生长抑制激素和生长激素对急性坏死性胰腺炎肝损伤的保护作用
作者：张群华 倪泉兴 蔡端 张延龄 殷保兵 候兰梯 郑颂国 沈兆忠 罗建民
单位：200040 上海医科大学华山医院外科
关键词：胰腺炎；急性病；肝；生长抑制激素；生长激素
中华医学杂志980825 【摘要】 目的 探讨生长抑制激素(简称生长抑素)和生长激素对急性坏死性胰腺炎(ANP)肝损伤的保护作用。方法 3.5%牛磺胆酸逆行胰胆管注射，建立ANP大鼠模型。观察炎性介质[内毒素、淀粉酶、肿瘤坏死因子α(TNFα)]的变化并用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)分析TNFαmRNA转录水平的表达，及生长抑素和生长激素的治疗作用。结果 ANP可以诱导炎性介质明显升高，并与肝损伤的严重程度呈正相关，而且肝的TNFα mRNA也呈高表达。生长抑素和生 长激素能抑制ANP的炎性介质过度释放及肝TNFα mRNA的转录水平的高表达，减轻胰腺和肝的损伤程度。结论 炎性介质参与了ANP对肝脏的损伤，生长抑素和生长激素对ANP的肝损伤保护有协同作用。
, 百拇医药
Somastostatin and growth hormone in preventing liver damage due to acute necrotizing pancereatitis Zhang Qunhua, Ni Qnanxing, Cai Duan, , et al. Department of Surgery, Shanghai Medical University, Shanghai 200040
【Abstract 】 Objective To study the role of somastostatin and growth hormone in preventing liver damage due to ANP. Methods The roles of inflammatory mediators (Endotoxin, Amylase, TNFα) were investigated in ANP model by retrograde injection of 3.5% sodium taurocholate 2.5 ml/kg into the pancreatic duct, and TNFα mRNA in the liver after ANP was observed by reverse transcriptase-polymerase chain reaction. Besides, the effects of somastostain and growth hormone were also observed. Results ANP caused remarkable elevation of those inflammatory mediators, being positively correlated with the development of pancreas and liver damage. Somastostain and growth hormone inhibited the inflammatory mediates and TNFα mRNA overexpression and reduced the damage to the pancreas and liver. Conclusions TNFα plays an important role in ANP progression, and somastostatin and growth hormone may prevent the development and progression of liver damage due to ANP.
, 百拇医药
【Key words 】 Pancreatitis Acute disease Liver Somastostatin Somatotropin
(Natl Med J China, 1998, 78：621-623)
急性坏死性胰腺炎(ANP)产生的炎性介质对多器官损伤的作用机制的研究是外科领域中的新热点[1]。我们以往的研究表明，ANP时炎性介质的释放量与多器官损伤程度呈正相关[2]，现在又观察了ANP发生后肝脏的TNFα mRNA表达和生长抑制激素(简称生长抑素)及生长激素对ANP肝损伤的保护作用，现报道如下。
材料和方法
一、材料
1.实验动物分组：健康雄性SD大鼠，体重340～380 g(购自上海医科大学动物部)。随机分为：(1)正常对照组10只，(2)ANP组12只，(3)生理盐水治疗组(ANP+NS组)10只，(4)生长抑素治疗组(ANP+S组)10只，(5)生长抑素和生长激素治疗组(ANP+S+G组)10只，(6)生长激素治疗组(ANP+G组)10只。
, 百拇医药
二、方法
1.急性坏死性胰腺炎模型的建立：按文献[3]方法进行。
2.生长抑素治疗方法：ANP建立后，经股静脉注射生长抑素(瑞士雪兰诺公司产品)，剂量为84 μg*kg-1*d-1。
3.生长抑素和生长激素联合治疗方法：生长抑素剂量为84 μg*kg-1*d-1，同时皮下注射生长激素(瑞士雪兰诺公司产品0.5 μg*kg-1*d-1)。
4.生长激素治疗方法：皮下注射生长激素0.5 μg*kg-1*d-1。
上述各组治疗均设生理盐水治疗对照组。
, 百拇医药
5.血内毒素、淀粉酶、肿瘤坏死因子α(TNFα)的测定：血浆内毒素测定采用合成基质偶氮显色法，血清TNFα测定用ELISA法，血清淀粉酶测定采用比色法。
6.肝的TNFα mRNA测定：按文献[4]方法提取肝组织总RNA，按操作说明书进行RT-PCR扩增(试剂购自美国Promega公司)。扩增后，以标准蛋白分子量为对照，测定TNFα mRNA的表达。大鼠TNFα cDNA引物序列：上游5′-GCCAATGGC ATGGATCTCAAAG-3′，下游5′-CAGAGCAATGACTCCAAAGT-3′(扩增片段357 bp)。
7.组织形态学检查：于14小时后处死各组大鼠，解剖胰和肝，观察其大体形态、光镜和电镜变化。
8.统计学处理：所有数据以
±s表示。组间均数差异用t检验统计。
, 百拇医药
结 果
1.ANP与炎性介质表达的关系：ANP时血中内毒素、淀粉酶和TNF明显升高，与正常对照组、生长抑素治疗组、生长抑素和生长激素联合治疗组比较，差异有非常显著意义(P<0.001)。内毒素和TNFα的表达水平呈平行关系(附表)。
附表 急性坏死性胰腺炎大鼠血中炎性介质的变化(
±s) 组别
鼠数
内毒素(pg/ml)
淀粉酶(u/L)
TNFα(pg/ml)
正常对照组
, 百拇医药
10
72±12
5 000±600
41.5±5.7
ANP组
12
250±13
30 000±800
68.7±1.8
NS组
10
230±16
28 000±520
, 百拇医药
64.6±9.9
S组
12
94±14
9 000±560
50.4±6.8
S+G组
10
78±18
7 000±460
42.1±4.2
G组
10
, 百拇医药
140±24
20 000±500
54.2±3.8
注：ANP：急性坏死性胰腺炎；NS：生理盐水治疗组；S：生长抑素治疗组；S+G：生 长抑素和生长激素治疗组；G：生长激素治疗组 2.ANP与肝脏损伤的关系：ANP可以引起肝脏的严重损害，镜下可见肝组织有斑块状坏死，并见大量淋巴细胞、中性细胞和巨噬细胞浸润；ANP的生长抑素治疗组：肝细胞变性、肿胀，少量肝细胞坏死；ANP的生长抑素和生长激素治疗组：肝细胞变性肿胀为主，未见明显肝细胞坏死；单用生长激素治疗组、肝细胞可见变性或坏死，坏死细胞呈散在分布。电镜观察表明ANP组的肝细胞核和细胞器均有严重受损；ANP生长抑素治疗组肝细胞核完整，细胞器受损为主；生长抑素和生长激素治疗组的肝细胞基本完好，单用生长激素治疗组的肝细胞核肿胀伴细胞器受损。
3.ANP与肝TNFα mRNA转录水平变化的关系：ANP组的肝组织TNFα mRNA转录水平高度表达；ANP的生长抑素治疗组、生长抑素和生长激素治疗组、单用生长激素治疗组的肝组织TNFα mRNA与正常肝组织TNF mRNA表达水平相近(附图)。
, http://www.100md.com
1.试剂标准样品380 bp；2.生长激素和生长抑素治疗组；3.生长抑素治疗组；4.生长激素治疗组；5.正常肝组织；6.急性坏死性胰腺炎组；7.标准Marker附图 肝组织TNFα mRNA的表达
讨 论
在正常生理条件下，脾、肝、胸腺及肾脏的组织均有TNFα mRNA的表达，而在内毒素刺激后，胰腺、肝脏、肾脏等多脏器均快速合成TNFα mRNA及蛋白质。当TNFα的产生超过组织中TNF受体数量时，过量的TNFα进入血液循环，可诱导炎症反应，在炎症免疫协调的信号网络调节中起重要作用。本文研究发现ANP时血循环中TNFα水平升高，肝细胞TNFα mRNA转录水平呈高度表达。这种网络效应和相互交叉的协同作用，是ANP导致肝损伤的重要机制。
最近研究表明生长抑素是一种强力的刺激网状内皮系统的药物，能有效地降低内素毒血症，从而阻断细胞因子链启动。我们的研究也证实，在ANP时使用生长抑素可以降低内毒素、TNFα等炎性介质水平，使胰腺炎局限化。但病理发现生长抑素治疗后胰腺仍可存在局灶性坏死，肝脏可见散在的细胞变性坏死。因此设想同时应用生长激素，以抑制损伤后蛋白分解代谢反应，改善全身性宿主防御功能，将与生长抑素产生治疗上的协同效应。我们研究结果证实了这一设想。实验结果表明生长抑素和生长激素联合治疗后，胰腺和肝脏的病损较单用生长抑素或生长激素有明显改善，炎性介质的释放程度及肝细胞TNFα mRNA转录水平的表达接近正常对照组水平。值得注意的是单用生长激素也可降低ANP的肝细胞TNFα mRNA的过度表达，由此我们推测，生长激素与生长抑素协同抑制众多炎症介质的释放，削减ANP高代谢主要启动因素和其难以逆转的病理基础，其作用机制可能为生长激素的促蛋白合成效应使肝脏合成的白蛋白水平保持稳定的结果。新近研究已表明，生长激素可加强感染后肝脏白蛋白的RNA的转录从而促进白蛋白的合成，改善了低白蛋白血症。当ANP发生时，机体被迫动员内源性组织蛋白质储备以满足异常增高的能量需求，并将导致体内有功能细胞群缩小，免疫防御能力降低，利用生长激素促进蛋白合成和其显著逆转负氮平衡的作用，可协同生长抑素阻断ANP炎性细胞因子链启动的效应。
, http://www.100md.com
参考文献
1 Andrew King Snorth Role of cytokines and their inhibitors in acute pancreatitis. Gut, 1997, 40:1-4.
2 张群华，蔡端，吴树强，等.急性坏死性胰腺炎大鼠的炎性介质变化和生长抑素的作用.中华医学杂志，1997，77：355-358.
3 张群华，蔡端，吴树强，等.一氧化氮等炎性介质与急性坏死性胰腺炎的关系.中华实验外科杂志，1997，14：197-198.
4 Giroir BP, Johnson JH, Brown J, et al. The tissue distribution of tumor necrosis factor biosynthesis during exdotoxemia. J Clin Invest, 1993, 90:693-697.
(收稿：1997-09-08 修回：1998-04-15), 百拇医药
单位：200040 上海医科大学华山医院外科
关键词：胰腺炎；急性病；肝；生长抑制激素；生长激素
中华医学杂志980825 【摘要】 目的 探讨生长抑制激素(简称生长抑素)和生长激素对急性坏死性胰腺炎(ANP)肝损伤的保护作用。方法 3.5%牛磺胆酸逆行胰胆管注射，建立ANP大鼠模型。观察炎性介质[内毒素、淀粉酶、肿瘤坏死因子α(TNFα)]的变化并用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)分析TNFαmRNA转录水平的表达，及生长抑素和生长激素的治疗作用。结果 ANP可以诱导炎性介质明显升高，并与肝损伤的严重程度呈正相关，而且肝的TNFα mRNA也呈高表达。生长抑素和生 长激素能抑制ANP的炎性介质过度释放及肝TNFα mRNA的转录水平的高表达，减轻胰腺和肝的损伤程度。结论 炎性介质参与了ANP对肝脏的损伤，生长抑素和生长激素对ANP的肝损伤保护有协同作用。
, 百拇医药
Somastostatin and growth hormone in preventing liver damage due to acute necrotizing pancereatitis Zhang Qunhua, Ni Qnanxing, Cai Duan, , et al. Department of Surgery, Shanghai Medical University, Shanghai 200040
【Abstract 】 Objective To study the role of somastostatin and growth hormone in preventing liver damage due to ANP. Methods The roles of inflammatory mediators (Endotoxin, Amylase, TNFα) were investigated in ANP model by retrograde injection of 3.5% sodium taurocholate 2.5 ml/kg into the pancreatic duct, and TNFα mRNA in the liver after ANP was observed by reverse transcriptase-polymerase chain reaction. Besides, the effects of somastostain and growth hormone were also observed. Results ANP caused remarkable elevation of those inflammatory mediators, being positively correlated with the development of pancreas and liver damage. Somastostain and growth hormone inhibited the inflammatory mediates and TNFα mRNA overexpression and reduced the damage to the pancreas and liver. Conclusions TNFα plays an important role in ANP progression, and somastostatin and growth hormone may prevent the development and progression of liver damage due to ANP.
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【Key words 】 Pancreatitis Acute disease Liver Somastostatin Somatotropin
(Natl Med J China, 1998, 78：621-623)
急性坏死性胰腺炎(ANP)产生的炎性介质对多器官损伤的作用机制的研究是外科领域中的新热点[1]。我们以往的研究表明，ANP时炎性介质的释放量与多器官损伤程度呈正相关[2]，现在又观察了ANP发生后肝脏的TNFα mRNA表达和生长抑制激素(简称生长抑素)及生长激素对ANP肝损伤的保护作用，现报道如下。
材料和方法
一、材料
1.实验动物分组：健康雄性SD大鼠，体重340～380 g(购自上海医科大学动物部)。随机分为：(1)正常对照组10只，(2)ANP组12只，(3)生理盐水治疗组(ANP+NS组)10只，(4)生长抑素治疗组(ANP+S组)10只，(5)生长抑素和生长激素治疗组(ANP+S+G组)10只，(6)生长激素治疗组(ANP+G组)10只。
, 百拇医药
二、方法
1.急性坏死性胰腺炎模型的建立：按文献[3]方法进行。
2.生长抑素治疗方法：ANP建立后，经股静脉注射生长抑素(瑞士雪兰诺公司产品)，剂量为84 μg*kg-1*d-1。
3.生长抑素和生长激素联合治疗方法：生长抑素剂量为84 μg*kg-1*d-1，同时皮下注射生长激素(瑞士雪兰诺公司产品0.5 μg*kg-1*d-1)。
4.生长激素治疗方法：皮下注射生长激素0.5 μg*kg-1*d-1。
上述各组治疗均设生理盐水治疗对照组。
, 百拇医药
5.血内毒素、淀粉酶、肿瘤坏死因子α(TNFα)的测定：血浆内毒素测定采用合成基质偶氮显色法，血清TNFα测定用ELISA法，血清淀粉酶测定采用比色法。
6.肝的TNFα mRNA测定：按文献[4]方法提取肝组织总RNA，按操作说明书进行RT-PCR扩增(试剂购自美国Promega公司)。扩增后，以标准蛋白分子量为对照，测定TNFα mRNA的表达。大鼠TNFα cDNA引物序列：上游5′-GCCAATGGC ATGGATCTCAAAG-3′，下游5′-CAGAGCAATGACTCCAAAGT-3′(扩增片段357 bp)。
7.组织形态学检查：于14小时后处死各组大鼠，解剖胰和肝，观察其大体形态、光镜和电镜变化。
8.统计学处理：所有数据以
±s表示。组间均数差异用t检验统计。, 百拇医药
结 果
1.ANP与炎性介质表达的关系：ANP时血中内毒素、淀粉酶和TNF明显升高，与正常对照组、生长抑素治疗组、生长抑素和生长激素联合治疗组比较，差异有非常显著意义(P<0.001)。内毒素和TNFα的表达水平呈平行关系(附表)。
附表 急性坏死性胰腺炎大鼠血中炎性介质的变化(
±s) 组别鼠数
内毒素(pg/ml)
淀粉酶(u/L)
TNFα(pg/ml)
正常对照组
, 百拇医药
10
72±12
5 000±600
41.5±5.7
ANP组
12
250±13
30 000±800
68.7±1.8
NS组
10
230±16
28 000±520
, 百拇医药
64.6±9.9
S组
12
94±14
9 000±560
50.4±6.8
S+G组
10
78±18
7 000±460
42.1±4.2
G组
10
, 百拇医药
140±24
20 000±500
54.2±3.8
注：ANP：急性坏死性胰腺炎；NS：生理盐水治疗组；S：生长抑素治疗组；S+G：生 长抑素和生长激素治疗组；G：生长激素治疗组 2.ANP与肝脏损伤的关系：ANP可以引起肝脏的严重损害，镜下可见肝组织有斑块状坏死，并见大量淋巴细胞、中性细胞和巨噬细胞浸润；ANP的生长抑素治疗组：肝细胞变性、肿胀，少量肝细胞坏死；ANP的生长抑素和生长激素治疗组：肝细胞变性肿胀为主，未见明显肝细胞坏死；单用生长激素治疗组、肝细胞可见变性或坏死，坏死细胞呈散在分布。电镜观察表明ANP组的肝细胞核和细胞器均有严重受损；ANP生长抑素治疗组肝细胞核完整，细胞器受损为主；生长抑素和生长激素治疗组的肝细胞基本完好，单用生长激素治疗组的肝细胞核肿胀伴细胞器受损。
3.ANP与肝TNFα mRNA转录水平变化的关系：ANP组的肝组织TNFα mRNA转录水平高度表达；ANP的生长抑素治疗组、生长抑素和生长激素治疗组、单用生长激素治疗组的肝组织TNFα mRNA与正常肝组织TNF mRNA表达水平相近(附图)。
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1.试剂标准样品380 bp；2.生长激素和生长抑素治疗组；3.生长抑素治疗组；4.生长激素治疗组；5.正常肝组织；6.急性坏死性胰腺炎组；7.标准Marker附图 肝组织TNFα mRNA的表达
讨 论
在正常生理条件下，脾、肝、胸腺及肾脏的组织均有TNFα mRNA的表达，而在内毒素刺激后，胰腺、肝脏、肾脏等多脏器均快速合成TNFα mRNA及蛋白质。当TNFα的产生超过组织中TNF受体数量时，过量的TNFα进入血液循环，可诱导炎症反应，在炎症免疫协调的信号网络调节中起重要作用。本文研究发现ANP时血循环中TNFα水平升高，肝细胞TNFα mRNA转录水平呈高度表达。这种网络效应和相互交叉的协同作用，是ANP导致肝损伤的重要机制。
最近研究表明生长抑素是一种强力的刺激网状内皮系统的药物，能有效地降低内素毒血症，从而阻断细胞因子链启动。我们的研究也证实，在ANP时使用生长抑素可以降低内毒素、TNFα等炎性介质水平，使胰腺炎局限化。但病理发现生长抑素治疗后胰腺仍可存在局灶性坏死，肝脏可见散在的细胞变性坏死。因此设想同时应用生长激素，以抑制损伤后蛋白分解代谢反应，改善全身性宿主防御功能，将与生长抑素产生治疗上的协同效应。我们研究结果证实了这一设想。实验结果表明生长抑素和生长激素联合治疗后，胰腺和肝脏的病损较单用生长抑素或生长激素有明显改善，炎性介质的释放程度及肝细胞TNFα mRNA转录水平的表达接近正常对照组水平。值得注意的是单用生长激素也可降低ANP的肝细胞TNFα mRNA的过度表达，由此我们推测，生长激素与生长抑素协同抑制众多炎症介质的释放，削减ANP高代谢主要启动因素和其难以逆转的病理基础，其作用机制可能为生长激素的促蛋白合成效应使肝脏合成的白蛋白水平保持稳定的结果。新近研究已表明，生长激素可加强感染后肝脏白蛋白的RNA的转录从而促进白蛋白的合成，改善了低白蛋白血症。当ANP发生时，机体被迫动员内源性组织蛋白质储备以满足异常增高的能量需求，并将导致体内有功能细胞群缩小，免疫防御能力降低，利用生长激素促进蛋白合成和其显著逆转负氮平衡的作用，可协同生长抑素阻断ANP炎性细胞因子链启动的效应。
, http://www.100md.com
参考文献
1 Andrew King Snorth Role of cytokines and their inhibitors in acute pancreatitis. Gut, 1997, 40:1-4.
2 张群华，蔡端，吴树强，等.急性坏死性胰腺炎大鼠的炎性介质变化和生长抑素的作用.中华医学杂志，1997，77：355-358.
3 张群华，蔡端，吴树强，等.一氧化氮等炎性介质与急性坏死性胰腺炎的关系.中华实验外科杂志，1997，14：197-198.
4 Giroir BP, Johnson JH, Brown J, et al. The tissue distribution of tumor necrosis factor biosynthesis during exdotoxemia. J Clin Invest, 1993, 90:693-697.
(收稿：1997-09-08 修回：1998-04-15), 百拇医药