洛汀新对大鼠阿霉素肾病的保护作用
作者：刘娅 卢义侠
单位：徐州市第四人民医院儿科 刘 娅；北京医科大学第一医院儿科 卢义侠
关键词：洛汀新 阿霉素肾病 血管紧张素Ⅱ
江苏医药990112 摘要 为探讨洛汀新对大鼠阿霉素肾病(AN)的保护作用及其机理，观察洛汀新对AN大鼠尿蛋白、血清蛋白、血清胆固醇及肾脏病理变化的影响，并用放射免疫分析法检测血浆及肾组织血管紧张素Ⅱ(ATⅡ)含量。结果显示：AN大鼠血浆及肾组织ATⅡ含量明显升高，洛汀新可降低AN大鼠尿蛋白及血清胆固醇，减轻肾小球损害，降低血浆及肾组织ATⅡ含量。洛汀新对大鼠AN有一定保护作用，其机理与降低ATⅡ(特别是局部ATⅡ)含量有关。
肾病综合征是儿科常见病，其病理类型以微小病变居多。近来一些报道显示，血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ ATⅡ)在肾病综合征发病机理中起一定作用。洛汀新(lotensin)是新一代血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)，它对许多肾脏疾病的发生发展均有一定的阻抑作用。本文旨在探讨其对大鼠阿霉素肾病(adriamycin nephrosis AN)的保护作用及其可能机理。
, 百拇医药
材料与方法
一、动物模型的制备和分组：纯系雄性Sprague-Dawley大鼠21只，体重180～250克，随机分为三组(n＝7)：正常对照组、AN组、洛汀新组。AN组及洛汀新组均经尾静脉一次注射阿霉素6.5mg/kg，洛汀新组在注射阿霉素后即给予洛汀新(原粉由北京诺华有限公司惠赠)3mg.kg-1.d-1灌胃。正常对照组在尾静脉注射相应容量的生理盐水后，与肾病组同时以蒸馏水灌胃，实验周期为28天。
二、观察指标及实验方法：(1)24小时尿蛋白定量：各组动物均在实验前和注药后第14天、第21天、第28天置于代谢笼中留取24小时尿液，用三氯乙酸法进行24小时尿蛋白定量。(2)血清总蛋白、白蛋白、胆固醇测定：均在第28天结束实验时经眶静脉取血，以全自动生化分析仪测定。(3)肾组织病理检查：实验结束时取肾组织，常规处理，以透射电镜观察肾小球病理变化。(4)血浆及肾组织ATⅡ含量测定：均在第28天实验结束时采血，采用放射免疫分析法(125I-AngⅡ放免分析测定盒由北京北方生物技术研究所提供)；肾组织标本制备参照温绍君等[1]方法由肾匀浆中提取ATⅡ。
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三、统计学处理：所有数据以
±s表示，采用方差分析，以SPSS/PC+统计软件处理数据。
结 果
一、24小时尿蛋白定量：结果显示AN组大鼠第14天后出现尿蛋白增加(P<0.05)；第28天时达高峰(P<0.01)。而洛汀新组第21天后出现尿蛋白增加(P<0.05)，第28天时仍维持在较低水平(P<0.05)，见表1。
表1各组24小时尿蛋白定量(±s，mg/24h，n＝7)
, 百拇医药
0天
14天
21天
28天
正常对照组
7.37±4.26
13.33±5.74
14.04±6.72
16.79±6.02
AN组
7.72±4.08
23.94±5.14*
, 百拇医药
92.13±40.70**
169.40±46.35**
洛汀新组
7.60±2.58
16.40±4.48
37.34±10.05*△
42.00±7.20*△
与正常对照组比*P<0.05，P<0.01 与AN组比△P<0.05
二、血生化指标测定：AN组及洛汀新组血清总蛋白、白蛋白均低于正常对照组(P<0.05)，而两组间无显著差异；洛汀新组血清胆固醇低于AN组(P<0.05)，而与正常对照组无显著差异，见表2。
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表2 各组血清蛋白和胆固醇变化(±s，n＝7)
总蛋白
(g/L)
白蛋白
(g/L)
胆固醇
(mmol/L)
正常对照组
87.74±8.89
40.87±2.38
, 百拇医药
2.44±0.45
AN组
73.08±8.89*
35.54±4.43*
3.28±0.66*
洛汀新组
74.40±3.34*
34.00±2.00*
2.05±0.27△
与正常对照组比*P<0.05 与AN组比△P<0.05
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三、肾脏电镜病理变化：电镜下正常对照组肾小球滤过膜结构完整，上皮细胞足突清晰；AN组大鼠肾小球上皮细胞足突广泛融合，基底膜正常；而洛汀新组肾小球上皮细胞足突部分融合，基底膜完整。
四、血浆及肾组织ATⅡ含量：AN组与洛汀新组血浆及肾组织ATⅡ含量均高于正常对照组(P<0.01)，而洛汀新组血浆及肾组织ATⅡ含量低于AN组(P<0.05)，见表3。
表3各组血浆及肾组织ATⅡ含量变化
(±s，n＝7)
血浆ATⅡ含量
(ng/L)
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肾组织ATⅡ含量
(ng/g.w.wt)
正常对照组
153.29±41.19
4.07±1.76
AN组
332.86±69.07*
20.26±5.74**
洛汀新组
279.26±28.68*△
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14.33±3.60*△
与正常对照组比*P<0.05 **P<0.01
与AN组比△P<0.05讨 论
阿霉素可损害细胞生物膜，影响线粒体的氧化磷酸化过程，利用其肾毒性作用可造成与人类微小病变型肾病相似的病理改变，被广泛用于复制肾病模型。本实验表明：在大鼠AN模型中，除有大量蛋白尿、低白蛋白血症、高胆固醇血症外、血浆及肾组织ATⅡ含量均较正常对照明显增高，故推测ATⅡ升高可能通过影响肾脏特殊血流动力学，参与肾病综合征的形成和发展。用洛汀新对大鼠AN形成过程进行干预，结果发现洛汀新可延缓和减轻大鼠蛋白尿的形成，抑制高胆固醇血症，并对肾小球病理变化有一定阻抑作用，提示洛汀新对大鼠AN有一定保护作用。
有关ACEI对肾病综合征的保护作用已有报道[2]。目前多认为主要通过减少ATⅡ生成，降低肾小球内压而减轻肾小球滤过膜损伤。既往应用微穿刺技术证实，静脉给予ATⅡ可使单一肾小球滤过液中蛋白含量增加25倍，整个肾脏排泄白蛋白增加3倍[3]，故认为ATⅡ升高对蛋白尿形成起重要作用，这与我们实验中所见AN大鼠尿蛋白增加和血浆及肾组织ATⅡ水平升高相一致。
, 百拇医药
洛汀新通过减少血浆特别是肾内ATⅡ生成，降低肾小球毛细血管内压，改善肾脏特别血流动力学，并减少由ATⅡ引起的肾小球滤过膜孔径增加，而使其尿蛋白排出减少[4]。血管紧张素转化酶又称激肽酶Ⅱ，洛汀新可抑制激肽酶Ⅱ活性，使缓激肽增多，通过其血管舒张作用从功能上拮抗ATⅡ引起的肾脏血流动力学改变。同时，ATⅡ生成的减少又可减弱内皮素的缩血管效应[5]。
此外，洛汀新还具有防止氧自由基形成，抗血小板凝集以及保护细胞结构功能完整等潜在作用[6，7]。本实验提示洛汀新对大鼠AN有保护作用。其作用可能是多种因素共同作用的结果，其中抑制ATⅡ(特别是肾内ATⅡ)生成起重要作用。
邮政编码：221009
参考文献
[1] 温绍君，等.中华心血管病杂志1990；18(2)：91.
, 百拇医药
[2] Allon M, et al. J Lab Clin Med 1990；116：462.
[3] Eisentack GM, et al. Kidney Int 1975；8(1)：80.
[4] Marc H, et al. Kidney Int 1996；49(1)：174.
[5] Duncan J, et al. Hypertension 1994；23(4)：439.
[6] Apperloon AJ, et al. Br Med J 1991；303(6806)：821.
[7] 林善琰.肾脏病与透析肾移植杂志 1993；2(2)：127.
(1998年4月1日收稿 同年7月7日修回), http://www.100md.com
单位：徐州市第四人民医院儿科 刘 娅；北京医科大学第一医院儿科 卢义侠
关键词：洛汀新 阿霉素肾病 血管紧张素Ⅱ
江苏医药990112 摘要 为探讨洛汀新对大鼠阿霉素肾病(AN)的保护作用及其机理，观察洛汀新对AN大鼠尿蛋白、血清蛋白、血清胆固醇及肾脏病理变化的影响，并用放射免疫分析法检测血浆及肾组织血管紧张素Ⅱ(ATⅡ)含量。结果显示：AN大鼠血浆及肾组织ATⅡ含量明显升高，洛汀新可降低AN大鼠尿蛋白及血清胆固醇，减轻肾小球损害，降低血浆及肾组织ATⅡ含量。洛汀新对大鼠AN有一定保护作用，其机理与降低ATⅡ(特别是局部ATⅡ)含量有关。
肾病综合征是儿科常见病，其病理类型以微小病变居多。近来一些报道显示，血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ ATⅡ)在肾病综合征发病机理中起一定作用。洛汀新(lotensin)是新一代血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)，它对许多肾脏疾病的发生发展均有一定的阻抑作用。本文旨在探讨其对大鼠阿霉素肾病(adriamycin nephrosis AN)的保护作用及其可能机理。
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材料与方法
一、动物模型的制备和分组：纯系雄性Sprague-Dawley大鼠21只，体重180～250克，随机分为三组(n＝7)：正常对照组、AN组、洛汀新组。AN组及洛汀新组均经尾静脉一次注射阿霉素6.5mg/kg，洛汀新组在注射阿霉素后即给予洛汀新(原粉由北京诺华有限公司惠赠)3mg.kg-1.d-1灌胃。正常对照组在尾静脉注射相应容量的生理盐水后，与肾病组同时以蒸馏水灌胃，实验周期为28天。
二、观察指标及实验方法：(1)24小时尿蛋白定量：各组动物均在实验前和注药后第14天、第21天、第28天置于代谢笼中留取24小时尿液，用三氯乙酸法进行24小时尿蛋白定量。(2)血清总蛋白、白蛋白、胆固醇测定：均在第28天结束实验时经眶静脉取血，以全自动生化分析仪测定。(3)肾组织病理检查：实验结束时取肾组织，常规处理，以透射电镜观察肾小球病理变化。(4)血浆及肾组织ATⅡ含量测定：均在第28天实验结束时采血，采用放射免疫分析法(125I-AngⅡ放免分析测定盒由北京北方生物技术研究所提供)；肾组织标本制备参照温绍君等[1]方法由肾匀浆中提取ATⅡ。
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三、统计学处理：所有数据以
±s表示，采用方差分析，以SPSS/PC+统计软件处理数据。结 果
一、24小时尿蛋白定量：结果显示AN组大鼠第14天后出现尿蛋白增加(P<0.05)；第28天时达高峰(P<0.01)。而洛汀新组第21天后出现尿蛋白增加(P<0.05)，第28天时仍维持在较低水平(P<0.05)，见表1。
表1各组24小时尿蛋白定量(
±s，mg/24h，n＝7), 百拇医药
0天
14天
21天
28天
正常对照组
7.37±4.26
13.33±5.74
14.04±6.72
16.79±6.02
AN组
7.72±4.08
23.94±5.14*
, 百拇医药
92.13±40.70**
169.40±46.35**
洛汀新组
7.60±2.58
16.40±4.48
37.34±10.05*△
42.00±7.20*△
与正常对照组比*P<0.05，P<0.01 与AN组比△P<0.05
二、血生化指标测定：AN组及洛汀新组血清总蛋白、白蛋白均低于正常对照组(P<0.05)，而两组间无显著差异；洛汀新组血清胆固醇低于AN组(P<0.05)，而与正常对照组无显著差异，见表2。
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表2 各组血清蛋白和胆固醇变化(
±s，n＝7)总蛋白
(g/L)
白蛋白
(g/L)
胆固醇
(mmol/L)
正常对照组
87.74±8.89
40.87±2.38
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2.44±0.45
AN组
73.08±8.89*
35.54±4.43*
3.28±0.66*
洛汀新组
74.40±3.34*
34.00±2.00*
2.05±0.27△
与正常对照组比*P<0.05 与AN组比△P<0.05
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三、肾脏电镜病理变化：电镜下正常对照组肾小球滤过膜结构完整，上皮细胞足突清晰；AN组大鼠肾小球上皮细胞足突广泛融合，基底膜正常；而洛汀新组肾小球上皮细胞足突部分融合，基底膜完整。
四、血浆及肾组织ATⅡ含量：AN组与洛汀新组血浆及肾组织ATⅡ含量均高于正常对照组(P<0.01)，而洛汀新组血浆及肾组织ATⅡ含量低于AN组(P<0.05)，见表3。
表3各组血浆及肾组织ATⅡ含量变化
(
±s，n＝7)血浆ATⅡ含量
(ng/L)
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肾组织ATⅡ含量
(ng/g.w.wt)
正常对照组
153.29±41.19
4.07±1.76
AN组
332.86±69.07*
20.26±5.74**
洛汀新组
279.26±28.68*△
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14.33±3.60*△
与正常对照组比*P<0.05 **P<0.01
与AN组比△P<0.05讨 论
阿霉素可损害细胞生物膜，影响线粒体的氧化磷酸化过程，利用其肾毒性作用可造成与人类微小病变型肾病相似的病理改变，被广泛用于复制肾病模型。本实验表明：在大鼠AN模型中，除有大量蛋白尿、低白蛋白血症、高胆固醇血症外、血浆及肾组织ATⅡ含量均较正常对照明显增高，故推测ATⅡ升高可能通过影响肾脏特殊血流动力学，参与肾病综合征的形成和发展。用洛汀新对大鼠AN形成过程进行干预，结果发现洛汀新可延缓和减轻大鼠蛋白尿的形成，抑制高胆固醇血症，并对肾小球病理变化有一定阻抑作用，提示洛汀新对大鼠AN有一定保护作用。
有关ACEI对肾病综合征的保护作用已有报道[2]。目前多认为主要通过减少ATⅡ生成，降低肾小球内压而减轻肾小球滤过膜损伤。既往应用微穿刺技术证实，静脉给予ATⅡ可使单一肾小球滤过液中蛋白含量增加25倍，整个肾脏排泄白蛋白增加3倍[3]，故认为ATⅡ升高对蛋白尿形成起重要作用，这与我们实验中所见AN大鼠尿蛋白增加和血浆及肾组织ATⅡ水平升高相一致。
, 百拇医药
洛汀新通过减少血浆特别是肾内ATⅡ生成，降低肾小球毛细血管内压，改善肾脏特别血流动力学，并减少由ATⅡ引起的肾小球滤过膜孔径增加，而使其尿蛋白排出减少[4]。血管紧张素转化酶又称激肽酶Ⅱ，洛汀新可抑制激肽酶Ⅱ活性，使缓激肽增多，通过其血管舒张作用从功能上拮抗ATⅡ引起的肾脏血流动力学改变。同时，ATⅡ生成的减少又可减弱内皮素的缩血管效应[5]。
此外，洛汀新还具有防止氧自由基形成，抗血小板凝集以及保护细胞结构功能完整等潜在作用[6，7]。本实验提示洛汀新对大鼠AN有保护作用。其作用可能是多种因素共同作用的结果，其中抑制ATⅡ(特别是肾内ATⅡ)生成起重要作用。
邮政编码：221009
参考文献
[1] 温绍君，等.中华心血管病杂志1990；18(2)：91.
, 百拇医药
[2] Allon M, et al. J Lab Clin Med 1990；116：462.
[3] Eisentack GM, et al. Kidney Int 1975；8(1)：80.
[4] Marc H, et al. Kidney Int 1996；49(1)：174.
[5] Duncan J, et al. Hypertension 1994；23(4)：439.
[6] Apperloon AJ, et al. Br Med J 1991；303(6806)：821.
[7] 林善琰.肾脏病与透析肾移植杂志 1993；2(2)：127.
(1998年4月1日收稿 同年7月7日修回), http://www.100md.com