60KD) serum levels in Patients with Psoriasis.Dermatology,1995,190：128-132.
(收稿：1997-08-27 修回：1998-04-20), 百拇医药
单位：030009 太原市中心医院皮肤科
关键词：
中华医学杂志980717 由于肿瘤坏死因子(TNF)α在银屑病发病中具有重要的作用[1，2]，故推测可溶性TNF受体(sTNFR)在银屑病发病中可能也有一定的意义。为此，我们检测了银屑病患者血清中sTNFRⅠ与sTNFRⅡ水平，现将结果报道如下。
一、对象与方法
1.对象：为1996年9月～1997年5月门诊及住院的寻常性银屑病患者，共57例，年龄平均38岁，其中男33例，女24例。57例中进行期和静止期银屑病患者分别为28例和29例，皮损程度计算按照PASI积分法(积分均数为32.6)。对照组56例，平均37岁，均为健康者。
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2.方法：sTNFRⅠ与sTNFRⅡ试剂盒为比利时Medgenix公司产品。抽出被检测者静脉血2 ml分离血清，-40℃备用待测，所有样品的sTNFRⅠ与sTNFRⅡ均是一次同步测定，采用双抗体夹心ELISA法，主要步骤为：将sTNFRⅠ及sTNFRⅡ标准品、待测血清及空白(生理盐水)加入已包被的96孔酶板中，每孔50 μι，均为复孔，再加入辣根过氧化物酶标记的羊抗人sTNFRⅠ(或sTNFRⅡ)单克隆抗体，每孔200 μι，室温振荡(700r/min)孵育l小时，弃去孔内液体，用0.01 mol pH7.4磷酸盐缓冲液(每次每孔400 μι)洗涤3次，然后加入显色液，每孔50 μι，室温振荡孵育15分钟，最后每孔加入200 μι0.15 mol H2SO4终止反应，置全自动酶标仪450 nm和650 nm(双波长法)处测吸光度(A)值，用标准品А值(复孔均值)及浓度绘制标准曲线，从中求得样品中 sTNFRⅠ与sTNFRⅡ实际含量，单位：ng/ml。
3.统计处理：将上述复孔均值数据输入电脑，采用SPSS软件包进行两样本均数t检验及相关分析。
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二、结果
1.sTNFRⅠ及sTNFRⅡ水平：银屑病患者血清中sTNFRⅠ与sTNFRⅡ水平比对照组明显增高，见附表。进行期与静止期患者血清中 sTNFRⅠ分别为2.2±1.4及2.1±1.3(ng/ml)，t=1.36，P>0.05；sTNFRⅡ分别为8±6及8±6(ng/ml)，t=1.27，P>0.05。
附表 两组对象血清sTNFRⅠ与
sTNFRⅡ水平(ng/ml，
±s) 组别例数
sTNFRⅠ
sTNFRⅡ
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银屑病组
57
2.2±1.4
7.9±6.1
对照组
56
1.3±0.7
4.3±1.7
t值
1.96
2.32
P值
<0.05
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<0.02
2.相关分析：sTNFRⅠ与sTNFRⅡ经相关分析，银屑病患者组r=0.81，P<0.001，正常对照组r=0.50，P<0.02。sTNFRⅡ与皮损程度相关分析为，r=0.36，P<0.05。sTNFRⅠ与皮损程度相关分析为，r=0.29，P>0.05。
三、讨论
因TNFα与银屑病发病密切相关，而TNFα的效应必须通过TNFR才可产生，所以研究sTNFR对于了解银屑病发病机理非常重要。本实验显示：(1) 银屑病患者血清中sTNFRⅠ与sTNFRⅡ水平明显增高，sTNFRⅡ又明显高于sTNFRⅠ水平。表明，sTNFR在银屑病发病机理中有一定的作用；(2) 相关分析表明，sTNFRⅠ与sTNFRⅡ在正常人及银屑病组均具有正相关关系，两组内sTNFRⅡ含量均高于sTNFRⅠ，提示，银屑病患者产生sTNFRⅠ与sTNFRⅡ能力虽然增高，但其产生sTNFR的规律却无明显异常改变。本结果还显示，sTNFRⅡ与皮损程度有一定的平行关系；(3) 进行期与静止期患者血清sTNFRⅠ与sTNFRⅡ比较差异无显著意义。最近Griffiths等[3]观察到银屑病皮损中TNFRⅠ浓度比正常对照组明显增高，与临床严重程度相关；而Bonifati等[4]认为TNFRⅠ主要在正常皮肤的成纤维细胞的核及核质中表达，在银屑病皮损表达明显减少。由于sTNFR和TNFα的作用均是双重性，两者作用相互依赖，故深入了解银屑病患者血清中sTNFR/TNFα浓度比与银屑病皮疹之间的关系，对于指导TNFα治疗银屑病将具有重要的意义。参考文献
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1 陈周，饶汉珍，郭实士.银屑病患者白介素6和肿瘤坏死因子α的测定.中华皮肤科杂志，1996，29：82-84.
2 张开明，刘梅青，周敏，等.银屑病患者白介素8含量测定.中华皮肤科杂志, 1995，28：319-321.
3 Griffiths CEM, Boffa MJ, Gallatin WM, et al. Elevated levels of circulating intercellular adhesion mole-cule-3 (CICAM-3) in psoriasis. Arth Derm, 1996, 76：2-6.
4 Bonifati C,Trento E,Carducci M,et al. Soluble E-selectin&127;and&127;soluble tumour necrosis factor recep-tor(60KD) serum levels in Patients with Psoriasis.Dermatology,1995,190：128-132.
(收稿：1997-08-27 修回：1998-04-20), 百拇医药