兔成纤维细胞增殖抑制的药物体外筛选试验
作者：荣翱 李锦文
单位：210009 南京铁道医学院附属医院眼科
关键词：
中华医学杂志981131 成纤维细胞增生是增殖性玻璃体视网膜病变(PVR)的主要原因。柔红霉素、阿霉素能有效抑制细胞增殖，而5-氟脲嘧啶(5-Fu)具有抗代谢活性，地塞米松对细胞也有抑制作用[1，2]。因此，我们观察它们对体外成纤维细胞的抑制，旨在筛选出抗PVR药效强而毒性低的药物。
一、材料与方法
1.药物：柔红霉素(意大利Farmitalia Carloeaba公司产品20 mg/瓶)，阿霉素(汕头经济特区
滨制药厂10 mg/瓶)，5-Fu(上海旭东海普药业有限公司0.25 g/10 ml)，地塞米松(南京第三制药厂5 mg/ml)。
, 百拇医药
2.细胞：为本实验室培养的兔皮肤成纤维细胞，为第3～8代。
3.实验方法：选取(3～8代)兔成纤维细胞接种到24孔培养板中，细胞量为5×104/ml/孔。37 ℃5% CO2饱和湿度条件下培养24小时,加入待测药物,对照组加入磷酸缓冲液(PBS)，每种药物分5～6个浓度组，每组3个平行孔，加药后再培养48小时，用0.25%胰蛋白酶使细胞脱壁，在血细胞计数板上行活细胞计数。细胞增殖抑制率(%)=(对照组终细胞数-用药组终细胞数)/对照组终细胞数×100%实验重复3次。药物联合应用：将地塞米松分别与其它3种药物联合应用，药物剂量取每种药物50%细胞增殖抑制率浓度(ID50)，实验方法同前，每组设6个平行孔，实验重复2次。
4.用药后细胞形态观察：每日用Olympus倒置显微镜观察细胞生长状况及形态。
二、结果
, 百拇医药
1.药物对细胞增殖的影响：药物作用于成纤维细胞48小时后，柔红霉素、阿霉素、5-Fu、地塞米松的细胞存活数分别为35.5±2.3、36.0±2.1、34.1±2.1及36.2±2.7(×104/ml)，细胞增殖抑制率分别为53%、51%、54%、52%。表明4种药物对细胞增殖表现出不同程度的抑制，出现细胞生长不良，排列稀疏，对照组则显示细胞生长良好，基本融合。而且，药物抑制细胞增殖作用强弱与剂量大小有关，呈剂量依赖性改变，柔红霉素的半数细胞增殖抑制率(ID50)浓度为0.175 μg/ml，阿霉素为0.55 μg/ml，5-Fu为225 μg/ml，地塞米松为172 μg/ml。
2.药物联合应用效果比较：地塞米松与柔红霉、阿霉素和5-Fu 3种50%抑制率浓度的药物联合应用，其细胞增殖抑制率分别为73%、70%、66%，与每种半数抑制率浓度的药物单独应用相比，经q检验，差异有非常显著意义(P<0.01),用药后48小时细胞存活数(×104/ml)分别为22.4±2.7、26.3±2.5及28.9±2.3，与单独用药相比，经F检验，也有显著意义，P<0.05。
, http://www.100md.com
3.细胞形态观察：对照组的细胞形态规则，呈梭形，排列整齐紧密；用药组则药物浓度愈高，细胞形态变化愈明显，高浓度时，48小时基本上无正常细胞，细胞死亡崩解不贴，壁失去正常梭形或变为圆形，排列疏松散乱(图1，2)。
图1 对照组细胞 ×400
图2 地塞米松200μml+阿霉素0.5μg/ml时的细胞 ×400
三、讨论
我们选择的4种药物中，柔红霉素、阿霉素均为抗癌抗生素，能嵌入DNA稳定结合，抑制DNA依赖性RNA多聚酶，妨碍转录过程，抑制RNA合成[1]。本结果显示这两种药物均能有效抑制成纤维细胞增殖，且柔红霉素的作用略强于阿霉素。5-Fu亦为抗代谢类药物，本实验显示其抑制成纤维细胞的作用最小，而且增加药物浓度,药效增强不明显，细胞抑制率只能达70%左右。地塞米松属类固醇药物，抑制细胞增殖的作用亦较弱，其ID50为与Blumenkranz等[1]报道的结果基本一致见，柔红霉素及阿霉素的用量和浓度比5-Fu和地塞米松小得多，而且抑制细胞增殖效果明显。
, 百拇医药
本实验结果还显示，由于柔红霉素、阿霉素作用为抑制细胞的增殖及收缩这两个PVR后期病变阶段，而地塞米松则不但能抑制炎性反应、细胞增殖，而且对细胞迁移这一PVR形成的初始环节也有明显作用。两类抑制PVR作用机理不同的药物联合应用后比单用一种药物的细胞增殖抑制率有明显提高。所以，此种给药方式在防治PVR的临床应用方面可能更具有实用价值。
本课题为江苏省卫生厅科研资助项目
参考文献
1 Blumenkranz MS, Alaflin PhD, Antohony S. Selection of therapeutic agents for intraocular proliferrative disease. Arch Ophthalmol, 1984, 102：598-604.
2 Algvere PV, Hallnas K, Dafgrad E. Paneretinal photocoagulation aggravates experimental proliferative vitreoretinopathy. Graefe′s Arch Clin Exp Ophthalmol, 1990, 288：461-466.
(收稿：1997-12-29 修回：1998-06-30), 百拇医药
单位：210009 南京铁道医学院附属医院眼科
关键词：
中华医学杂志981131 成纤维细胞增生是增殖性玻璃体视网膜病变(PVR)的主要原因。柔红霉素、阿霉素能有效抑制细胞增殖，而5-氟脲嘧啶(5-Fu)具有抗代谢活性，地塞米松对细胞也有抑制作用[1，2]。因此，我们观察它们对体外成纤维细胞的抑制，旨在筛选出抗PVR药效强而毒性低的药物。
一、材料与方法
1.药物：柔红霉素(意大利Farmitalia Carloeaba公司产品20 mg/瓶)，阿霉素(汕头经济特区
滨制药厂10 mg/瓶)，5-Fu(上海旭东海普药业有限公司0.25 g/10 ml)，地塞米松(南京第三制药厂5 mg/ml)。, 百拇医药
2.细胞：为本实验室培养的兔皮肤成纤维细胞，为第3～8代。
3.实验方法：选取(3～8代)兔成纤维细胞接种到24孔培养板中，细胞量为5×104/ml/孔。37 ℃5% CO2饱和湿度条件下培养24小时,加入待测药物,对照组加入磷酸缓冲液(PBS)，每种药物分5～6个浓度组，每组3个平行孔，加药后再培养48小时，用0.25%胰蛋白酶使细胞脱壁，在血细胞计数板上行活细胞计数。细胞增殖抑制率(%)=(对照组终细胞数-用药组终细胞数)/对照组终细胞数×100%实验重复3次。药物联合应用：将地塞米松分别与其它3种药物联合应用，药物剂量取每种药物50%细胞增殖抑制率浓度(ID50)，实验方法同前，每组设6个平行孔，实验重复2次。
4.用药后细胞形态观察：每日用Olympus倒置显微镜观察细胞生长状况及形态。
二、结果
, 百拇医药
1.药物对细胞增殖的影响：药物作用于成纤维细胞48小时后，柔红霉素、阿霉素、5-Fu、地塞米松的细胞存活数分别为35.5±2.3、36.0±2.1、34.1±2.1及36.2±2.7(×104/ml)，细胞增殖抑制率分别为53%、51%、54%、52%。表明4种药物对细胞增殖表现出不同程度的抑制，出现细胞生长不良，排列稀疏，对照组则显示细胞生长良好，基本融合。而且，药物抑制细胞增殖作用强弱与剂量大小有关，呈剂量依赖性改变，柔红霉素的半数细胞增殖抑制率(ID50)浓度为0.175 μg/ml，阿霉素为0.55 μg/ml，5-Fu为225 μg/ml，地塞米松为172 μg/ml。
2.药物联合应用效果比较：地塞米松与柔红霉、阿霉素和5-Fu 3种50%抑制率浓度的药物联合应用，其细胞增殖抑制率分别为73%、70%、66%，与每种半数抑制率浓度的药物单独应用相比，经q检验，差异有非常显著意义(P<0.01),用药后48小时细胞存活数(×104/ml)分别为22.4±2.7、26.3±2.5及28.9±2.3，与单独用药相比，经F检验，也有显著意义，P<0.05。
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3.细胞形态观察：对照组的细胞形态规则，呈梭形，排列整齐紧密；用药组则药物浓度愈高，细胞形态变化愈明显，高浓度时，48小时基本上无正常细胞，细胞死亡崩解不贴，壁失去正常梭形或变为圆形，排列疏松散乱(图1，2)。
图1 对照组细胞 ×400
图2 地塞米松200μml+阿霉素0.5μg/ml时的细胞 ×400
三、讨论
我们选择的4种药物中，柔红霉素、阿霉素均为抗癌抗生素，能嵌入DNA稳定结合，抑制DNA依赖性RNA多聚酶，妨碍转录过程，抑制RNA合成[1]。本结果显示这两种药物均能有效抑制成纤维细胞增殖，且柔红霉素的作用略强于阿霉素。5-Fu亦为抗代谢类药物，本实验显示其抑制成纤维细胞的作用最小，而且增加药物浓度,药效增强不明显，细胞抑制率只能达70%左右。地塞米松属类固醇药物，抑制细胞增殖的作用亦较弱，其ID50为与Blumenkranz等[1]报道的结果基本一致见，柔红霉素及阿霉素的用量和浓度比5-Fu和地塞米松小得多，而且抑制细胞增殖效果明显。
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本实验结果还显示，由于柔红霉素、阿霉素作用为抑制细胞的增殖及收缩这两个PVR后期病变阶段，而地塞米松则不但能抑制炎性反应、细胞增殖，而且对细胞迁移这一PVR形成的初始环节也有明显作用。两类抑制PVR作用机理不同的药物联合应用后比单用一种药物的细胞增殖抑制率有明显提高。所以，此种给药方式在防治PVR的临床应用方面可能更具有实用价值。
本课题为江苏省卫生厅科研资助项目
参考文献
1 Blumenkranz MS, Alaflin PhD, Antohony S. Selection of therapeutic agents for intraocular proliferrative disease. Arch Ophthalmol, 1984, 102：598-604.
2 Algvere PV, Hallnas K, Dafgrad E. Paneretinal photocoagulation aggravates experimental proliferative vitreoretinopathy. Graefe′s Arch Clin Exp Ophthalmol, 1990, 288：461-466.
(收稿：1997-12-29 修回：1998-06-30), 百拇医药