尿红细胞Tamm-Horsfall蛋白免疫细胞化学染色法判断血尿性质
作者：那彦群 罗广承 宋毅 郭应禄
单位：100034 北京医科大学第一医院泌尿外科北京医科大学泌尿外科研究所
关键词：
中华医学杂志/981025 目前常用的鉴别内科血尿还是外科血尿的方法是尿红细胞形态分析，即红细胞位相检查。但是这种检查受尿样等的影响较大，有一定的主观性，使其应用受到一定的局限[1]。Tamm-Horsfall蛋白(THP)是肾小管髓袢升支粗段和远曲小管近段上皮细胞分泌的一种大分子糖蛋白。有证据表明肾小球来源的尿红细胞表面被覆TH P，而非肾小球来源的尿红细胞表面则没有，应用免疫细胞化学技术检测尿红细胞表面TH P可以鉴别肾小球性血尿和非肾小球性血尿[2]。为此作者选用SP法探讨了尿红细胞THP免疫染色确定血尿来源的可能性，并与尿红细胞位相检查进行了比较。
, http://www.100md.com 一、资料和方法
1.资料：我们选择自1996年11月至1997年4月在北京医科大学第一医院泌尿外科和肾内科住院的血尿患者46例，这些患者均有明确的临床诊断。泌尿外科住院患者26例，其中泌尿系结石11例，肾盂癌2例，膀胱癌8例，膀胱炎1例，膀胱结核1例，良性前列腺增生2例，前列腺导管腺癌1例，平均年龄54岁(28-87岁)，男性19例，女性7例；20例肾内科住院患者均为肾小球性疾病，均有肾脏穿刺病理结果，平均年龄28岁(15-57岁)，男性7例，女性13例。所有患者经尿常规分析证实有肉眼或镜下血尿。
主要试剂：兔抗人TH P抗体，免疫组织化学染色SP试剂盒。
2.免疫染色的主要方法：取新鲜尿标本10-30 ml，2 000 r/min，离心10分钟，弃上清液，滴少许PB S重新混悬，取一滴混悬液于载玻片上，自然风干后，以冷丙酮固定10分钟，然后染色，其步骤按试剂提供公司的说明。1%过氧化氢室温15分钟，10%正常羊血清室温封闭20分钟，然后加入兔抗人THP抗体，室温下孵育1小时，滴加生物素标记的羊抗兔IgG，室温下30分钟，滴加辣根酶标记的链霉卵白素，室温下1小时，DAB显色5～10分钟，苏木精复染，封片镜检。在每次染色过程中均有肾小球性血尿和非肾小球性血尿病例，并设置以PBS代替THP抗体的抗体替代对照。
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红细胞位相检查由我院肾脏病研究室完成。
3.结果判定：
(1) 免疫染色：我们在显微镜下计数观察红细胞至少50个，阳性者尿红细胞呈棕黄色，阴性者尿红细胞不着色。着色红细胞≥70%时为肾小球性血尿，着色红细胞≤30%时为非肾小球性血尿，介于二者之间的为混合性血尿[2]。
(2) 红细胞位相：畸形红细胞≥70%时为肾小球性血尿，畸形红细胞≤30%时为非肾小球性血尿，介于二者之间的为混合性血尿[3，4]。
4.统计学分析：采用SPSS统计软件，计数资料卡方检验。
二、结果
在20例肾小球性血尿中，免疫染色结果有18例与临床诊断符合(90%)，2例不符，这2例的肾穿病理分别为Ⅱ期膜性肾病和局灶性节段性肾小球硬化；而红细胞位相有16例结果与临床诊断符合(80%)，4例不符。在26例非肾小球性血尿中，免疫染色结果有23例与临床诊断符合(88.5%)，3例不符，这3例的临床诊断分别是肾结石、膀胱癌伴肾功能不全和前列腺导管腺癌各1例；而红细胞位相有14例结果与临床诊断符合(53.8%)，12例不符。
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以上结果经卡方检验，尿红细胞免疫染色和红细胞位相都能准确地鉴别肾小球性血尿和非肾小球性血尿(分别为P<0.001和P<0.05)。经配对卡方检验，两者的差异亦有统计学意义，尿红细胞免疫染色比红细胞位相更加敏感、准确、可靠(P<0.05)。它们的灵敏性、特异性和总符合率的对比分别是90%和80%、88.5%和53.8%、89.1%和65.2%。
三、讨论
血尿是泌尿外科和内科临床上常见症状之一，多数血尿患者可以经尿液化验、影像学或内窥镜检查得以明确诊断。但有部分患者，特别是一些无症状镜下血尿患者，虽经详尽检查，仍难以明确血尿来源。目前临床上常用红细胞位相方法判断出血部位，但其敏感性和准确性尚有待提高。
本研究应用免疫细胞化学染色方法，对46例血尿患者进行尿红细胞表面THP测定。与红细胞位相方法比较，其优点在于：(1) 敏感性高。(2) 准确性高。本研究表明它的特异性和总符合率分别为88.5%和89.1%；而红细胞位相分别为53.8%和65.2%，即使排除因尿红细胞较少而不能分型的病例，其特异性和总符合率分别为77.8%和83.3%，也较THP免疫染色法低。本文肾小球性血尿中有2例染色阴性，这可能与染色技术有关，也可能与尿红细胞上被覆的THP太少有关。非肾小球性血尿中有3例染色结果不符，其中2例判定为混合性血尿，1例判定为肾小球性血尿。文献认为，这是由于前列腺增生和肾结石引起肾脏损伤或肾功能损害的缘故。本研究组中阳性结果的1例前列腺导管腺癌和1例膀胱结核均伴有肾功能不全。(3) 结果判定更加客观。免疫染色因着色对比，背景清晰，结果判定一目了然；避免了红细胞位相的主观偏差。(4) 它受尿样等因素的影响比红细胞位相小。
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参考文献
1 Goldwasser P, Antignani A, Avran MM. Effect of urine chemistry on red cells. Nephron, 1991, 59：328-329.
2 Fukkuzaki A, Kaneto H, Ikeda S, et al. Determining the origin of hematuria by immunocytochemical staining of erythrocytes in urine for Tam-Horsfall protein. J Urol, 1996, 155：248-251.
3 Pollock, Liu-pei ling, Gyory AZ, et al. Dysmorphism of urinary red cells-value in diagnosis. Kidney Int, 1989, 36：1045-1049.
4 Decaestecker MP, Hall CL, Basterfield PT, et al. Lacalization of hematuria by analysis and phase contrast microscopy. Nephron, 1989, 52：170-173., http://www.100md.com
单位：100034 北京医科大学第一医院泌尿外科北京医科大学泌尿外科研究所
关键词：
中华医学杂志/981025 目前常用的鉴别内科血尿还是外科血尿的方法是尿红细胞形态分析，即红细胞位相检查。但是这种检查受尿样等的影响较大，有一定的主观性，使其应用受到一定的局限[1]。Tamm-Horsfall蛋白(THP)是肾小管髓袢升支粗段和远曲小管近段上皮细胞分泌的一种大分子糖蛋白。有证据表明肾小球来源的尿红细胞表面被覆TH P，而非肾小球来源的尿红细胞表面则没有，应用免疫细胞化学技术检测尿红细胞表面TH P可以鉴别肾小球性血尿和非肾小球性血尿[2]。为此作者选用SP法探讨了尿红细胞THP免疫染色确定血尿来源的可能性，并与尿红细胞位相检查进行了比较。
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1.资料：我们选择自1996年11月至1997年4月在北京医科大学第一医院泌尿外科和肾内科住院的血尿患者46例，这些患者均有明确的临床诊断。泌尿外科住院患者26例，其中泌尿系结石11例，肾盂癌2例，膀胱癌8例，膀胱炎1例，膀胱结核1例，良性前列腺增生2例，前列腺导管腺癌1例，平均年龄54岁(28-87岁)，男性19例，女性7例；20例肾内科住院患者均为肾小球性疾病，均有肾脏穿刺病理结果，平均年龄28岁(15-57岁)，男性7例，女性13例。所有患者经尿常规分析证实有肉眼或镜下血尿。
主要试剂：兔抗人TH P抗体，免疫组织化学染色SP试剂盒。
2.免疫染色的主要方法：取新鲜尿标本10-30 ml，2 000 r/min，离心10分钟，弃上清液，滴少许PB S重新混悬，取一滴混悬液于载玻片上，自然风干后，以冷丙酮固定10分钟，然后染色，其步骤按试剂提供公司的说明。1%过氧化氢室温15分钟，10%正常羊血清室温封闭20分钟，然后加入兔抗人THP抗体，室温下孵育1小时，滴加生物素标记的羊抗兔IgG，室温下30分钟，滴加辣根酶标记的链霉卵白素，室温下1小时，DAB显色5～10分钟，苏木精复染，封片镜检。在每次染色过程中均有肾小球性血尿和非肾小球性血尿病例，并设置以PBS代替THP抗体的抗体替代对照。
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红细胞位相检查由我院肾脏病研究室完成。
3.结果判定：
(1) 免疫染色：我们在显微镜下计数观察红细胞至少50个，阳性者尿红细胞呈棕黄色，阴性者尿红细胞不着色。着色红细胞≥70%时为肾小球性血尿，着色红细胞≤30%时为非肾小球性血尿，介于二者之间的为混合性血尿[2]。
(2) 红细胞位相：畸形红细胞≥70%时为肾小球性血尿，畸形红细胞≤30%时为非肾小球性血尿，介于二者之间的为混合性血尿[3，4]。
4.统计学分析：采用SPSS统计软件，计数资料卡方检验。
二、结果
在20例肾小球性血尿中，免疫染色结果有18例与临床诊断符合(90%)，2例不符，这2例的肾穿病理分别为Ⅱ期膜性肾病和局灶性节段性肾小球硬化；而红细胞位相有16例结果与临床诊断符合(80%)，4例不符。在26例非肾小球性血尿中，免疫染色结果有23例与临床诊断符合(88.5%)，3例不符，这3例的临床诊断分别是肾结石、膀胱癌伴肾功能不全和前列腺导管腺癌各1例；而红细胞位相有14例结果与临床诊断符合(53.8%)，12例不符。
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以上结果经卡方检验，尿红细胞免疫染色和红细胞位相都能准确地鉴别肾小球性血尿和非肾小球性血尿(分别为P<0.001和P<0.05)。经配对卡方检验，两者的差异亦有统计学意义，尿红细胞免疫染色比红细胞位相更加敏感、准确、可靠(P<0.05)。它们的灵敏性、特异性和总符合率的对比分别是90%和80%、88.5%和53.8%、89.1%和65.2%。
三、讨论
血尿是泌尿外科和内科临床上常见症状之一，多数血尿患者可以经尿液化验、影像学或内窥镜检查得以明确诊断。但有部分患者，特别是一些无症状镜下血尿患者，虽经详尽检查，仍难以明确血尿来源。目前临床上常用红细胞位相方法判断出血部位，但其敏感性和准确性尚有待提高。
本研究应用免疫细胞化学染色方法，对46例血尿患者进行尿红细胞表面THP测定。与红细胞位相方法比较，其优点在于：(1) 敏感性高。(2) 准确性高。本研究表明它的特异性和总符合率分别为88.5%和89.1%；而红细胞位相分别为53.8%和65.2%，即使排除因尿红细胞较少而不能分型的病例，其特异性和总符合率分别为77.8%和83.3%，也较THP免疫染色法低。本文肾小球性血尿中有2例染色阴性，这可能与染色技术有关，也可能与尿红细胞上被覆的THP太少有关。非肾小球性血尿中有3例染色结果不符，其中2例判定为混合性血尿，1例判定为肾小球性血尿。文献认为，这是由于前列腺增生和肾结石引起肾脏损伤或肾功能损害的缘故。本研究组中阳性结果的1例前列腺导管腺癌和1例膀胱结核均伴有肾功能不全。(3) 结果判定更加客观。免疫染色因着色对比，背景清晰，结果判定一目了然；避免了红细胞位相的主观偏差。(4) 它受尿样等因素的影响比红细胞位相小。
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参考文献
1 Goldwasser P, Antignani A, Avran MM. Effect of urine chemistry on red cells. Nephron, 1991, 59：328-329.
2 Fukkuzaki A, Kaneto H, Ikeda S, et al. Determining the origin of hematuria by immunocytochemical staining of erythrocytes in urine for Tam-Horsfall protein. J Urol, 1996, 155：248-251.
3 Pollock, Liu-pei ling, Gyory AZ, et al. Dysmorphism of urinary red cells-value in diagnosis. Kidney Int, 1989, 36：1045-1049.
4 Decaestecker MP, Hall CL, Basterfield PT, et al. Lacalization of hematuria by analysis and phase contrast microscopy. Nephron, 1989, 52：170-173., http://www.100md.com