EGFR和P53蛋白在胃癌中的表达及其与淋巴结转移的关系
作者：杨少波
单位：北京解放军304医院消化科 100037
关键词：
重庆医学990111
淋巴转移是胃癌的主要转移途径，了解淋巴转移的有无及程度(远近等)对判断胃癌的发展和预后，以及制定合理治疗方案(如手术)十分重要。常规的胃镜、X线造影及CT等难以准确显示胃癌的淋巴转移状况，寻找胃癌淋巴转移的分子标志物具有重要的临床意义。本文应用免疫组织化学LSAB法检测胃癌组织中EGFR(表皮生长因子受体)和P53蛋白的表达状况，探讨它们与胃癌淋巴转移的关系。
材料与方法
1 标本：本院普外科手术切除胃癌标本30例，经病理检查证实，其中16例有淋巴结转移，所有病例术前均未经化疗或放疗。男性26例，女性4例，年龄范围26～81岁。标本经福尔马林固定，常规脱水包埋，5μm连续切片，分别用于HE染色和免疫组织化学染色。
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2 主要试剂：(1)LSAB试剂盒：丹麦DAKO公司产品。(2)抗体：EGF(R)-(1005)和P53(D0-1)为美国Santa Cruz公司产品，工作浓度分别为1∶120和1∶100。(3)3.3′二氨基联苯胺(DAB)、华美公司产品。(4)稀释缓冲液：0.05MTBS(pH7.4)。
3 免疫组织化学LSAB法染色过程：石蜡包埋组织切片在55℃烤箱中烘烤过夜，二甲苯脱蜡，梯度乙醇返水，3%过氧化氢5分钟以去除内源性过氧化酶；3M尿素消化20分钟；正常血清封闭30分钟(室温)后，加-抗[EGF(R)-(1005)或P53(D0-1)]室温下孵育30分钟；加二抗(生物素化猪抗兔IgG或生物素化兔抗鼠IgG)室温下30分钟(工作浓度为1∶400)；加过氧化酶标记链条合素(1∶400)室温下30分钟；(以上每步操作后均用0.05MTBS充分洗涤)。DAB显色约5分钟，苏木素浅染，脱水，透明，封片观察。以细胞染成棕黄色作为阳性细胞。
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对照：阳性对照是用已知阳性组织切片同时同一条件下染色；替代对照和空白对照是分别用正常兔血清和0.05MTBS代替第一抗体(操作过程相同)；组织学对照是用相邻的连续切片做常规HE染色。
4 统计学处理：X2检验。
结果
EGFR阳性信号位于胞膜胞浆，P53蛋白阳性信号位于胞核。EGFR在胃癌组织表达阳性率为53.3%(16/30)，伴淋巴结转移者阳性率62.5%(10/16)，无淋巴结转移者阳性率44.4%(6/14)，两者差异无显著性，χ02=0.503，P>0.05。P53蛋白在胃癌组织表达阳性率为30%(9/30)，伴淋巴结转移者阳性率50%(8/16)，显著高于无淋巴结转移者阳性率7.15%(1/14)，χ22=4.649，P<0.05。
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讨论
EGFR是原癌基因C-erbB-1的表达产物，是一种具有酪氨酸激酶活性的跨膜糖蛋白，其高表达可引起细胞的过度分裂增殖，对许多肿瘤研究发现EGFR表达是肿瘤预后不良的指标，一些学者认为EGFR表达与胃癌的浸润、分化程度及淋巴结转移有相关性[1]，本文发现有淋巴结转移的胃癌EGFR阳性率虽高于无淋巴结转移者，但统计学处理未达到显著界限，结果不支持前述意见。
P53基因是一种抑癌基因，在许多肿瘤中发现P53基因突变失活。野生型P53基因产物半衰期短，用免疫组织化学方法难以检出，一般认为免疫组化方法检测出P53蛋白表达即表示P53基因突变失活。对于P53蛋白表达与胃癌生物学行为和预后的关系尚存一定分岐，许多研究认为P53蛋白表达与淋巴结转移呈相关，但也有相反的报道[2]。本文发现有淋巴结转移的胃癌P53阳性率显著高于无淋巴结转移者，提示胃癌组织中P53蛋白表达可作为判断淋巴结转移的一个参考指标，此项检查可在手术前通过胃镜取胃癌标本进行，具有实际应用价值。本组病例数尚少，对于淋巴结转移的程度(远近等)与P53表达的关系未能深入研究。
参考文献：
1 朱建强，等.中华肿瘤杂志，1993；15(3)：192
2 龚志军，等.肿瘤，1996；16(6)：609, 百拇医药
单位：北京解放军304医院消化科 100037
关键词：
重庆医学990111
淋巴转移是胃癌的主要转移途径，了解淋巴转移的有无及程度(远近等)对判断胃癌的发展和预后，以及制定合理治疗方案(如手术)十分重要。常规的胃镜、X线造影及CT等难以准确显示胃癌的淋巴转移状况，寻找胃癌淋巴转移的分子标志物具有重要的临床意义。本文应用免疫组织化学LSAB法检测胃癌组织中EGFR(表皮生长因子受体)和P53蛋白的表达状况，探讨它们与胃癌淋巴转移的关系。
材料与方法
1 标本：本院普外科手术切除胃癌标本30例，经病理检查证实，其中16例有淋巴结转移，所有病例术前均未经化疗或放疗。男性26例，女性4例，年龄范围26～81岁。标本经福尔马林固定，常规脱水包埋，5μm连续切片，分别用于HE染色和免疫组织化学染色。
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2 主要试剂：(1)LSAB试剂盒：丹麦DAKO公司产品。(2)抗体：EGF(R)-(1005)和P53(D0-1)为美国Santa Cruz公司产品，工作浓度分别为1∶120和1∶100。(3)3.3′二氨基联苯胺(DAB)、华美公司产品。(4)稀释缓冲液：0.05MTBS(pH7.4)。
3 免疫组织化学LSAB法染色过程：石蜡包埋组织切片在55℃烤箱中烘烤过夜，二甲苯脱蜡，梯度乙醇返水，3%过氧化氢5分钟以去除内源性过氧化酶；3M尿素消化20分钟；正常血清封闭30分钟(室温)后，加-抗[EGF(R)-(1005)或P53(D0-1)]室温下孵育30分钟；加二抗(生物素化猪抗兔IgG或生物素化兔抗鼠IgG)室温下30分钟(工作浓度为1∶400)；加过氧化酶标记链条合素(1∶400)室温下30分钟；(以上每步操作后均用0.05MTBS充分洗涤)。DAB显色约5分钟，苏木素浅染，脱水，透明，封片观察。以细胞染成棕黄色作为阳性细胞。
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对照：阳性对照是用已知阳性组织切片同时同一条件下染色；替代对照和空白对照是分别用正常兔血清和0.05MTBS代替第一抗体(操作过程相同)；组织学对照是用相邻的连续切片做常规HE染色。
4 统计学处理：X2检验。
结果
EGFR阳性信号位于胞膜胞浆，P53蛋白阳性信号位于胞核。EGFR在胃癌组织表达阳性率为53.3%(16/30)，伴淋巴结转移者阳性率62.5%(10/16)，无淋巴结转移者阳性率44.4%(6/14)，两者差异无显著性，χ02=0.503，P>0.05。P53蛋白在胃癌组织表达阳性率为30%(9/30)，伴淋巴结转移者阳性率50%(8/16)，显著高于无淋巴结转移者阳性率7.15%(1/14)，χ22=4.649，P<0.05。
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讨论
EGFR是原癌基因C-erbB-1的表达产物，是一种具有酪氨酸激酶活性的跨膜糖蛋白，其高表达可引起细胞的过度分裂增殖，对许多肿瘤研究发现EGFR表达是肿瘤预后不良的指标，一些学者认为EGFR表达与胃癌的浸润、分化程度及淋巴结转移有相关性[1]，本文发现有淋巴结转移的胃癌EGFR阳性率虽高于无淋巴结转移者，但统计学处理未达到显著界限，结果不支持前述意见。
P53基因是一种抑癌基因，在许多肿瘤中发现P53基因突变失活。野生型P53基因产物半衰期短，用免疫组织化学方法难以检出，一般认为免疫组化方法检测出P53蛋白表达即表示P53基因突变失活。对于P53蛋白表达与胃癌生物学行为和预后的关系尚存一定分岐，许多研究认为P53蛋白表达与淋巴结转移呈相关，但也有相反的报道[2]。本文发现有淋巴结转移的胃癌P53阳性率显著高于无淋巴结转移者，提示胃癌组织中P53蛋白表达可作为判断淋巴结转移的一个参考指标，此项检查可在手术前通过胃镜取胃癌标本进行，具有实际应用价值。本组病例数尚少，对于淋巴结转移的程度(远近等)与P53表达的关系未能深入研究。
参考文献：
1 朱建强，等.中华肿瘤杂志，1993；15(3)：192
2 龚志军，等.肿瘤，1996；16(6)：609, 百拇医药