人肝癌中P16蛋白的表达缺失与意义
作者：黄建钊 沈文律 李波 罗义刚 程娘
单位：黄建钊 沈文律 李波 罗义刚 第三军医大学西南医院普外科 400038； 程娘 华西医科大学附属一院病理科
关键词：P16INK4/MTSI；肝细胞性肝癌
重庆医学990110 摘要 用免疫组化法对35例手术切除的原发性肝细胞性肝癌(HCC)标本中P16蛋白的表达作了检测，结果发现15例(45.7%)P16蛋白表达阴性。分化低癌组织P16蛋白缺失率显著高于分化高者(P<0.01)，且P16表达缺失的患者生存期明显短于有P16表达者(P<0.05)，提示P16蛋白表达的缺失可能与HCC的发生、发展及预后有关。
Clinical Significance of Loss of P16 Expression in
, http://www.100md.com Human Primary Hepatocellura Carcinoma
Huang Jianzbao,Shen Wenlu,Li Bo,Luo yigang
Dept.of General Surgery,The Southwest Hospital of the Third Military Medical Vniversity 400038
Cheng Niang
Dept.of patholog,The first Affiliated Hospital of West China Medical Vniversify 610041
Abstract p16 expression was determined by immunohistochemical analysis on 35 paraffin specimens of primary hepatocellular carcinoma(HCC)that were curatively resected.Fifteen of 35 HCC spencimen specimens (45.7%)showed negative p16 expression.The rate of negative p16 expression was significantly higher in the poor differentiated HCC than in the differentiated HCC(P<0.01).Morever,patients with negative p16 epression survived for a significantly shorter period of time than those with positive p16 expression(P>0.05).The results suggest that loss of p16 expression may be relevant to the development and prognosis of hepatocellular carcinoma.
, http://www.100md.com
Keywords P16INK4/MTSI Hepatocellular carcinoma immunohistochemial analysis
P16蛋白是P16基因的编码蛋白，在细胞周期起负性调节作用，P16蛋白功能的丧失与细胞过度增生以至癌变有关。
我们对35例原发性肝细胞性肝癌标本、相应的癌旁组织P16蛋白表达情况及其与临床特征的关系作了研究，现报道如下。
对象和方法
1 对象：35例原发性肝细胞性肝癌(HCC)标本及其相应的癌旁组织均为华西医科大学普外科1995年4月～1996年9月手术切除标本。男性29例，女性6例。年龄26～70岁，平均49±14.3岁。病理分级，Ⅰ级3例，Ⅱ级17例，Ⅲ级11例，Ⅳ级4例。31例作了血清乙肝表面抗原标记HBsAg检测，其中HBsAg阳性者20例。术后随访1.5～2.5年，平均2.2年。所有标本均经10%福尔马林固定，常规石蜡包埋，4μm切片。
, http://www.100md.com
2 方法：免疫组化染色采用链菌素亲生物素——过氧化物酶法，即SP法。第一抗体为兔抗人P16多克隆抗体C-20(美国santa-cruz公司)，稀释度1∶50，第二抗体为生物素化羊抗兔1gG，稀释度1∶100，二抗及辣根过氧化物酶标记链菌亲和素由美国Zymed公司生产的SP试剂盒提供，具体操作按药盒说明书进行。阴性对照以PBS代替一抗，阳性对照用已知的P16阳性的乳癌组织。
结果判断：显微镜下10%以上的细胞呈清晰棕色判为P16蛋白阳性。
结果统计：采用χ2检验进行统计学处理。
结果
35例HCC标本中，P16蛋白表达缺失者有15例(45.7%)。而全部癌旁组织P16表达均为阳性。P16蛋白表达的缺失，与患者年龄、性别、肿瘤大小及是否为HBsAg携带者无关，而与肿瘤的分化程度有关，分化低者(Ⅲ、Ⅳ级)比分化高者更易发生，相差显著(P<0.01)。P16蛋白表达阴性与阳性的患者，随访期内死亡率分别为43.8%(7/16)与10.5%(2/19)，前者明显高于后者(P<0.05)。详见表1。
, http://www.100md.com
表1 P16蛋白表达与临床特征的关系 临床特征
P16蛋白表达
阳性
阴性
平均年龄(岁)
52.2±13.2
47.78±10.5
性别(例数)
男性
15
14(48.3%)
女性
, 百拇医药
4
2(33.3%)
病理分级(例数)
Ⅰ、Ⅱ级
15
5(25%)
Ⅲ、Ⅳ级
4
11(73.3%)
肿瘤直径(例数)
>5cm
14
13(48.1%)
, 百拇医药
≤5cm
5
3(37.5%)
HBsAg标记
阳性
11
9(45%)
阴性
7
4(36.4%)
讨论
P16基因也称CDKN2、MTS1或P16INK4，位于人染色体9p21，编码蛋白为P16，分子量16kd，特异性地作用于细胞周期中的G1期，是G1期细胞往S期进发的负性调节因子。正常情况下，G1期细胞在胞外生长信号的刺激下，引起细胞内D型周期蛋白(CyclinD)积聚，并与周期素依赖的蛋白激酶4或6(CDK4或CDK6)结合形成有活性的全酶，使PRb蛋白磷酸化而解除对DNA转录的抑制，G1期细胞进入S期而增殖[1]，P16蛋白可与CDK4或CDK6结合，阻止后者与CyclinD结合，而不能形成有活性的全酶，防止细胞过度增殖[2]。正常细胞中P16蛋白水平低但稳定[2]，P16蛋白功能的丧失与细胞过度增生以至癌变有关。
, 百拇医药
关于P16基因在HCC中的异常改变，研究较少，且结果差异较大，Biden等[3]与Kaino等[4]分别对澳大利亚人群HCC的原发肿瘤及日本人HCC细胞株进行P16基因纯合子缺失与突变检测，结果均未发现有异常改变。而Chaubert等[5]则在瑞典人群HCC原发肿瘤中检出21%的P16基因纯合子缺失，这可能与不同地区HCC的病因不同有关。P16基因失活方式有纯合子缺失、启动子区5′端CpG岛高甲基化、突变及转录水平的异常等，但不论是何种方式，其最终将反映到P16蛋白水平上。本研究采用免疫组织化学法在我国四川地区肝细胞性肝癌的原发肿瘤中发现45.7%的P16蛋白表达缺失，分化较差的HCC中P16表达的缺失率明显高于分化较好者，且有P16表达缺失的HCC患者的生存期明显短于无P16缺失者。提示P16蛋白功能的丧失可能参与四川地区人群原发肝细胞性肝癌的癌变机制且与癌肿的侵袭性及患者的预后有关。
参考文献：
, http://www.100md.com
1 Jun Ya kato,Control of G1 progression by D-type cyclins:key events for cell prolireration. Leukemia 1997;11 supple 3:347-351
2 Hall,M,Bates,S,and Peters,G.Evidence for different modes of action of cyclindependent kinase inhibotors:P15 and p16 bind to kinases,p21 and p27 bind to cycling. Oncogene,1995;11(5):1581-1588
3 Biden k,Yong J,Buttenshaw,R,et al.Frequency of Mutation and deletion of the tumor suppressor Gene CDKN2A(MTSI/P16) in hepatocellular carcinoma from an Australian population.Hepatology 1997;25(3):593-7
, 百拇医药
4 Kaino,M,Alterations in the tumor supytessor genes P53,RB,P16/MTSI,and P15/MTS2 in human pancreatic cancer and hepatoma cell lines.J Gastroenterol 1997;32(1):40-6
5 Chaubert,R,Gayer,R,Zimmermann,A,et al Germ-line mutations of the p16 INK4(MTSI) gene occur in a subset of patients with heparocellular carcinoma.Hepatology,1997;25(6):1376-81, http://www.100md.com
单位：黄建钊 沈文律 李波 罗义刚 第三军医大学西南医院普外科 400038； 程娘 华西医科大学附属一院病理科
关键词：P16INK4/MTSI；肝细胞性肝癌
重庆医学990110 摘要 用免疫组化法对35例手术切除的原发性肝细胞性肝癌(HCC)标本中P16蛋白的表达作了检测，结果发现15例(45.7%)P16蛋白表达阴性。分化低癌组织P16蛋白缺失率显著高于分化高者(P<0.01)，且P16表达缺失的患者生存期明显短于有P16表达者(P<0.05)，提示P16蛋白表达的缺失可能与HCC的发生、发展及预后有关。
Clinical Significance of Loss of P16 Expression in
, http://www.100md.com Human Primary Hepatocellura Carcinoma
Huang Jianzbao,Shen Wenlu,Li Bo,Luo yigang
Dept.of General Surgery,The Southwest Hospital of the Third Military Medical Vniversity 400038
Cheng Niang
Dept.of patholog,The first Affiliated Hospital of West China Medical Vniversify 610041
Abstract p16 expression was determined by immunohistochemical analysis on 35 paraffin specimens of primary hepatocellular carcinoma(HCC)that were curatively resected.Fifteen of 35 HCC spencimen specimens (45.7%)showed negative p16 expression.The rate of negative p16 expression was significantly higher in the poor differentiated HCC than in the differentiated HCC(P<0.01).Morever,patients with negative p16 epression survived for a significantly shorter period of time than those with positive p16 expression(P>0.05).The results suggest that loss of p16 expression may be relevant to the development and prognosis of hepatocellular carcinoma.
, http://www.100md.com
Keywords P16INK4/MTSI Hepatocellular carcinoma immunohistochemial analysis
P16蛋白是P16基因的编码蛋白，在细胞周期起负性调节作用，P16蛋白功能的丧失与细胞过度增生以至癌变有关。
我们对35例原发性肝细胞性肝癌标本、相应的癌旁组织P16蛋白表达情况及其与临床特征的关系作了研究，现报道如下。
对象和方法
1 对象：35例原发性肝细胞性肝癌(HCC)标本及其相应的癌旁组织均为华西医科大学普外科1995年4月～1996年9月手术切除标本。男性29例，女性6例。年龄26～70岁，平均49±14.3岁。病理分级，Ⅰ级3例，Ⅱ级17例，Ⅲ级11例，Ⅳ级4例。31例作了血清乙肝表面抗原标记HBsAg检测，其中HBsAg阳性者20例。术后随访1.5～2.5年，平均2.2年。所有标本均经10%福尔马林固定，常规石蜡包埋，4μm切片。
, http://www.100md.com
2 方法：免疫组化染色采用链菌素亲生物素——过氧化物酶法，即SP法。第一抗体为兔抗人P16多克隆抗体C-20(美国santa-cruz公司)，稀释度1∶50，第二抗体为生物素化羊抗兔1gG，稀释度1∶100，二抗及辣根过氧化物酶标记链菌亲和素由美国Zymed公司生产的SP试剂盒提供，具体操作按药盒说明书进行。阴性对照以PBS代替一抗，阳性对照用已知的P16阳性的乳癌组织。
结果判断：显微镜下10%以上的细胞呈清晰棕色判为P16蛋白阳性。
结果统计：采用χ2检验进行统计学处理。
结果
35例HCC标本中，P16蛋白表达缺失者有15例(45.7%)。而全部癌旁组织P16表达均为阳性。P16蛋白表达的缺失，与患者年龄、性别、肿瘤大小及是否为HBsAg携带者无关，而与肿瘤的分化程度有关，分化低者(Ⅲ、Ⅳ级)比分化高者更易发生，相差显著(P<0.01)。P16蛋白表达阴性与阳性的患者，随访期内死亡率分别为43.8%(7/16)与10.5%(2/19)，前者明显高于后者(P<0.05)。详见表1。
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表1 P16蛋白表达与临床特征的关系 临床特征
P16蛋白表达
阳性
阴性
平均年龄(岁)
52.2±13.2
47.78±10.5
性别(例数)
男性
15
14(48.3%)
女性
, 百拇医药
4
2(33.3%)
病理分级(例数)
Ⅰ、Ⅱ级
15
5(25%)
Ⅲ、Ⅳ级
4
11(73.3%)
肿瘤直径(例数)
>5cm
14
13(48.1%)
, 百拇医药
≤5cm
5
3(37.5%)
HBsAg标记
阳性
11
9(45%)
阴性
7
4(36.4%)
讨论
P16基因也称CDKN2、MTS1或P16INK4，位于人染色体9p21，编码蛋白为P16，分子量16kd，特异性地作用于细胞周期中的G1期，是G1期细胞往S期进发的负性调节因子。正常情况下，G1期细胞在胞外生长信号的刺激下，引起细胞内D型周期蛋白(CyclinD)积聚，并与周期素依赖的蛋白激酶4或6(CDK4或CDK6)结合形成有活性的全酶，使PRb蛋白磷酸化而解除对DNA转录的抑制，G1期细胞进入S期而增殖[1]，P16蛋白可与CDK4或CDK6结合，阻止后者与CyclinD结合，而不能形成有活性的全酶，防止细胞过度增殖[2]。正常细胞中P16蛋白水平低但稳定[2]，P16蛋白功能的丧失与细胞过度增生以至癌变有关。
, 百拇医药
关于P16基因在HCC中的异常改变，研究较少，且结果差异较大，Biden等[3]与Kaino等[4]分别对澳大利亚人群HCC的原发肿瘤及日本人HCC细胞株进行P16基因纯合子缺失与突变检测，结果均未发现有异常改变。而Chaubert等[5]则在瑞典人群HCC原发肿瘤中检出21%的P16基因纯合子缺失，这可能与不同地区HCC的病因不同有关。P16基因失活方式有纯合子缺失、启动子区5′端CpG岛高甲基化、突变及转录水平的异常等，但不论是何种方式，其最终将反映到P16蛋白水平上。本研究采用免疫组织化学法在我国四川地区肝细胞性肝癌的原发肿瘤中发现45.7%的P16蛋白表达缺失，分化较差的HCC中P16表达的缺失率明显高于分化较好者，且有P16表达缺失的HCC患者的生存期明显短于无P16缺失者。提示P16蛋白功能的丧失可能参与四川地区人群原发肝细胞性肝癌的癌变机制且与癌肿的侵袭性及患者的预后有关。
参考文献：
, http://www.100md.com
1 Jun Ya kato,Control of G1 progression by D-type cyclins:key events for cell prolireration. Leukemia 1997;11 supple 3:347-351
2 Hall,M,Bates,S,and Peters,G.Evidence for different modes of action of cyclindependent kinase inhibotors:P15 and p16 bind to kinases,p21 and p27 bind to cycling. Oncogene,1995;11(5):1581-1588
3 Biden k,Yong J,Buttenshaw,R,et al.Frequency of Mutation and deletion of the tumor suppressor Gene CDKN2A(MTSI/P16) in hepatocellular carcinoma from an Australian population.Hepatology 1997;25(3):593-7
, 百拇医药
4 Kaino,M,Alterations in the tumor supytessor genes P53,RB,P16/MTSI,and P15/MTS2 in human pancreatic cancer and hepatoma cell lines.J Gastroenterol 1997;32(1):40-6
5 Chaubert,R,Gayer,R,Zimmermann,A,et al Germ-line mutations of the p16 INK4(MTSI) gene occur in a subset of patients with heparocellular carcinoma.Hepatology,1997;25(6):1376-81, http://www.100md.com