脾肾阴虚证血清氧自由基损伤初探
作者：陈德珍1 魏睦新1 顾宇春1 管学忠21
单位：1南京医科大学第一附属医院中医科 江苏省南京市 210029;2江苏省钟山干部疗养院中医科 江苏省南京市 210014
关键词：脾虚/血液；肾虚/血液；超氧化物歧化酶类/血液；丙二醛/血液；抗坏血酸/血液
Oxygen free radical harm in Piyinxu and Shenyinxu patientsOxygen free radical harm in Piyinxu and Shenyinxu patients
CHEN De-Zhen1, WEI Mu-Xin1, GU Yu-Chun1 and GUAN Xue-Zhong2
, 百拇医药
1Department of Traditional Chinese Medicine, The First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University, Nanjing 210029, Jiangsu Province, China
2Department of Traditional Chinese Medicine, Zhongshan Staff Sanatorium, Nanjing 210014
Subject headings Spleen deficiency/blood; Kidney deficiency/blood; superoxide dismutase/blood; malondialdehyde/blood; ascorbic acid/blood
Abstract
, 百拇医药
AIM To investigate the oxygen free radical oxide harm in patients with TCM-Piyinxu (Spleen-yin deficiency) and Shenyinxu (Kidney-yin deficiency).
METHODS According to the traditional Chinese medical diagnositic criteria, 30 Piyinxu and 16 Shenyinxu patients were observed and compared with 16 normal persons. Serum levels of total-SOD, CuZn-SOD (xanthine oxidasemetry), MDA(TBA), total anti-oxide capacity (colorimetry), Vit C (2,4 DNPH colorimetry), Vit E(HPLC), Cu and Zn (atomic absorption spectrophotometry) were measured in fasting state in the morning. All the data were presented as x±s. The one-way factorial ANOVA and multiple comparison tests (Scheffe) were used for comparison, and P<0.05 was taken as the level of significance.
, 百拇医药
RESULTS In Shenyinxu patients, the total-SOD and CuZn-SOD were significantly lower than in normal individuals and Piyinxu patients (F=17.69 and 30.32，P<0.05). Both in Piyinxu and Shenyinxu patients, the MDA was higher and the total anti-oxide capacity was lower than that of normal individuals (F=4.91 and 59.01，P<0.05). In Shenyinxu patients, the Vit E was significantly lower than those in normal individuals and Piyinxu patients (F=6.72, P<0.05).
CONCLUSION There was oxide injury in Piyinxu and Shenyinxu patients, but the mechanism of the formation and degree between Piyinxu and Shenyinxu was different.
, http://www.100md.com
中国图书资料分类号 R 255.502
摘 要
目的 从氧自由基损伤及机体抗氧化能力方面探讨脾阴虚证、肾阴虚证患者的客观病理学改变.
方法 观察脾阴虚组30例，肾阴虚组16例和健康人对照组16例. 取受检者清晨空腹静脉血分离血清后分别测定：总SOD，Cu,Zn-SOD(黄嘌呤氧化酶法)；MDA(TBA法)；总抗氧化能力(比色法). Vit C(2，4 DNPH比色法)；Vit E(高效液相色谱法)；Cu,Zn(原子吸收法)；数据以均数±标准差表示. 用单因素方差分析，Scheffe法作两两比较，P<0.05为显著性检验界值.
结果 总SOD及Cu,Zn-SOD肾阴虚组低于脾阴虚与健康人组(F=17.69和30.32，P<0.05). 脾阴虚组和肾阴虚组MDA高于健康人组(F=4.91，P<0.05)，而总抗氧化能力却低于健康人组(F=59.01，P<0.05). Vit E肾阴虚组低于脾阴虚组和健康人(F=6.72，P<0.05).
, 百拇医药
结论 脾阴虚证、肾阴虚证患者都有一定程度的氧自由基损伤，但在形成的原因和机体防御消除的机制等方面是不同的.
0 引言
自从1956年Harman et al首先提出自由基学说以来，人们对氧化损伤的认识日渐深入. 越来越多的科学研究结果表明，当自由基的产生与清除失去生理状态下的平衡和相对稳定时，这些化学性质活泼的物质就会对机体发生迅速作用和强烈损伤，从而产生一系列病理过程，导致多种疾病的发生、发展与加重. 我们观察了脾肾阴虚证血清中的超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(anti-oxide capacity)、维生素C(Vit C)、维生素E(Vit E)、及铜(Cu)、锌(Zn)的含量，旨在探讨脾肾阴虚证的自由基损伤情况.
1 对象和方法
1.1 对象 脾阴虚组30例，男16例，女14例，年龄26岁～70岁，平均45岁；肾阴虚组16例，男10例，女6例，年龄40岁～76岁，平均47岁. 两组均经四诊合参，符合脾阴虚证和肾阴虚证诊断标准[1]. 另设健康人对照组16例，男6例，女10例，年龄35岁～60岁，平均46岁，样本来自普查健康人群中无自觉不适，中医辨证无异常所见者.
, http://www.100md.com
1.2 方法 为了使数据能从同一基点较客观地反应氧化损伤，所有检测项目的标本来源于同一批采样. 取受检者晨间空腹静脉血8 mL，静置沉淀分离血清后测定. Cu,Zn用原子吸收法(日本岛津AA-6501原子吸收分光光度计)测定，血清Vit E用高效液相色谱法(HPLC-996二极管矩阵检测器，美国Waters公司)测定；Vit C用2，4 DNPH比色法测定(Du-650紫外分光光度计，美国Backman公司)，总SOD和Cu,Zn-SOD用黄嘌呤氧化酶法、MDA用TBA法、总抗氧化能力用比色法测定，试剂盒均由南京建成生物工程研究所供应.
统计学处理 数据以均数±标准差(
±s)表示. 用单因素方差分析、Scheffe法作两两比较，P<0.05为显著性检验界值.
, http://www.100md.com 2 结果
各组血清总SOD及Cu,Zn-SOD，脾阴虚组与健康人组间无显著性差异，肾阴虚组低于这两组(P<0.05，图1). 脾阴虚组和肾阴虚组MDA均高于健康人组且差异有显著性(P<0.05)，相反总抗氧化能力脾阴虚组和肾阴虚组均低于健康人组(P<0.05). Vit E肾阴虚证组低于脾阴虚证组和健康人组(P<0.05). Vit C三组均无显著性差异(图2). Cu,Zn三组无显著性差异(图3). 肾阴虚证组Zn/ Cu和脾阴虚组Vit E，较健康人组有下降的趋势，但差异无显著性.
图1 脾肾阴虚患者血清总SOD和Cu,ZnSOD活性.
aP<0.05 vs 健康人，cP<0.05 vs 肾阴虚.
图2 血清总抗氧能力(kU/ L), MDA(μmol/ L)，Vit C，Vit E(μg/ L)的比较.
, http://www.100md.com
aP<0.05 vs 健康人，cP<0.05 vs 肾阴虚.
图3 脾肾阴虚患者血清Cu和Zn(各组间差异无显著意义).
3 讨论
自由基是指含有不配对电子的原子、离子、分子和原子团. 体内常见的活性氧自由基有超氧化物阴离子自由基(O2-)、羟自由基(-OH)、过氧化氢(H2O2)和单线态氧(-O2). 当其产生和清除失去了生理状态下的平衡稳定时，就会对机体发生迅速作用和强烈损伤，氧自由基攻击质膜中的多不饱和脂肪酸，产生脂质过氧化物，其分解产物就是MDA，MDA有较强的毒性，它极易与磷脂蛋白质等发生反应，并在细胞内大量堆积，影响细胞正常功能. 氧化自由基的损伤能导致多种疾病的发生、发展[2，3].
, 百拇医药
生物体在其长期进化过程中，为防御氧自由基的损伤和破坏，组织和细胞建立了一整套完善的抗氧化防御系统. 包括作为大分子清除剂的抗氧化酶系统和抗氧化物系统. 其中SOD的作用在于能特异性地迅速捕捉O2-，使之变为H2O2. SOD又分Cu,Zn-SOD和Mn-SOD两种，故SOD的活性又与血清中的微量元素Cu,Zn，Mn的含量紧密相关. 此外作为体内天然的抗氧化剂主要有Vit E，Vit C，辅酶Q，羟基化合物等，它们均能捕获还原O2-. SOD与之相辅相成，构成了层层防线，使机体免受氧自由基的损害[4].
本结果表明，脾阴虚和肾阴虚组患者的MDA显著增高，总抗氧化能力下降. 提示这两个证候均有机体抗氧化能力下降及脂质过氧化清除不足的自由基损伤现象. MDA沉积可引起细胞亚微结构破坏，这点可能是两证的共同病理学基础. 然而形成自由基损伤的原因，两证之间似仍有差别. 脾阴虚的Vit E，Vit C，总SOD，Cu,Zn-SOD，Zn/ Cu和健康人相比无显著性差异，提示由Cu,Zn所维持的功能尚能维持，推测其自由基的损伤可能是过氧化物酶系统的异常造成的，多为细胞功能性的，损伤较局限，机体预防自由基损伤的能力较强. 肾阴虚的抗氧化剂Vit E有明显的下降. 推测作为供氢体的Vit E不能提供足够的氢还原自由基. 一方面加重了肾阴虚其他抗氧化剂和抗氧化酶的消耗，另一方面，也造成了与Vit E功能相关的一系列功能活动的减弱. 此外，肾阴虚的总SOD，Cu,Zn-SOD均明显下降，有可能导致体内自由基生成的增加，扰乱了细胞正常的亚微结构，引起线粒体系统供能不足，自由基使蛋白质变性，DNA，RNA转录受阻等一系列病理变化而表现出肾虚衰老和器官功能显著低下等. 肾阴虚微量元素Zn/ Cu也有下降趋势. Cu,Zn比例的失衡，将直接导致SOD活力的下降，也使整个机体协调失衡，免疫等功能低下.
, http://www.100md.com
总之，脾阴虚证、肾阴虚证都有一定程度的氧自由基损伤，但在形成的原因和机体防御消除的机制等方面是不同的. 推测脾阴虚证主要是过氧化物酶异常；而肾阴虚是由SOD活力下降，Vit E抗氧化物不足，血清中Zn/ Cu失衡等多因素影响，既有抗氧化酶体系变化，又有抗氧化物体系改变，其氧化损伤范围较广，程度较重，机体自我协调修复的难度也较大. 这是脾肾阴虚证客观病理学改变的不同点. 由于我们观察的例数不多，这方面的研究有待进一步深入.
陈德珍，女，1939-12-19生，汉族. 1965年南京医学院本科毕业，教授，主任医师，硕士研究生导师，江苏省名中西医结合专家，主要从事消化系统疾病的中西医结合临床和实验研究. 主持完成了省卫生厅、省教委、国家自然科学基金资助的有关脾阴虚证客观诊断的研究课题，发表论文30余篇.
国家自然科学基金资助课题部分内容，NO.3917002.
通讯作者 陈德珍，210029，南京医科大学第一附属医院中医科，江苏省南京市广州路300号.
, http://www.100md.com
Project supported by the National Natural Science Foundation of China, No.3917002.
Correspondence to:CHEN De-Zhen, Department of Traditional Chinese Medicine, The First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University, 300 Guangzhoulu, Nanjing 210029, Jiangsu Province, China
Tel. +86·25·3714511-6560
收稿日期 1998-03-04
4 参考文献
1 沈自尹整理. 中医虚证辩证参考标准. 中国中西医结合杂志，1983；3(2)：117-118
2 陈瑗，周玫. 自由基医学. 第1版. 北京：人民军医出版社，1991：4-7
3 Parks D. Oxygen radicals: mediators of gastrointestinal pathophysiology. Gut, 1989;30:293-294
4 王志均，朱文玉. 细胞保护. 第1版. 北京：北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1995：11-12, 百拇医药(陈德珍1 魏睦新1 顾宇春1 管学忠21)
单位：1南京医科大学第一附属医院中医科 江苏省南京市 210029;2江苏省钟山干部疗养院中医科 江苏省南京市 210014
关键词：脾虚/血液；肾虚/血液；超氧化物歧化酶类/血液；丙二醛/血液；抗坏血酸/血液
Oxygen free radical harm in Piyinxu and Shenyinxu patientsOxygen free radical harm in Piyinxu and Shenyinxu patients
CHEN De-Zhen1, WEI Mu-Xin1, GU Yu-Chun1 and GUAN Xue-Zhong2
, 百拇医药
1Department of Traditional Chinese Medicine, The First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University, Nanjing 210029, Jiangsu Province, China
2Department of Traditional Chinese Medicine, Zhongshan Staff Sanatorium, Nanjing 210014
Subject headings Spleen deficiency/blood; Kidney deficiency/blood; superoxide dismutase/blood; malondialdehyde/blood; ascorbic acid/blood
Abstract
, 百拇医药
AIM To investigate the oxygen free radical oxide harm in patients with TCM-Piyinxu (Spleen-yin deficiency) and Shenyinxu (Kidney-yin deficiency).
METHODS According to the traditional Chinese medical diagnositic criteria, 30 Piyinxu and 16 Shenyinxu patients were observed and compared with 16 normal persons. Serum levels of total-SOD, CuZn-SOD (xanthine oxidasemetry), MDA(TBA), total anti-oxide capacity (colorimetry), Vit C (2,4 DNPH colorimetry), Vit E(HPLC), Cu and Zn (atomic absorption spectrophotometry) were measured in fasting state in the morning. All the data were presented as x±s. The one-way factorial ANOVA and multiple comparison tests (Scheffe) were used for comparison, and P<0.05 was taken as the level of significance.
, 百拇医药
RESULTS In Shenyinxu patients, the total-SOD and CuZn-SOD were significantly lower than in normal individuals and Piyinxu patients (F=17.69 and 30.32，P<0.05). Both in Piyinxu and Shenyinxu patients, the MDA was higher and the total anti-oxide capacity was lower than that of normal individuals (F=4.91 and 59.01，P<0.05). In Shenyinxu patients, the Vit E was significantly lower than those in normal individuals and Piyinxu patients (F=6.72, P<0.05).
CONCLUSION There was oxide injury in Piyinxu and Shenyinxu patients, but the mechanism of the formation and degree between Piyinxu and Shenyinxu was different.
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中国图书资料分类号 R 255.502
摘 要
目的 从氧自由基损伤及机体抗氧化能力方面探讨脾阴虚证、肾阴虚证患者的客观病理学改变.
方法 观察脾阴虚组30例，肾阴虚组16例和健康人对照组16例. 取受检者清晨空腹静脉血分离血清后分别测定：总SOD，Cu,Zn-SOD(黄嘌呤氧化酶法)；MDA(TBA法)；总抗氧化能力(比色法). Vit C(2，4 DNPH比色法)；Vit E(高效液相色谱法)；Cu,Zn(原子吸收法)；数据以均数±标准差表示. 用单因素方差分析，Scheffe法作两两比较，P<0.05为显著性检验界值.
结果 总SOD及Cu,Zn-SOD肾阴虚组低于脾阴虚与健康人组(F=17.69和30.32，P<0.05). 脾阴虚组和肾阴虚组MDA高于健康人组(F=4.91，P<0.05)，而总抗氧化能力却低于健康人组(F=59.01，P<0.05). Vit E肾阴虚组低于脾阴虚组和健康人(F=6.72，P<0.05).
, 百拇医药
结论 脾阴虚证、肾阴虚证患者都有一定程度的氧自由基损伤，但在形成的原因和机体防御消除的机制等方面是不同的.
0 引言
自从1956年Harman et al首先提出自由基学说以来，人们对氧化损伤的认识日渐深入. 越来越多的科学研究结果表明，当自由基的产生与清除失去生理状态下的平衡和相对稳定时，这些化学性质活泼的物质就会对机体发生迅速作用和强烈损伤，从而产生一系列病理过程，导致多种疾病的发生、发展与加重. 我们观察了脾肾阴虚证血清中的超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(anti-oxide capacity)、维生素C(Vit C)、维生素E(Vit E)、及铜(Cu)、锌(Zn)的含量，旨在探讨脾肾阴虚证的自由基损伤情况.
1 对象和方法
1.1 对象 脾阴虚组30例，男16例，女14例，年龄26岁～70岁，平均45岁；肾阴虚组16例，男10例，女6例，年龄40岁～76岁，平均47岁. 两组均经四诊合参，符合脾阴虚证和肾阴虚证诊断标准[1]. 另设健康人对照组16例，男6例，女10例，年龄35岁～60岁，平均46岁，样本来自普查健康人群中无自觉不适，中医辨证无异常所见者.
, http://www.100md.com
1.2 方法 为了使数据能从同一基点较客观地反应氧化损伤，所有检测项目的标本来源于同一批采样. 取受检者晨间空腹静脉血8 mL，静置沉淀分离血清后测定. Cu,Zn用原子吸收法(日本岛津AA-6501原子吸收分光光度计)测定，血清Vit E用高效液相色谱法(HPLC-996二极管矩阵检测器，美国Waters公司)测定；Vit C用2，4 DNPH比色法测定(Du-650紫外分光光度计，美国Backman公司)，总SOD和Cu,Zn-SOD用黄嘌呤氧化酶法、MDA用TBA法、总抗氧化能力用比色法测定，试剂盒均由南京建成生物工程研究所供应.
统计学处理 数据以均数±标准差(
±s)表示. 用单因素方差分析、Scheffe法作两两比较，P<0.05为显著性检验界值., http://www.100md.com 2 结果
各组血清总SOD及Cu,Zn-SOD，脾阴虚组与健康人组间无显著性差异，肾阴虚组低于这两组(P<0.05，图1). 脾阴虚组和肾阴虚组MDA均高于健康人组且差异有显著性(P<0.05)，相反总抗氧化能力脾阴虚组和肾阴虚组均低于健康人组(P<0.05). Vit E肾阴虚证组低于脾阴虚证组和健康人组(P<0.05). Vit C三组均无显著性差异(图2). Cu,Zn三组无显著性差异(图3). 肾阴虚证组Zn/ Cu和脾阴虚组Vit E，较健康人组有下降的趋势，但差异无显著性.
图1 脾肾阴虚患者血清总SOD和Cu,ZnSOD活性.
aP<0.05 vs 健康人，cP<0.05 vs 肾阴虚.
图2 血清总抗氧能力(kU/ L), MDA(μmol/ L)，Vit C，Vit E(μg/ L)的比较.
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aP<0.05 vs 健康人，cP<0.05 vs 肾阴虚.
图3 脾肾阴虚患者血清Cu和Zn(各组间差异无显著意义).
3 讨论
自由基是指含有不配对电子的原子、离子、分子和原子团. 体内常见的活性氧自由基有超氧化物阴离子自由基(O2-)、羟自由基(-OH)、过氧化氢(H2O2)和单线态氧(-O2). 当其产生和清除失去了生理状态下的平衡稳定时，就会对机体发生迅速作用和强烈损伤，氧自由基攻击质膜中的多不饱和脂肪酸，产生脂质过氧化物，其分解产物就是MDA，MDA有较强的毒性，它极易与磷脂蛋白质等发生反应，并在细胞内大量堆积，影响细胞正常功能. 氧化自由基的损伤能导致多种疾病的发生、发展[2，3].
, 百拇医药
生物体在其长期进化过程中，为防御氧自由基的损伤和破坏，组织和细胞建立了一整套完善的抗氧化防御系统. 包括作为大分子清除剂的抗氧化酶系统和抗氧化物系统. 其中SOD的作用在于能特异性地迅速捕捉O2-，使之变为H2O2. SOD又分Cu,Zn-SOD和Mn-SOD两种，故SOD的活性又与血清中的微量元素Cu,Zn，Mn的含量紧密相关. 此外作为体内天然的抗氧化剂主要有Vit E，Vit C，辅酶Q，羟基化合物等，它们均能捕获还原O2-. SOD与之相辅相成，构成了层层防线，使机体免受氧自由基的损害[4].
本结果表明，脾阴虚和肾阴虚组患者的MDA显著增高，总抗氧化能力下降. 提示这两个证候均有机体抗氧化能力下降及脂质过氧化清除不足的自由基损伤现象. MDA沉积可引起细胞亚微结构破坏，这点可能是两证的共同病理学基础. 然而形成自由基损伤的原因，两证之间似仍有差别. 脾阴虚的Vit E，Vit C，总SOD，Cu,Zn-SOD，Zn/ Cu和健康人相比无显著性差异，提示由Cu,Zn所维持的功能尚能维持，推测其自由基的损伤可能是过氧化物酶系统的异常造成的，多为细胞功能性的，损伤较局限，机体预防自由基损伤的能力较强. 肾阴虚的抗氧化剂Vit E有明显的下降. 推测作为供氢体的Vit E不能提供足够的氢还原自由基. 一方面加重了肾阴虚其他抗氧化剂和抗氧化酶的消耗，另一方面，也造成了与Vit E功能相关的一系列功能活动的减弱. 此外，肾阴虚的总SOD，Cu,Zn-SOD均明显下降，有可能导致体内自由基生成的增加，扰乱了细胞正常的亚微结构，引起线粒体系统供能不足，自由基使蛋白质变性，DNA，RNA转录受阻等一系列病理变化而表现出肾虚衰老和器官功能显著低下等. 肾阴虚微量元素Zn/ Cu也有下降趋势. Cu,Zn比例的失衡，将直接导致SOD活力的下降，也使整个机体协调失衡，免疫等功能低下.
, http://www.100md.com
总之，脾阴虚证、肾阴虚证都有一定程度的氧自由基损伤，但在形成的原因和机体防御消除的机制等方面是不同的. 推测脾阴虚证主要是过氧化物酶异常；而肾阴虚是由SOD活力下降，Vit E抗氧化物不足，血清中Zn/ Cu失衡等多因素影响，既有抗氧化酶体系变化，又有抗氧化物体系改变，其氧化损伤范围较广，程度较重，机体自我协调修复的难度也较大. 这是脾肾阴虚证客观病理学改变的不同点. 由于我们观察的例数不多，这方面的研究有待进一步深入.
陈德珍，女，1939-12-19生，汉族. 1965年南京医学院本科毕业，教授，主任医师，硕士研究生导师，江苏省名中西医结合专家，主要从事消化系统疾病的中西医结合临床和实验研究. 主持完成了省卫生厅、省教委、国家自然科学基金资助的有关脾阴虚证客观诊断的研究课题，发表论文30余篇.
国家自然科学基金资助课题部分内容，NO.3917002.
通讯作者 陈德珍，210029，南京医科大学第一附属医院中医科，江苏省南京市广州路300号.
, http://www.100md.com
Project supported by the National Natural Science Foundation of China, No.3917002.
Correspondence to:CHEN De-Zhen, Department of Traditional Chinese Medicine, The First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University, 300 Guangzhoulu, Nanjing 210029, Jiangsu Province, China
Tel. +86·25·3714511-6560
收稿日期 1998-03-04
4 参考文献
1 沈自尹整理. 中医虚证辩证参考标准. 中国中西医结合杂志，1983；3(2)：117-118
2 陈瑗，周玫. 自由基医学. 第1版. 北京：人民军医出版社，1991：4-7
3 Parks D. Oxygen radicals: mediators of gastrointestinal pathophysiology. Gut, 1989;30:293-294
4 王志均，朱文玉. 细胞保护. 第1版. 北京：北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1995：11-12, 百拇医药(陈德珍1 魏睦新1 顾宇春1 管学忠21)