一氧化氮在豚鼠实验性哮喘中的作用
作者：张建勇 朱惠如 钱梓文 巫善美 余霞珍 张瑞芳
单位：563003 贵州，遵义医学院附属医院内科(张建勇)；上海医科大学华山医院呼吸科(朱惠如、巫善美、余霞珍、张瑞芳)；上海医科大学基础医学院生理教研室(钱梓文)
关键词：
中华医学杂志/980930
通过观察吸入一氧化氮(NO)前体L-精氨酸(L-Arg)和诱导型NO合酶抑制剂氨基胍(AG)分别观察对哮喘豚鼠气道反应性和气道炎症的影响, 探讨内源性NO在实验性哮喘中的作用及其可能的机制。
一、材料与方法
1.材料：雄性豚鼠31只,体重420～550g,上海生物制品研究所提供,随机分组；卵蛋白(OA),AG(美国Sigma公司产品)，L-Arg，(日本AJINOMICTO公司产品)。
, 百拇医药
2.方法：(1)建立豚鼠哮喘模型：按常规方法复制OA激发的豚鼠过敏性哮喘动物模型。(2)吸入AG对哮喘豚鼠气道炎症的影响：AG组7只,对照组9只,致敏第14天开始吸入OA 0.2mmol/L，每天1次,每次3分钟，AG组和对照组分别雾化吸入1.5 mmol/L AG溶液和生理盐水，每天1次,每次5分钟,共10天。末次OA激发后24小时处死动物,制备支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织切片。进行BALF细胞计数及白蛋白浓度测定(溴甲酚绿法)，光镜下观察肺组织切片。(3)吸入L-Arg对哮喘豚鼠气道反应性的影响：L-Arg组7只,对照组8只。参照文献[1]的方法测定肺阻力(RL)和肺顺应性(CL)。动物清醒后先测RL和CL基础值,然后让豚鼠连续吸入雾化的0.5 mmol/L OA共70次呼吸，
图1 吸入L-Arg对哮喘豚鼠肺阻力的影响
, 百拇医药
图2 吸入L-Arg对哮喘豚鼠肺顺应性的影响
随之L-Arg组和对照组分别吸入雾化的20 mmol/L L-Arg溶液和生理盐水各20次呼吸，每5分钟1次共6次。于吸OA完毕第1,2,3,5,10,15,20,25和30分钟重复测定RL和CL并计算OA激发后RL和CL值分别较其基础值升高和降低的百分比。
3.统计学处理：以均数±标准误表示，非配对资料t检验。
二、结果
1.吸入AG对哮喘豚鼠气道炎症的影响：见附表。对照组肺组织学改变为支气管壁增厚、管腔狭窄、上皮脱落、嗜酸粒细胞为主的炎性细胞浸润，与对照组比较，AG组病变明显减轻。
2.吸入L-Arg对哮喘豚鼠气道反应性的影响：OA激发后L-Arg组各时点RL上升和CL下降百分比均明显低于对照组(图1、2)，两组比较，其差异有显著性意义(P<0.05，P<0.01)。
, 百拇医药
三、讨论
气道慢性炎症是哮喘的主要病理特征,NO可作为重要的炎性介质参与气道炎症的发生。国外研究发现[1]，哮喘病人气道炎性细胞和上皮细胞的诱生型NOS(iNOS)活性和呼出气中NO浓度均明显高于正常人。炎性细胞释放的细胞因子可激活iNOS,一方面可导致NO大量生成而引起气道充血渗出及上皮损伤脱落；另一方面,iNOS持续激活导致底物L-Arg耗竭而还原O2生成O2和H2O2,加重缺氧和气道组织损害[2]。AG是近年来发现的一种选择性iNOS抑制剂, 其对iNOS活性的抑制作用比对结构型NOS(cNOS)强10～100倍。吸入AG能直接作用于气道,抑制iNOS活性以减少NO生成,从而阻断上述有害作用,减轻哮喘豚鼠的气道炎症反应。
国外有人报道[3]慢性缺氧大鼠离体肺血管的内皮依赖性舒张反应减低可被L-Arg所逆转,提示肺血管内皮依赖性舒张反应减低可能与缺氧时可利用的L-Arg减少使NO合成下降有关。认为在病理生理状态下，L-Arg可作为NOS的限速因素调节内源性NO的合成,这一观点不断得到肯定[4]
, http://www.100md.com
参考文献
1 Folkerts G, Henricks PAJ, Slootweg PJ, et al.Endotoxin-induced inflammation and injury of the guinea pig respiratory airways cause bronchial hyporeactivity. Am Rev Respir Dis,1988,137:1441-1448.
2 Gaston B, Drazen GW, Loscalzo J, et al.The biology of nitrogen oxides in the airways. Am J Respir Cirt Care Med,1994,149:538-551.
3 Eddahibi S,Adnot S,Carvilld C,et al.L-arginine restore endothelium dependent relaxation in pulmonary circulation in chronically hypoxic rats. Am J Physiol 1992,263:L194-200.
4 Mayer B.Nitric oxide/cyclic GMP-mediat signal transduction. Ann N Y Acad Sci, 1994,733:357-364., 百拇医药
单位：563003 贵州，遵义医学院附属医院内科(张建勇)；上海医科大学华山医院呼吸科(朱惠如、巫善美、余霞珍、张瑞芳)；上海医科大学基础医学院生理教研室(钱梓文)
关键词：
中华医学杂志/980930
通过观察吸入一氧化氮(NO)前体L-精氨酸(L-Arg)和诱导型NO合酶抑制剂氨基胍(AG)分别观察对哮喘豚鼠气道反应性和气道炎症的影响, 探讨内源性NO在实验性哮喘中的作用及其可能的机制。
一、材料与方法
1.材料：雄性豚鼠31只,体重420～550g,上海生物制品研究所提供,随机分组；卵蛋白(OA),AG(美国Sigma公司产品)，L-Arg，(日本AJINOMICTO公司产品)。
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2.方法：(1)建立豚鼠哮喘模型：按常规方法复制OA激发的豚鼠过敏性哮喘动物模型。(2)吸入AG对哮喘豚鼠气道炎症的影响：AG组7只,对照组9只,致敏第14天开始吸入OA 0.2mmol/L，每天1次,每次3分钟，AG组和对照组分别雾化吸入1.5 mmol/L AG溶液和生理盐水，每天1次,每次5分钟,共10天。末次OA激发后24小时处死动物,制备支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织切片。进行BALF细胞计数及白蛋白浓度测定(溴甲酚绿法)，光镜下观察肺组织切片。(3)吸入L-Arg对哮喘豚鼠气道反应性的影响：L-Arg组7只,对照组8只。参照文献[1]的方法测定肺阻力(RL)和肺顺应性(CL)。动物清醒后先测RL和CL基础值,然后让豚鼠连续吸入雾化的0.5 mmol/L OA共70次呼吸，
图1 吸入L-Arg对哮喘豚鼠肺阻力的影响
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图2 吸入L-Arg对哮喘豚鼠肺顺应性的影响
随之L-Arg组和对照组分别吸入雾化的20 mmol/L L-Arg溶液和生理盐水各20次呼吸，每5分钟1次共6次。于吸OA完毕第1,2,3,5,10,15,20,25和30分钟重复测定RL和CL并计算OA激发后RL和CL值分别较其基础值升高和降低的百分比。
3.统计学处理：以均数±标准误表示，非配对资料t检验。
二、结果
1.吸入AG对哮喘豚鼠气道炎症的影响：见附表。对照组肺组织学改变为支气管壁增厚、管腔狭窄、上皮脱落、嗜酸粒细胞为主的炎性细胞浸润，与对照组比较，AG组病变明显减轻。
2.吸入L-Arg对哮喘豚鼠气道反应性的影响：OA激发后L-Arg组各时点RL上升和CL下降百分比均明显低于对照组(图1、2)，两组比较，其差异有显著性意义(P<0.05，P<0.01)。
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三、讨论
气道慢性炎症是哮喘的主要病理特征,NO可作为重要的炎性介质参与气道炎症的发生。国外研究发现[1]，哮喘病人气道炎性细胞和上皮细胞的诱生型NOS(iNOS)活性和呼出气中NO浓度均明显高于正常人。炎性细胞释放的细胞因子可激活iNOS,一方面可导致NO大量生成而引起气道充血渗出及上皮损伤脱落；另一方面,iNOS持续激活导致底物L-Arg耗竭而还原O2生成O2和H2O2,加重缺氧和气道组织损害[2]。AG是近年来发现的一种选择性iNOS抑制剂, 其对iNOS活性的抑制作用比对结构型NOS(cNOS)强10～100倍。吸入AG能直接作用于气道,抑制iNOS活性以减少NO生成,从而阻断上述有害作用,减轻哮喘豚鼠的气道炎症反应。
国外有人报道[3]慢性缺氧大鼠离体肺血管的内皮依赖性舒张反应减低可被L-Arg所逆转,提示肺血管内皮依赖性舒张反应减低可能与缺氧时可利用的L-Arg减少使NO合成下降有关。认为在病理生理状态下，L-Arg可作为NOS的限速因素调节内源性NO的合成,这一观点不断得到肯定[4]
, http://www.100md.com
参考文献
1 Folkerts G, Henricks PAJ, Slootweg PJ, et al.Endotoxin-induced inflammation and injury of the guinea pig respiratory airways cause bronchial hyporeactivity. Am Rev Respir Dis,1988,137:1441-1448.
2 Gaston B, Drazen GW, Loscalzo J, et al.The biology of nitrogen oxides in the airways. Am J Respir Cirt Care Med,1994,149:538-551.
3 Eddahibi S,Adnot S,Carvilld C,et al.L-arginine restore endothelium dependent relaxation in pulmonary circulation in chronically hypoxic rats. Am J Physiol 1992,263:L194-200.
4 Mayer B.Nitric oxide/cyclic GMP-mediat signal transduction. Ann N Y Acad Sci, 1994,733:357-364., 百拇医药