急性胰腺炎相关蛋白 mRNA表达机制
作者：么改琦 吴咸中
单位：100020 首都医科大学附属北京红十字朝阳医院
关键词：
中华外科杂志/980821 1984年，法国人Keim等首次在急性胰腺炎(AP)大鼠的胰液中发现了一种蛋白，由于这种蛋白与AP的发生、发展密切相关，因而Keim等将其命名为胰腺炎相关蛋白(PAP)。随后，法国和德国两家实验室合作，对PAP的形态功能进行了大量的实验研究。发现正常情况下，检测不到PAP。在AP时，PAP大量分泌，即使在其它消化酶的分泌受抑制时，PAP仍能特异性的大量合成和分泌。
本实验采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及斑点杂交(dotblot)技术，研究了大鼠AP时PAP mRNA的表达水平，为从基因表达水平研究PAP蛋白与AP发病之间的关系提供科学依据。并希望能为AP提供一特异性诊断和评估预后的指标。
一、材料与方法
1.主要试剂及器材：蛋白酶K，鲑精DNA，AMV反转录酶，RNasin,dNTP，PCR分子量标准，TaqDNA聚合酶。DNA热循环仪，高速台式低温离心机，激光光密度扫描仪。
2.方法：选健康Wistar大鼠36只，体重180～220 g，雌雄各半。动物分组：(1)假手术组(SHAM)：12只，开腹后翻动胰腺数次关腹。(2)胰腺炎模型组(ANP)：12只，开腹后，采用经胆胰管逆行注射5%牛磺胆酸钠的方法造成胰腺炎动物模型。(3)腹膜炎组(PER)：12只，腹腔注射2.5%新鲜自家粪液0.025 ml/g WT大鼠。采用异硫氰酸胍-热肪一步法，提取胰腺组织总RNA，以Primer和PCRDESN软件设计出扩增长度为352bp的一对引物。经逆转录反应体系及PCR反应体系后，回收PCR产物，再经斑点杂交定量检测PAP mRNA表达。
二、结果
1.PAP基因片段的扩增及鉴定：结果显示急胰胰腺炎组PAP扩增片长度约352 bp，而腹膜炎和假手术组无条带扩出。
2.斑点杂交法测定PAP mRNA表达情况：不同实验分组和同一实验组不同时间的总RNA点膜后进行斑点杂交，以激光扫描仪测定PAP mRNA表达情况。斑点杂交结果经直线回归配对法计算PAP mRNA相对含量，发现PAP mRNA水平在大鼠胰腺炎造模后在胰腺组织中迅速升高，在48小时达高峰(>18 U/μg)，72小时略有下降(16 U/μg)，表明了PAP基因表达与AP严重程度之间有直接相关性。实验又发现在腹膜炎大鼠模型中未发现PAP mRNA的表达。
三、讨论
80年代新近发现的与胰腺炎密切相关的蛋白PAP，作为胰腺急性期反应的特征，为AP的研究开辟了一个新的视野，引起了人们对AP时细胞蛋白代谢改变方面的注意。
PAP mRNA这种仅在胰腺炎时迅速过度表达的特征表明了PAP是一种特异性的胰腺炎相关蛋白，与Iovanna等人研究的PAP蛋白水平变化相比，发现PAP的基因表达与蛋白水平变化相一致，因而检测PAP的mRNA水平能反映PAP的蛋白水平[1]。
参考文献
1Imrie CW.Prognosis of acute pancreatitis.Ann Ital Chir,1995,66:187-189., 百拇医药
单位：100020 首都医科大学附属北京红十字朝阳医院
关键词：
中华外科杂志/980821 1984年，法国人Keim等首次在急性胰腺炎(AP)大鼠的胰液中发现了一种蛋白，由于这种蛋白与AP的发生、发展密切相关，因而Keim等将其命名为胰腺炎相关蛋白(PAP)。随后，法国和德国两家实验室合作，对PAP的形态功能进行了大量的实验研究。发现正常情况下，检测不到PAP。在AP时，PAP大量分泌，即使在其它消化酶的分泌受抑制时，PAP仍能特异性的大量合成和分泌。
本实验采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及斑点杂交(dotblot)技术，研究了大鼠AP时PAP mRNA的表达水平，为从基因表达水平研究PAP蛋白与AP发病之间的关系提供科学依据。并希望能为AP提供一特异性诊断和评估预后的指标。
一、材料与方法
1.主要试剂及器材：蛋白酶K，鲑精DNA，AMV反转录酶，RNasin,dNTP，PCR分子量标准，TaqDNA聚合酶。DNA热循环仪，高速台式低温离心机，激光光密度扫描仪。
2.方法：选健康Wistar大鼠36只，体重180～220 g，雌雄各半。动物分组：(1)假手术组(SHAM)：12只，开腹后翻动胰腺数次关腹。(2)胰腺炎模型组(ANP)：12只，开腹后，采用经胆胰管逆行注射5%牛磺胆酸钠的方法造成胰腺炎动物模型。(3)腹膜炎组(PER)：12只，腹腔注射2.5%新鲜自家粪液0.025 ml/g WT大鼠。采用异硫氰酸胍-热肪一步法，提取胰腺组织总RNA，以Primer和PCRDESN软件设计出扩增长度为352bp的一对引物。经逆转录反应体系及PCR反应体系后，回收PCR产物，再经斑点杂交定量检测PAP mRNA表达。
二、结果
1.PAP基因片段的扩增及鉴定：结果显示急胰胰腺炎组PAP扩增片长度约352 bp，而腹膜炎和假手术组无条带扩出。
2.斑点杂交法测定PAP mRNA表达情况：不同实验分组和同一实验组不同时间的总RNA点膜后进行斑点杂交，以激光扫描仪测定PAP mRNA表达情况。斑点杂交结果经直线回归配对法计算PAP mRNA相对含量，发现PAP mRNA水平在大鼠胰腺炎造模后在胰腺组织中迅速升高，在48小时达高峰(>18 U/μg)，72小时略有下降(16 U/μg)，表明了PAP基因表达与AP严重程度之间有直接相关性。实验又发现在腹膜炎大鼠模型中未发现PAP mRNA的表达。
三、讨论
80年代新近发现的与胰腺炎密切相关的蛋白PAP，作为胰腺急性期反应的特征，为AP的研究开辟了一个新的视野，引起了人们对AP时细胞蛋白代谢改变方面的注意。
PAP mRNA这种仅在胰腺炎时迅速过度表达的特征表明了PAP是一种特异性的胰腺炎相关蛋白，与Iovanna等人研究的PAP蛋白水平变化相比，发现PAP的基因表达与蛋白水平变化相一致，因而检测PAP的mRNA水平能反映PAP的蛋白水平[1]。
参考文献
1Imrie CW.Prognosis of acute pancreatitis.Ann Ital Chir,1995,66:187-189., 百拇医药