磺脲类药物受体基因多态性与非胰岛素依赖型糖尿病的相关性
作者：纪立农 韩学尧 王虹 毛腾淑
单位：100044 北京医科大学人民医院内分泌科
关键词：糖尿病，非胰岛素依赖型；基因；受体，药物
中华医学杂志/981018 【摘要】 目的 了解磺脲类药物受体(SUR)基因与中国人非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)的相关关系。方法 采用多聚酶链式反应-限制性酶切片段长度多态性分析技术(PCR-RFLP)，对位于SUR基因第22外显子及第24内含子的多态性位点同中国人NIDDM的相关性进行了分子遗传学研究。结果 SUR基因第24内含子的“c”等位基因频率在中国人NIDDM人群中显著增高(68%比55%，P=0.007)，且“cc”纯合子基因型的频率亦在NIDDM人群中显著增高(41.9%比27.7%，P=0.013，OR=4.39，CI：1.5～12.7)。结论 SUR基因的多态性与不同人种的NIDDM具有相关性，提示该基因在NIDDM的发病中具有重要作用。
, http://www.100md.com
Sulfonylurea receptor gene polymorphism is associated with noni-nsulin dependent diabetes mellitus in Chinese population
Ji Linong, Han Xueyao, Wang Hong, et al. Department of Endocrinology, People′s Hospital, Beijing Medical University, Beijing 100044
【Abstract】 Objective To test the role of Sulfonylurea receptor gene(SUR) in the pathogenesis of NIDDM in Chinese population. Methods We studied the polymorphisms of the SUR gene in intron 24 and exon 22 by polymerase chain reaction(PCR) and appropriate restriction enzyme (PCR-RFLP) in 86 NIDDM patients with at least two first degree diabetic relatives and 148 normal control subjects. Results The frequency of “c” allele of intron 24 in NIDDM patients was significantly increased as compared with that in the control subjects (68.02%vs. 55.41, P=0.007), and the frequency of the “cc” genotype of intron 24 in the NIDDM group was also significantly higher than that in the control group (41.86% vs. 27.7%, P=0.013 ,OR=4. 39, CI: 1.52-12.66). The polymorphism of exon 22 described in the Caucasian population was not detected.Conclusion The association of the polymorphism of SUR gene with NIDDM in different races suggests that the SUR gene or nearby gene may play an important role in the genetic susceptibility of NIDDM.
, 百拇医药
【Key words】 Diabetes mellitus, Non-insulin-dependent Gene Receptors, drug
(Natl Med J China, 1998, 78：774-775)
1995年，磺脲类药物受体(SUR)基因被克隆，并被定位在人类第11号染色体短臂[1]。同年，Thomas等[2]在婴儿家族性持续性高胰岛素性低血糖症的患者中发现了SUR基因的突变。1996年，Inoue等[3]发现SUR基因多态性同NIDDM相关。基于SUR基因在调节胰岛β细胞分泌胰岛素中的重要作用及其在决定NIDDM遗传性中的可能作用，我们对SUR基因的上述多态性在中国人NIDDM及正常对照人中的分布进行了研究。
对象与方法
, http://www.100md.com 一、研究对象
1.NIDDM患者86例，平均年龄49±11岁，为本科目前NIDDM家系研究中的先证者，北方籍。NIDDM按WHO诊断标准确诊，入选标准除糖尿病外，还需在一级家属中至少有2人以上确诊为糖尿病，ICA(抗胰岛细胞抗体)和GAD(抗谷氨酸脱羧酶抗体)实验阴性。
2.正常对照：148人，年龄61±7岁,为本院及北京市餐饮业健康职工，北方籍，无糖尿病史，糖耐量减低史及糖尿病家族史，口服葡萄糖耐量试验(OGTT)除外糖尿病及糖耐量低减。
二、方法
1.DNA提取：所有DNA均参照文献[3]进行。
2.多态性位点的检测与基因分型：参照文献[4]进行。(1)第22外显子第55位核苷酸C→T多态性：该多态性位点可由限制性内切每Bsa01识别。用Bsa01(Promega)酶解含有该多态性位点的PCR产物(145 bp，引物序列：22F:5'-AGA GCT CAG TAT GCC TTT CC-3′； 22R：5′-GGT GAT GTG GCT CCC TTG G-3′)。第55位核甘酸为C的等位基因的PCR产物，将被酶解为54 bp和91 bp 2个片断，而55位核苷酸为T的等位基因的PCR产物不被Bsa01消化。(2) 第24内含子-3t→c多态性：该多态性位点可被限制内切酶Pstl识别，含有-3t的等位基因的PCR产物(202bp，引物序列：24F：5′-CCC GGC CCC ACT CAC ATC TG-3′; 24R:5′-GGA GGA TGG TTA AAA GGA GAT T-3′)可被Pstl酶解为144 bp和58 bp片断，含-3c等位基因的PCR产物则不被消化。
, 百拇医药
三、统计分析
以Hardy-Weinberg平衡法检验各组基因频率的群体代表性，以χ2检验NIDDM组与正常对照组之间等位基因型分布的差异。
结果
1.第22外显子55位C→T多态性，在86例NIDDM患者及148正常对照中未检出SUR基因第22外显子的C→T多态性。
2.第24内含子-3t→c多态性：(附表)，SUR基因第24内含子-3t→c多态性可在NIDDM组及正常对照组检测到。同正常对照组相比，“c” 等位基因的频率在NIDDM显著升高(68%比55%；χ2=7.219，P=0.007)。
3.第24内含子-3t→c多态性的基因型频率：“cc”基因型(纯合子)的分布在NIDDM组中的分布显著升高(42%比28%；χ2=8.615，P=0.013；OR=4.39；CI=1.5～12.6)
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附表 SUR基因第24内含子-3t→c多态性等位基因
及基因型频率的分布 组别
例数
基因型
等位基因
cc
ct
tt
c
t
NIDDM组
86
36(0.42)
, http://www.100md.com
45(0.52)
5(0.06)
117(0.68)
55(0.32)
对照组
148
41(0.28)
82(0.55)
25(0.17)
164(0.55)
132(0.45)
讨论
, http://www.100md.com
本研究验证了SUR基因同中国人NIDDM遗传易感性的相关性。
1.因环境因素亦在糖尿病的发病中占有重要地位,为了突出受遗传因素影响相对大的NIDDM人群,减少NIDDM遗传学研究中的“信噪比”,我们在NIDDM的病例选择上集中于“遗传”性NIDDM，即有一级家属患NIDDM糖尿病患者，此外，为除外迟发型的胰岛素依赖型糖尿病,在病例选择上,我们还除外了ICA和GAD试验阳性的糖尿病患者。
2.本研究结果表明,SUR基因第24内含子-3位核苷酸为“c”的等位基因，其频率及“cc”纯合子基因型的频率在NIDDM人群中显著增高,说明“c”所代表的单倍体在NIDDM遗传易感性中的重要作用。SUR基因的多态性在不同的人种NIDDM人群中的一致性分布更加肯定了该基因或位于同染色体邻近基因的缺陷在导致NIDDM中的作用。
3.婴儿家族性持续性高胰岛素性低血糖症为染色体隐性遗传疾病,迄今为止,在对该症的研究中,所有患者携带的SUR基因突变均为纯合型,即患者为父母双方得到的染色体均含有缺陷的SUR基因，说明SUR基因缺陷的致病机制为常染色体隐性遗传,上述“cc”基因型在NIDDM人群中的显著增高符合上述机制,基于对其他基因内含子-3位点的研究[4]，该位点的点突变可以导致基因转录过程中内含子的剪切失败或外显子的不转录,但SUR基因第24内含子-3t→c的变化是否对SUR基因的功能产生影响,迄今尚未见报道。如上述-3t→c转变仅为多态性,则说明导致NIDDM的缺陷同-3c位点存在着连锁不平衡，SUR基因由39个外显子构成，除Inoue等[3]采用SSCP方法筛查了35位有NIDDM家族史的白人NIDDM患者SUR基因19个外显子外(未发现导致蛋白结构变化的基因突变)，尚没有对NIDDM患者SUR基因全部外显子以及启动子区的突变筛查的报道。
, http://www.100md.com
4.本研究未发现，第22外显子第55位核苷酸C→T多态性。同Inoue等[3]在白人中发现“T”等位基因的频率(正常人群1%～3%,NIDDM人群6%～8%)相比,该多态性在中国人中较罕见。
参考文献
1 Aguilar B L, Nichols CG, Wechsler SW, et al. Cloning of the beta cell high- affinity sulfonylurea receptor: a regulator of insulin secretion. Science 1995，268：423-426.}
2 Thomas P M, Cote G J, Hallman DM，et al. Homozygosity mapping, to chromosome 11p of the gene for familial persistent hyperinsulinemi hypoglycemia of infancy. Am J Hum Genet. 1995，56：416-421.
, 百拇医药
3 Inoue H, Ferrer J, Welling CM, et al .Sequence variants in sulfonylurea receptor(SUR) gene are associated with NIDDM in Caucasians. Diabetes 1996，45：825-831.
4 Bienvenu T, Hubert D, Fonknechten N. Unexpected inactivation of acceptor consensus splice sequence by -3c to t transition in intron 2 of the CTFR gene.Am J Hum Genet，1994，94：65-68.
(收稿：1997-12-25 修回：1998-06-24), http://www.100md.com
单位：100044 北京医科大学人民医院内分泌科
关键词：糖尿病，非胰岛素依赖型；基因；受体，药物
中华医学杂志/981018 【摘要】 目的 了解磺脲类药物受体(SUR)基因与中国人非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)的相关关系。方法 采用多聚酶链式反应-限制性酶切片段长度多态性分析技术(PCR-RFLP)，对位于SUR基因第22外显子及第24内含子的多态性位点同中国人NIDDM的相关性进行了分子遗传学研究。结果 SUR基因第24内含子的“c”等位基因频率在中国人NIDDM人群中显著增高(68%比55%，P=0.007)，且“cc”纯合子基因型的频率亦在NIDDM人群中显著增高(41.9%比27.7%，P=0.013，OR=4.39，CI：1.5～12.7)。结论 SUR基因的多态性与不同人种的NIDDM具有相关性，提示该基因在NIDDM的发病中具有重要作用。
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Sulfonylurea receptor gene polymorphism is associated with noni-nsulin dependent diabetes mellitus in Chinese population
Ji Linong, Han Xueyao, Wang Hong, et al. Department of Endocrinology, People′s Hospital, Beijing Medical University, Beijing 100044
【Abstract】 Objective To test the role of Sulfonylurea receptor gene(SUR) in the pathogenesis of NIDDM in Chinese population. Methods We studied the polymorphisms of the SUR gene in intron 24 and exon 22 by polymerase chain reaction(PCR) and appropriate restriction enzyme (PCR-RFLP) in 86 NIDDM patients with at least two first degree diabetic relatives and 148 normal control subjects. Results The frequency of “c” allele of intron 24 in NIDDM patients was significantly increased as compared with that in the control subjects (68.02%vs. 55.41, P=0.007), and the frequency of the “cc” genotype of intron 24 in the NIDDM group was also significantly higher than that in the control group (41.86% vs. 27.7%, P=0.013 ,OR=4. 39, CI: 1.52-12.66). The polymorphism of exon 22 described in the Caucasian population was not detected.Conclusion The association of the polymorphism of SUR gene with NIDDM in different races suggests that the SUR gene or nearby gene may play an important role in the genetic susceptibility of NIDDM.
, 百拇医药
【Key words】 Diabetes mellitus, Non-insulin-dependent Gene Receptors, drug
(Natl Med J China, 1998, 78：774-775)
1995年，磺脲类药物受体(SUR)基因被克隆，并被定位在人类第11号染色体短臂[1]。同年，Thomas等[2]在婴儿家族性持续性高胰岛素性低血糖症的患者中发现了SUR基因的突变。1996年，Inoue等[3]发现SUR基因多态性同NIDDM相关。基于SUR基因在调节胰岛β细胞分泌胰岛素中的重要作用及其在决定NIDDM遗传性中的可能作用，我们对SUR基因的上述多态性在中国人NIDDM及正常对照人中的分布进行了研究。
对象与方法
, http://www.100md.com 一、研究对象
1.NIDDM患者86例，平均年龄49±11岁，为本科目前NIDDM家系研究中的先证者，北方籍。NIDDM按WHO诊断标准确诊，入选标准除糖尿病外，还需在一级家属中至少有2人以上确诊为糖尿病，ICA(抗胰岛细胞抗体)和GAD(抗谷氨酸脱羧酶抗体)实验阴性。
2.正常对照：148人，年龄61±7岁,为本院及北京市餐饮业健康职工，北方籍，无糖尿病史，糖耐量减低史及糖尿病家族史，口服葡萄糖耐量试验(OGTT)除外糖尿病及糖耐量低减。
二、方法
1.DNA提取：所有DNA均参照文献[3]进行。
2.多态性位点的检测与基因分型：参照文献[4]进行。(1)第22外显子第55位核苷酸C→T多态性：该多态性位点可由限制性内切每Bsa01识别。用Bsa01(Promega)酶解含有该多态性位点的PCR产物(145 bp，引物序列：22F:5'-AGA GCT CAG TAT GCC TTT CC-3′； 22R：5′-GGT GAT GTG GCT CCC TTG G-3′)。第55位核甘酸为C的等位基因的PCR产物，将被酶解为54 bp和91 bp 2个片断，而55位核苷酸为T的等位基因的PCR产物不被Bsa01消化。(2) 第24内含子-3t→c多态性：该多态性位点可被限制内切酶Pstl识别，含有-3t的等位基因的PCR产物(202bp，引物序列：24F：5′-CCC GGC CCC ACT CAC ATC TG-3′; 24R:5′-GGA GGA TGG TTA AAA GGA GAT T-3′)可被Pstl酶解为144 bp和58 bp片断，含-3c等位基因的PCR产物则不被消化。
, 百拇医药
三、统计分析
以Hardy-Weinberg平衡法检验各组基因频率的群体代表性，以χ2检验NIDDM组与正常对照组之间等位基因型分布的差异。
结果
1.第22外显子55位C→T多态性，在86例NIDDM患者及148正常对照中未检出SUR基因第22外显子的C→T多态性。
2.第24内含子-3t→c多态性：(附表)，SUR基因第24内含子-3t→c多态性可在NIDDM组及正常对照组检测到。同正常对照组相比，“c” 等位基因的频率在NIDDM显著升高(68%比55%；χ2=7.219，P=0.007)。
3.第24内含子-3t→c多态性的基因型频率：“cc”基因型(纯合子)的分布在NIDDM组中的分布显著升高(42%比28%；χ2=8.615，P=0.013；OR=4.39；CI=1.5～12.6)
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附表 SUR基因第24内含子-3t→c多态性等位基因
及基因型频率的分布 组别
例数
基因型
等位基因
cc
ct
tt
c
t
NIDDM组
86
36(0.42)
, http://www.100md.com
45(0.52)
5(0.06)
117(0.68)
55(0.32)
对照组
148
41(0.28)
82(0.55)
25(0.17)
164(0.55)
132(0.45)
讨论
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本研究验证了SUR基因同中国人NIDDM遗传易感性的相关性。
1.因环境因素亦在糖尿病的发病中占有重要地位,为了突出受遗传因素影响相对大的NIDDM人群,减少NIDDM遗传学研究中的“信噪比”,我们在NIDDM的病例选择上集中于“遗传”性NIDDM，即有一级家属患NIDDM糖尿病患者，此外，为除外迟发型的胰岛素依赖型糖尿病,在病例选择上,我们还除外了ICA和GAD试验阳性的糖尿病患者。
2.本研究结果表明,SUR基因第24内含子-3位核苷酸为“c”的等位基因，其频率及“cc”纯合子基因型的频率在NIDDM人群中显著增高,说明“c”所代表的单倍体在NIDDM遗传易感性中的重要作用。SUR基因的多态性在不同的人种NIDDM人群中的一致性分布更加肯定了该基因或位于同染色体邻近基因的缺陷在导致NIDDM中的作用。
3.婴儿家族性持续性高胰岛素性低血糖症为染色体隐性遗传疾病,迄今为止,在对该症的研究中,所有患者携带的SUR基因突变均为纯合型,即患者为父母双方得到的染色体均含有缺陷的SUR基因，说明SUR基因缺陷的致病机制为常染色体隐性遗传,上述“cc”基因型在NIDDM人群中的显著增高符合上述机制,基于对其他基因内含子-3位点的研究[4]，该位点的点突变可以导致基因转录过程中内含子的剪切失败或外显子的不转录,但SUR基因第24内含子-3t→c的变化是否对SUR基因的功能产生影响,迄今尚未见报道。如上述-3t→c转变仅为多态性,则说明导致NIDDM的缺陷同-3c位点存在着连锁不平衡，SUR基因由39个外显子构成，除Inoue等[3]采用SSCP方法筛查了35位有NIDDM家族史的白人NIDDM患者SUR基因19个外显子外(未发现导致蛋白结构变化的基因突变)，尚没有对NIDDM患者SUR基因全部外显子以及启动子区的突变筛查的报道。
, http://www.100md.com
4.本研究未发现，第22外显子第55位核苷酸C→T多态性。同Inoue等[3]在白人中发现“T”等位基因的频率(正常人群1%～3%,NIDDM人群6%～8%)相比,该多态性在中国人中较罕见。
参考文献
1 Aguilar B L, Nichols CG, Wechsler SW, et al. Cloning of the beta cell high- affinity sulfonylurea receptor: a regulator of insulin secretion. Science 1995，268：423-426.}
2 Thomas P M, Cote G J, Hallman DM，et al. Homozygosity mapping, to chromosome 11p of the gene for familial persistent hyperinsulinemi hypoglycemia of infancy. Am J Hum Genet. 1995，56：416-421.
, 百拇医药
3 Inoue H, Ferrer J, Welling CM, et al .Sequence variants in sulfonylurea receptor(SUR) gene are associated with NIDDM in Caucasians. Diabetes 1996，45：825-831.
4 Bienvenu T, Hubert D, Fonknechten N. Unexpected inactivation of acceptor consensus splice sequence by -3c to t transition in intron 2 of the CTFR gene.Am J Hum Genet，1994，94：65-68.
(收稿：1997-12-25 修回：1998-06-24), http://www.100md.com