血管内皮生长因子在颊癌组织中的表达和分布
作者：王大章 杨西川 何志秀 郑光勇
单位：610041 成都，华西医科大学口腔医学院口腔颌面外科教研室(王大章、杨西川、郑光勇)，口腔病理科(何志秀)
关键词：
中华医学杂志981118
血管内皮生长因子(VEGF)与血管通透因子(VPF)是同一基因家族的同系物。VEGF能促进肿瘤生长已得到证实[1]。但在颊癌组织中的表达还少见报道。我们检测了颊癌组织中VEGF的表达及分布情况，旨在了解颊癌生长与VEGF的关系，为探索口腔癌瘤的抗血管生成治疗提供实验依据。
一、材料与方法
1.材料：Balb/c鼠购于华西医科大学动物所。根据抗原指数等方案，VEGF合成肽设计为位于氨基端1-50残基内一段序列，在ABI431固相肽合成仪上合成。VEGF多抗、兔抗鼠IgG辣根过氧化物酶的交联物(兔抗鼠-HRP)及二氨基联苯胺(DAB)购于Sigma公司。颊癌组织标本共20例，由本院病理科提供，A组分化程度较好(高、中分化)16例，B组分化程度差(低分化)4例。
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2.方法：VEGF合成肽抗VEGF单克隆抗体(MAB)由常规方法建立。将杂交瘤细胞接种Balb/c鼠，收集腹水，40%硫酸铵盐析后用紫外分光光度计测A280、A260，计算蛋白含量为2.5 mg/ml。VEGF免疫组织化学：约5 μm的石蜡切片，脱蜡后先经0.3% H2O2甲醇溶液浸泡30秒，然后滴加正常羊血清，37 ℃下10秒钟，一抗分别为抗VEGF合成肽MAB(工作浓度为1∶30)或VEGF多抗(工作浓度为1∶50)，滴加至切片上，37 ℃孵育1小时，然后滴加兔抗鼠—HRP，室温反应1小时后洗涤，以含有DAB及H2O2的底物液显色，显微镜下棕色着染为阳性，深棕色为强阳性。
二、结果
两种抗体检测20例颊癌组织中VEGF的表达，结果一致，阳性率 为80%。A组16例中，除4例未见明显着色外，余12例均为阳性，B组4例均呈强阳性。单克抗隆抗体背景染色明显较弱，VEGF多抗除癌组织有着染外，正常肌组织亦呈棕色。正常颊粘膜与VEGF抗体无免疫反应，阳性反应主要位于肿瘤细胞胞浆。接近边界的肿瘤组织着染明显强于肿瘤中心区。肿瘤组织内及邻近肿瘤的小血管内皮细胞(包括散在内皮细胞)亦呈阳性着染(附图)。
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附图 低分化颊癌组织VEGF，癌巢深棕色(↑)小血管内皮深棕色(▲) ×200
三、讨论
我们设计制备的VEGF合成肽MAB与Santa Cruz公司的VEGF多抗在颊癌组织的对照研究中证实，VEGF合成肽MAB具有与VEGF原蛋白结合的能力，可作为临床检测VEGF表达的有效抗体。
VEGF是一种具有旁分泌机制的生长因子，能特异作用于血管内皮细胞，具有增加血管通透性作用。其主要机制为：(1) 增加血管通透性，使血浆蛋白渗出，改善细胞外基质状态，为新生血管床提供“土壤”；(2) 直接促使内皮细胞有丝分裂[2]。本研究结果提示，VEGF对颊癌血管生长有重要作用，可作为肿瘤治疗的靶目标。本研究发现VEGF主要分布在肿瘤及其周围小血管内皮细胞。据报道[3]，内皮细胞不能分泌VEGF，肿瘤周围的血管内皮可高水平表达VEGF受体，而肿瘤边界外(>0.5 mm)的内皮，受体表达及VEGF染色均阴性，表明VEGF由肿瘤细胞经旁分泌作用，直接与周围血管内皮细胞的受体结合，产生效应。
, 百拇医药
本研究中，4例低分化颊癌标本的VEGF染色均呈强阳性，提示VEGF的表达水平与恶性程度成正相关。Kiyoshi等[4]报道VEGF表达还与胃癌的淋巴及肝转移有直接关系，可作为判断预后的重要因素。肿瘤区的高通透状态可能增加了肿瘤细胞进入血循环的机会。此外，VEGF免疫染色可作为研究肿瘤血管的新标志，对肿瘤影像学和临床治疗方案的制定可能具 有开拓意义。
本课题为国家自然科学基金资助项目(395707687)
参考文献
1 Kim KJ, Li B, Winer J. Inhibition of vascular endothelial growth factor induced angiogenesis suppress tumor growth in vivo. Nature, 1993, 362：841-844.
, 百拇医药
2 Senger DR, Van de Water L. Vascular endothelial growth factor in tumor biology. Cancer Metas Rev, 1993, 12：303-324.
3 Dvorak HF, Sioussat TM，Brown LF. Distribution of vascular endothelial growth factor in tumor blood vessels. J Exp Med, 1991, 174：1275-1278.
4 Kiyoshi M, Yong-suk chung. Prognostic value of vascular endothelial growth factor expression in gastric carcinoma. Cancer, 1996, 77：858-863.
(收稿：1998-02-06 修回：1998-08-07), 百拇医药
单位：610041 成都，华西医科大学口腔医学院口腔颌面外科教研室(王大章、杨西川、郑光勇)，口腔病理科(何志秀)
关键词：
中华医学杂志981118
血管内皮生长因子(VEGF)与血管通透因子(VPF)是同一基因家族的同系物。VEGF能促进肿瘤生长已得到证实[1]。但在颊癌组织中的表达还少见报道。我们检测了颊癌组织中VEGF的表达及分布情况，旨在了解颊癌生长与VEGF的关系，为探索口腔癌瘤的抗血管生成治疗提供实验依据。
一、材料与方法
1.材料：Balb/c鼠购于华西医科大学动物所。根据抗原指数等方案，VEGF合成肽设计为位于氨基端1-50残基内一段序列，在ABI431固相肽合成仪上合成。VEGF多抗、兔抗鼠IgG辣根过氧化物酶的交联物(兔抗鼠-HRP)及二氨基联苯胺(DAB)购于Sigma公司。颊癌组织标本共20例，由本院病理科提供，A组分化程度较好(高、中分化)16例，B组分化程度差(低分化)4例。
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2.方法：VEGF合成肽抗VEGF单克隆抗体(MAB)由常规方法建立。将杂交瘤细胞接种Balb/c鼠，收集腹水，40%硫酸铵盐析后用紫外分光光度计测A280、A260，计算蛋白含量为2.5 mg/ml。VEGF免疫组织化学：约5 μm的石蜡切片，脱蜡后先经0.3% H2O2甲醇溶液浸泡30秒，然后滴加正常羊血清，37 ℃下10秒钟，一抗分别为抗VEGF合成肽MAB(工作浓度为1∶30)或VEGF多抗(工作浓度为1∶50)，滴加至切片上，37 ℃孵育1小时，然后滴加兔抗鼠—HRP，室温反应1小时后洗涤，以含有DAB及H2O2的底物液显色，显微镜下棕色着染为阳性，深棕色为强阳性。
二、结果
两种抗体检测20例颊癌组织中VEGF的表达，结果一致，阳性率 为80%。A组16例中，除4例未见明显着色外，余12例均为阳性，B组4例均呈强阳性。单克抗隆抗体背景染色明显较弱，VEGF多抗除癌组织有着染外，正常肌组织亦呈棕色。正常颊粘膜与VEGF抗体无免疫反应，阳性反应主要位于肿瘤细胞胞浆。接近边界的肿瘤组织着染明显强于肿瘤中心区。肿瘤组织内及邻近肿瘤的小血管内皮细胞(包括散在内皮细胞)亦呈阳性着染(附图)。
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附图 低分化颊癌组织VEGF，癌巢深棕色(↑)小血管内皮深棕色(▲) ×200
三、讨论
我们设计制备的VEGF合成肽MAB与Santa Cruz公司的VEGF多抗在颊癌组织的对照研究中证实，VEGF合成肽MAB具有与VEGF原蛋白结合的能力，可作为临床检测VEGF表达的有效抗体。
VEGF是一种具有旁分泌机制的生长因子，能特异作用于血管内皮细胞，具有增加血管通透性作用。其主要机制为：(1) 增加血管通透性，使血浆蛋白渗出，改善细胞外基质状态，为新生血管床提供“土壤”；(2) 直接促使内皮细胞有丝分裂[2]。本研究结果提示，VEGF对颊癌血管生长有重要作用，可作为肿瘤治疗的靶目标。本研究发现VEGF主要分布在肿瘤及其周围小血管内皮细胞。据报道[3]，内皮细胞不能分泌VEGF，肿瘤周围的血管内皮可高水平表达VEGF受体，而肿瘤边界外(>0.5 mm)的内皮，受体表达及VEGF染色均阴性，表明VEGF由肿瘤细胞经旁分泌作用，直接与周围血管内皮细胞的受体结合，产生效应。
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本研究中，4例低分化颊癌标本的VEGF染色均呈强阳性，提示VEGF的表达水平与恶性程度成正相关。Kiyoshi等[4]报道VEGF表达还与胃癌的淋巴及肝转移有直接关系，可作为判断预后的重要因素。肿瘤区的高通透状态可能增加了肿瘤细胞进入血循环的机会。此外，VEGF免疫染色可作为研究肿瘤血管的新标志，对肿瘤影像学和临床治疗方案的制定可能具 有开拓意义。
本课题为国家自然科学基金资助项目(395707687)
参考文献
1 Kim KJ, Li B, Winer J. Inhibition of vascular endothelial growth factor induced angiogenesis suppress tumor growth in vivo. Nature, 1993, 362：841-844.
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2 Senger DR, Van de Water L. Vascular endothelial growth factor in tumor biology. Cancer Metas Rev, 1993, 12：303-324.
3 Dvorak HF, Sioussat TM，Brown LF. Distribution of vascular endothelial growth factor in tumor blood vessels. J Exp Med, 1991, 174：1275-1278.
4 Kiyoshi M, Yong-suk chung. Prognostic value of vascular endothelial growth factor expression in gastric carcinoma. Cancer, 1996, 77：858-863.
(收稿：1998-02-06 修回：1998-08-07), 百拇医药