肝硬变门脉高压形成中血浆TNF水平的变化
作者：楮延魁 吴金生 马庆久 高德明 王 新
单位：
关键词：肝硬化；高血压，门静脉/病理生理学；肿瘤坏死因子/血液；疾病模型，动物
华人消化杂志980909Plasma TNF levels during the formation of liver cirrhosis and portal hypertension in rats
CHU Yan-Kui, WU Jin-Sheng, MA Qing-Jiu, GAO De-Ming and WANG Xin
Department of General Surgery, Tangdu Hospital, Fourth Military Medical University, Xi＇an 710038, Shaanxi Province, China
, 百拇医药
Subject headings liver cirrhosis; hypertension, portal/physiopathology; tumor necrosis factor/blood; diseases models, animal
Abstract
AIM To evaluate the relationship between the level of TNF and liver damage in the development of liver cirrhosis and portal hypertension in cirrhotic rats.
METHODS Radioimmunoassy was used.
RESULTS The level of TNF (ng/?L) was significantly elevated in early (1.22±0.26), middle (1.21±0.23) and late (1.23±0.17) stage of liver cirrhosis as compared with that in control (0.97±0.23) group (P<0.05).
, 百拇医药
CONCLUSION The liver damage and liver cirrhosis were worsened with elevated TNF levels, and is not related to the changes of portal pressure.
中国图书资料分类号 R?575.21
摘 要
目的 观察SD大鼠肝硬变门脉高压形成过程中TNF浓度与肝损伤的关系.
方法 采用放射免疫测定法. 团体t检验.
结果 TNF水平(ng/?L)在早(1.22±0.26)中(1.21±0.23)晚(1.23±0.17)三期肝硬变中与正常组(0.97±0.23)相比明显升高(P<0.05)；与门脉压力变化无明显相关.
, http://www.100md.com
结论 TNF水平升高，加重了肝脏损伤和肝纤维化病变，与门脉压力变化无关.
0 引言
肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF)是重要的炎症递质[1]. TNF水平升高可引起局部炎症反应和器官的损害，在肝纤维化病变中具有重要的病因学意义. 我们通过复制肝硬变模型，按照韩德伍et al[1]肝硬变分期，采用放免法，测定早、中、晚三期鼠外周血TNF的浓度，以探讨TNF浓度变化与肝纤维化及门脉高压发病的关系.
1 材料和方法
1.1 材料 ♂健康SD大鼠70只，体重约250?g，随机分为对照组15只和实验组55只. 实验组按3?μL/?g，sc 600?mL/?L CCl4油溶液，2次/?wk. 对照组sc菜籽油3?μL/?g，均普通饲养，50?mL/?L乙醇溶液为实验鼠饮水. 肝硬变分期按韩德伍et al[1]分为：早期为脂变坏死期(25?d)；中期为纤维增生期(45?d)；晚期为假小叶形成期(65?d)。分别于25，45，65?d取实验鼠15只及对照鼠5只，10?g/?L戊巴比妥麻醉，剖腹，观察肝、脾、门静脉，穿刺门静脉测压，留取心脏血，冻存.
, 百拇医药
1.2 方法 ①TNF的测定：TNF试剂盒由解放军总医院东亚免疫所提供，测定方法按说明要求. ②肝功能测定：测定血清谷丙转氨酶(ALT)，血清总蛋白(TP)清蛋白(A)和球蛋白(G). ③肝脏病理学检查：100?mL/?L福尔马林固定作石蜡切片，HE染色，观察组织学改变.
统计学处理 采用团体t检验.2 结果
2.1 肝脏组织形态学变化及腹水 早期肝脏充血肿胀，光镜下肝细胞以脂变坏死为主；中期镜下见肝细胞有散在片状坏死，纤维增生活跃，有雏形假小叶形成；晚期肝脏呈结节状，质地硬；光镜下有大量假小叶形成. 晚期肝硬变大鼠15例中有8例发现淡黄色腹水2?mL～13?mL.
2.2 各期门静脉压力 晚期肝硬变大鼠门静脉压力为1.83?kPa±0.18?kPa，形成门脉高压(表1).
表1 SD大鼠早中晚期肝硬变门静脉压力(n=15,
±s, kPa) 病期
, 百拇医药
对照组
实验组
早
0.89±0.30
1.32±0.19b
中
0.89±0.30
1.45±0.22bd
晚
0.89±0.30
1.83±0.18bdf
bP<0.01，vs 对照组；dP<0.01，vs 早期；fP<0.01，vs 中期.
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2.3 肝功能及血浆TNF 肝功结果见表2. 在肝硬变各期进程中，TNF均显著高于对照组(P<0.05)，但三期间无显著差异(P>0.05，表3).
表2 SD大鼠早中晚期肝硬变肝功变化(n=15,±s) 肝功
对照组
早
中
晚
G(g/?L)
45.3±9.1
39.8±8.0a
, http://www.100md.com
41.1±7.3a
39.3±9.2a
A(g/?L)
18.6±5.8
15.6±4.4a
15.9±4.4a
14.6±4.1
ALT(nmol/?s)
2486±700
9788±1703b
, http://www.100md.com 9413±1389b
9519±2137b
aP<0.05，bP<0.01，vs 对照组.
表3 SD大鼠早中晚期肝硬变血浆TNF变化(±s,ng/?L) 分组
早
中
晚
对照组
0.97±0.23
, http://www.100md.com 0.97±0.23
0.97±0.23
实验组
1.22±0.26a
1.21±0.23a
1.23±0.17a
aP<0.05，vs 对照组.
3 讨论
3.1 TNF与肝功的关系 血清清蛋白和球蛋白在三期及正常对照间无差异(P>0.05). ALT与TNF测定结果一致，在实验三个时期均高于正常，实验三期间无显著性差别，提示TNF直接对肝脏产生损害作用，其血中浓度变化与ALT保持一致.
, 百拇医药
3.2 TNF与肝硬变门脉高压的关系 本结果表明，大鼠门脉压力在早、中、晚三个时期逐渐升高. 晚期门脉压力1.83?kPa±0.18?kPa形成门脉高压. 而TNF在早、中、晚三个时期测定值无显著差异. 提示门脉压力变化和门脉高压的形成与TNF血中浓度无直接线性关系.
3.3 TNF与肝纤维化的关系 TNF是一重要的炎症递质，TNF产生水平改变，可引起局部炎症反应，器官的损害. Yoshioka et al[2]研究表明慢中肝及肝硬变患者外周血单核细胞TNF-α含量较正常人增高，并与肝脏组织学病变程度相关. 王新et al[3]报道TNF与肝细胞坏死呈显著正相关. 唐世刚et al[4]报道TNF在肝坏死模型中呈一过性增高，在用药6?h达高峰，以后逐渐下降，并认为TNF一过性增高的原因可能是一次性用药在体内代谢后失去对单核细胞的再次诱导作用. TNF损害肝脏的机制，目前主要认为：①TNF-α介导脂类递质(TXA2 PAF)多肽递质(IL1 IL6)和氧自由基而致肝损伤[5]；②TNF诱导IL8激活中性粒细胞，释放溶酶体酶而引起肝损伤[6，7]；③通过诱导花生四烯酸产生白三烯导致肝组织出血坏死；④激活巨噬细胞. 本结果表明，在肝硬变不同时期，TNF明显高于正常，与上述报道一致. 但在三期肝硬变中，TNF无显著差异，可能与实验过程中持续用药和用药剂量相同有关. 结果提示，TNF作为炎症递质，在损害因素的作用下，血中含量升高，在不同阶段和水平上加重了肝脏内部的炎症损伤，促进了肝脏纤维病变形成.
, 百拇医药
4 参考文献
1 韩德伍，马学慧，赵元昌. 肝硬化动物模型研究. 山西医药杂志，1979；8(4)：1-2
2 Yoshioka K, Kakumu S, Arao M, Tsutsumi Y, Inoue M. Tumor necross factor alpha production by peripheral blood mononuclear cells of patients with chronic liver disease. Hepatology, 1989;10(5):769-773
3 王新，许才绂，赵国宁. 肝硬化患者血清TNFα含量变化及意义. 临床内科杂志，1996；13(2)：29-30
4 唐世刚，董祥家. 重症肝炎肿瘤坏死因子检测及肝细胞生长素对其作用机制研究. 中华内科杂志，1993；32(2)：97-99
, http://www.100md.com
5 刘预，康格非. TNF在内毒素所致肝损害中的作用. 国外医学临床生物化学与检验学分册，1994；15(1)：35-37
6 Hill DB, Marsano LS, Mclain CJ. Increased plasma interleukin-8 concentration in alcoholic hepatitis. Hepatology, 1993;18(3):576-580
7 Muto Y. Present status of fulminant hepatitis in Japan. Gastroenterol Jpn, 1993;28(Suppl 4):120-127, 百拇医药
单位：
关键词：肝硬化；高血压，门静脉/病理生理学；肿瘤坏死因子/血液；疾病模型，动物
华人消化杂志980909Plasma TNF levels during the formation of liver cirrhosis and portal hypertension in rats
CHU Yan-Kui, WU Jin-Sheng, MA Qing-Jiu, GAO De-Ming and WANG Xin
Department of General Surgery, Tangdu Hospital, Fourth Military Medical University, Xi＇an 710038, Shaanxi Province, China
, 百拇医药
Subject headings liver cirrhosis; hypertension, portal/physiopathology; tumor necrosis factor/blood; diseases models, animal
Abstract
AIM To evaluate the relationship between the level of TNF and liver damage in the development of liver cirrhosis and portal hypertension in cirrhotic rats.
METHODS Radioimmunoassy was used.
RESULTS The level of TNF (ng/?L) was significantly elevated in early (1.22±0.26), middle (1.21±0.23) and late (1.23±0.17) stage of liver cirrhosis as compared with that in control (0.97±0.23) group (P<0.05).
, 百拇医药
CONCLUSION The liver damage and liver cirrhosis were worsened with elevated TNF levels, and is not related to the changes of portal pressure.
中国图书资料分类号 R?575.21
摘 要
目的 观察SD大鼠肝硬变门脉高压形成过程中TNF浓度与肝损伤的关系.
方法 采用放射免疫测定法. 团体t检验.
结果 TNF水平(ng/?L)在早(1.22±0.26)中(1.21±0.23)晚(1.23±0.17)三期肝硬变中与正常组(0.97±0.23)相比明显升高(P<0.05)；与门脉压力变化无明显相关.
, http://www.100md.com
结论 TNF水平升高，加重了肝脏损伤和肝纤维化病变，与门脉压力变化无关.
0 引言
肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF)是重要的炎症递质[1]. TNF水平升高可引起局部炎症反应和器官的损害，在肝纤维化病变中具有重要的病因学意义. 我们通过复制肝硬变模型，按照韩德伍et al[1]肝硬变分期，采用放免法，测定早、中、晚三期鼠外周血TNF的浓度，以探讨TNF浓度变化与肝纤维化及门脉高压发病的关系.
1 材料和方法
1.1 材料 ♂健康SD大鼠70只，体重约250?g，随机分为对照组15只和实验组55只. 实验组按3?μL/?g，sc 600?mL/?L CCl4油溶液，2次/?wk. 对照组sc菜籽油3?μL/?g，均普通饲养，50?mL/?L乙醇溶液为实验鼠饮水. 肝硬变分期按韩德伍et al[1]分为：早期为脂变坏死期(25?d)；中期为纤维增生期(45?d)；晚期为假小叶形成期(65?d)。分别于25，45，65?d取实验鼠15只及对照鼠5只，10?g/?L戊巴比妥麻醉，剖腹，观察肝、脾、门静脉，穿刺门静脉测压，留取心脏血，冻存.
, 百拇医药
1.2 方法 ①TNF的测定：TNF试剂盒由解放军总医院东亚免疫所提供，测定方法按说明要求. ②肝功能测定：测定血清谷丙转氨酶(ALT)，血清总蛋白(TP)清蛋白(A)和球蛋白(G). ③肝脏病理学检查：100?mL/?L福尔马林固定作石蜡切片，HE染色，观察组织学改变.
统计学处理 采用团体t检验.2 结果
2.1 肝脏组织形态学变化及腹水 早期肝脏充血肿胀，光镜下肝细胞以脂变坏死为主；中期镜下见肝细胞有散在片状坏死，纤维增生活跃，有雏形假小叶形成；晚期肝脏呈结节状，质地硬；光镜下有大量假小叶形成. 晚期肝硬变大鼠15例中有8例发现淡黄色腹水2?mL～13?mL.
2.2 各期门静脉压力 晚期肝硬变大鼠门静脉压力为1.83?kPa±0.18?kPa，形成门脉高压(表1).
表1 SD大鼠早中晚期肝硬变门静脉压力(n=15,
±s, kPa) 病期, 百拇医药
对照组
实验组
早
0.89±0.30
1.32±0.19b
中
0.89±0.30
1.45±0.22bd
晚
0.89±0.30
1.83±0.18bdf
bP<0.01，vs 对照组；dP<0.01，vs 早期；fP<0.01，vs 中期.
, http://www.100md.com
2.3 肝功能及血浆TNF 肝功结果见表2. 在肝硬变各期进程中，TNF均显著高于对照组(P<0.05)，但三期间无显著差异(P>0.05，表3).
表2 SD大鼠早中晚期肝硬变肝功变化(n=15,
±s) 肝功对照组
早
中
晚
G(g/?L)
45.3±9.1
39.8±8.0a
, http://www.100md.com
41.1±7.3a
39.3±9.2a
A(g/?L)
18.6±5.8
15.6±4.4a
15.9±4.4a
14.6±4.1
ALT(nmol/?s)
2486±700
9788±1703b
, http://www.100md.com 9413±1389b
9519±2137b
aP<0.05，bP<0.01，vs 对照组.
表3 SD大鼠早中晚期肝硬变血浆TNF变化(
±s,ng/?L) 分组早
中
晚
对照组
0.97±0.23
, http://www.100md.com 0.97±0.23
0.97±0.23
实验组
1.22±0.26a
1.21±0.23a
1.23±0.17a
aP<0.05，vs 对照组.
3 讨论
3.1 TNF与肝功的关系 血清清蛋白和球蛋白在三期及正常对照间无差异(P>0.05). ALT与TNF测定结果一致，在实验三个时期均高于正常，实验三期间无显著性差别，提示TNF直接对肝脏产生损害作用，其血中浓度变化与ALT保持一致.
, 百拇医药
3.2 TNF与肝硬变门脉高压的关系 本结果表明，大鼠门脉压力在早、中、晚三个时期逐渐升高. 晚期门脉压力1.83?kPa±0.18?kPa形成门脉高压. 而TNF在早、中、晚三个时期测定值无显著差异. 提示门脉压力变化和门脉高压的形成与TNF血中浓度无直接线性关系.
3.3 TNF与肝纤维化的关系 TNF是一重要的炎症递质，TNF产生水平改变，可引起局部炎症反应，器官的损害. Yoshioka et al[2]研究表明慢中肝及肝硬变患者外周血单核细胞TNF-α含量较正常人增高，并与肝脏组织学病变程度相关. 王新et al[3]报道TNF与肝细胞坏死呈显著正相关. 唐世刚et al[4]报道TNF在肝坏死模型中呈一过性增高，在用药6?h达高峰，以后逐渐下降，并认为TNF一过性增高的原因可能是一次性用药在体内代谢后失去对单核细胞的再次诱导作用. TNF损害肝脏的机制，目前主要认为：①TNF-α介导脂类递质(TXA2 PAF)多肽递质(IL1 IL6)和氧自由基而致肝损伤[5]；②TNF诱导IL8激活中性粒细胞，释放溶酶体酶而引起肝损伤[6，7]；③通过诱导花生四烯酸产生白三烯导致肝组织出血坏死；④激活巨噬细胞. 本结果表明，在肝硬变不同时期，TNF明显高于正常，与上述报道一致. 但在三期肝硬变中，TNF无显著差异，可能与实验过程中持续用药和用药剂量相同有关. 结果提示，TNF作为炎症递质，在损害因素的作用下，血中含量升高，在不同阶段和水平上加重了肝脏内部的炎症损伤，促进了肝脏纤维病变形成.
, 百拇医药
4 参考文献
1 韩德伍，马学慧，赵元昌. 肝硬化动物模型研究. 山西医药杂志，1979；8(4)：1-2
2 Yoshioka K, Kakumu S, Arao M, Tsutsumi Y, Inoue M. Tumor necross factor alpha production by peripheral blood mononuclear cells of patients with chronic liver disease. Hepatology, 1989;10(5):769-773
3 王新，许才绂，赵国宁. 肝硬化患者血清TNFα含量变化及意义. 临床内科杂志，1996；13(2)：29-30
4 唐世刚，董祥家. 重症肝炎肿瘤坏死因子检测及肝细胞生长素对其作用机制研究. 中华内科杂志，1993；32(2)：97-99
, http://www.100md.com
5 刘预，康格非. TNF在内毒素所致肝损害中的作用. 国外医学临床生物化学与检验学分册，1994；15(1)：35-37
6 Hill DB, Marsano LS, Mclain CJ. Increased plasma interleukin-8 concentration in alcoholic hepatitis. Hepatology, 1993;18(3):576-580
7 Muto Y. Present status of fulminant hepatitis in Japan. Gastroenterol Jpn, 1993;28(Suppl 4):120-127, 百拇医药