反相高效液相色谱法测定饮料中的维生素E①
作者：刘绍乾 柴田莹
单位：刘绍乾(湖南医科大学化学教研室 长沙 410078)；柴田莹(德岛大学药学部 日本)
关键词：高效液相色谱法；维生素E；饮料；分析
湖南医科大学学报990105 提要 用反相高效液相色谱法(HPLC)测定饮料中的维生素E(VE)含量。用正己烷提取，在C18柱上进行分析，流动相选用甲醇，流速为1.0ml.min-1，用荧光检测仪在λexc=295nm,λem=330nm处检测。VE浓度在0.2～2.2μg.ml-1范围内线性关系良好(r=0.9995,n=5)，回收率在96.8%以上。此法亦可用于其他食品中VE的分析。
中国图书分类号 O658 Q566
, 百拇医药
Determination of vitamin E in juices by high performance
liquid chromatography(HPLC)
Liu Shaoqian
(Department of Chemistry, Hunan Medical University, Changsha 410078)
Akira Shibata
(Tokushima University, Japan)
A modified method for the determination of tocopherol(vitamin E) in juices by high performance liquid chromatography(HPLC) has been proposed in this paper. The juice samples were deproteinized with ethanol and extracted with hexane. Organic layer was evaporated to dryness with nitrogen after it was separated. Then the residue was redissolved with methanol and injected into a reversed-phase HPLC equipped with a C18 column. The tocopherols were eluted with methanol mobile phase at a flow rate of 1.0ml.min-1 and detected by fluorescence(λexc=295nm,λem=330nm). A good linearity was shown between the concentration of tocopherol and the peak height at the concentration range of 0.2～2.2μg.ml-1 (r=0.9995,n=5). The recovery rate was more than 96.8%, and impurities in the samples were separated completely. This method is sensitive, simple and stable.
, 百拇医药
Key words high performance liquid chromatography; tocopherol; juice; analysis
维生素E(VE)对生殖功能、肌肉代谢有影响，并具有强大的抗氧化作用，可用于治疗习惯性流产、肌营养不良及抗衰老等。近年用高效液相色谱法测定血样及机体其他组织中的VE的报道较多，但鲜见其用于市售饮料中VE的测定。本法通过改进，建立了饮料中VE的HPLC测定方法。该法操作简便，回收率高，稳定性好。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂 Lc-3A岛津高效液相色谱仪、RF-530岛津荧光检测仪、C-R1B岛津数据处理仪、超速离心机及超声波振荡器，来源于日本关东化学品公司。VE，正己烷，甲醇及乙醇均为日本关东化学品公司提供，HPLC级。
1.2 色谱条件 色谱柱为C18柱(3.9mm×15cm)，由日本岛津公司提供。流动相为甲醇；流速为1.0ml.min-1；柱温为30℃；荧光检测波长为λexc=295nm,λem=330nm。
, 百拇医药
1.3 实验材料 100%桔子汁、20%桃子汁、100%混合蔬菜汁，均为日本熊本县酪农业协同组合连合会提供。
1.4 样品处理 100%桔子汁、20%桃子汁和100%混合蔬菜汁各0.1ml，分别加乙醇0.2ml，振荡，再加正己烷1ml，用超声波振荡提取VE。超速离心分离有机相，氮气吹干。残留物用0.4ml甲醇溶解，取10μl进样。色谱图见附图。
附图 几种饮料的色谱图
Fig. HPLC-chromatograms of several juices a.100%橘子汁(orange juice) b.100%蔬菜汁(mixture of vegetable juice) c.20%桃子汁(peach juice)
, http://www.100md.com 1.5 标准曲线 精确称取0.008～0.012g VE，用甲醇作溶剂配成贮备液。分别取一定量的VE贮备液于5ml的容量瓶中，用甲醇稀释至刻度配成0.1～2.4μg.ml-1的VE标准溶液。以5μl进样，用峰高对浓度C作图。
2 结果与讨论
2.1 线性关系 VE浓度在0.2～2.2μg.ml-1范围内，用峰高对浓度C作图得一条几乎通过原点的直线。峰高与浓度之间线性关系良好(r=0.9995,n=5)。
2.2 样品测定结果 三种饮料样品中VE的测定结果见表1。
表1 几种饮料样品中VE的测定结果(
±s,n=6) 样品名称
, 百拇医药
及浓度
VE的保留时间(tR)
(min)
VE的含量
(μg.100ml-1)
桔子汁(100%)
6.09
161±0.6
蔬菜汁(100%)
6.10
380±0.6
, 百拇医药
桃子汁(20%)
6.11
30±0.7
2.3 回收率实验 在测定样品中加已知量的标准VE，按样品处理步骤操作进样，回收率在96.8%～99.3%之间。结果见表2。
表2 加入标样后的回收率 样品体积(ml)
添加标样(ng)
添加后测定值(ng)
回收率(%)
0.1
0.0
164.0
, 百拇医药
-
0.1
31.8
194.8
96.8
0.1
78.4
240.2
97.2
0.1
147.6
310.6
99.3
, http://www.100md.com
0.1
312.5
473.8
99.1
0.1
674.7
833.8
99.3
实验结果显示用正己烷作萃取剂时测定样品中VE的含量比较可靠，重复性高。流动相以甲醇较为适宜，峰形对称性好，分离度高，回收率高，操作方法简便。
作者：刘绍乾 男 36岁 讲师 ①中国卫生部第十八期日本笹川医学奖学金资助项目
, 百拇医药 参考文献
[1]Elisabeth T, Evlelyne WL, Christian D, et al. Rapid qualification of α-tocopherol in plasma and low-and high-density lipoproteins. Clin Chem, 1996,42(3):430-435
[2]Clyde A, Collins, Ching KC. Determination of vitamin A and vitamin acetate by high-performance liquid chromatography with fluorescence detection. J Chromatogr, 1984,317:349-354
[3]Lee BL, Chua SC, Ong HY, et al. High-performance liquid chromatographic method for routine determination of vitamin A and β-carotene in plasma. J Chromatogr B Biomed Appl, 1992,581:41-47
[4]Olmedilla B, Granado F, Rojas HE, et al. A rapid separation of ten carotenoids, alphatocopherol and d-alpha-tocopherol acetate by high-performance liquid chromatography and its application to serum and vegetable samples. J Liq Chromatogr, 1990,2:79-88
1998-08-31 收稿, 百拇医药
单位：刘绍乾(湖南医科大学化学教研室 长沙 410078)；柴田莹(德岛大学药学部 日本)
关键词：高效液相色谱法；维生素E；饮料；分析
湖南医科大学学报990105 提要 用反相高效液相色谱法(HPLC)测定饮料中的维生素E(VE)含量。用正己烷提取，在C18柱上进行分析，流动相选用甲醇，流速为1.0ml.min-1，用荧光检测仪在λexc=295nm,λem=330nm处检测。VE浓度在0.2～2.2μg.ml-1范围内线性关系良好(r=0.9995,n=5)，回收率在96.8%以上。此法亦可用于其他食品中VE的分析。
中国图书分类号 O658 Q566
, 百拇医药
Determination of vitamin E in juices by high performance
liquid chromatography(HPLC)
Liu Shaoqian
(Department of Chemistry, Hunan Medical University, Changsha 410078)
Akira Shibata
(Tokushima University, Japan)
A modified method for the determination of tocopherol(vitamin E) in juices by high performance liquid chromatography(HPLC) has been proposed in this paper. The juice samples were deproteinized with ethanol and extracted with hexane. Organic layer was evaporated to dryness with nitrogen after it was separated. Then the residue was redissolved with methanol and injected into a reversed-phase HPLC equipped with a C18 column. The tocopherols were eluted with methanol mobile phase at a flow rate of 1.0ml.min-1 and detected by fluorescence(λexc=295nm,λem=330nm). A good linearity was shown between the concentration of tocopherol and the peak height at the concentration range of 0.2～2.2μg.ml-1 (r=0.9995,n=5). The recovery rate was more than 96.8%, and impurities in the samples were separated completely. This method is sensitive, simple and stable.
, 百拇医药
Key words high performance liquid chromatography; tocopherol; juice; analysis
维生素E(VE)对生殖功能、肌肉代谢有影响，并具有强大的抗氧化作用，可用于治疗习惯性流产、肌营养不良及抗衰老等。近年用高效液相色谱法测定血样及机体其他组织中的VE的报道较多，但鲜见其用于市售饮料中VE的测定。本法通过改进，建立了饮料中VE的HPLC测定方法。该法操作简便，回收率高，稳定性好。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂 Lc-3A岛津高效液相色谱仪、RF-530岛津荧光检测仪、C-R1B岛津数据处理仪、超速离心机及超声波振荡器，来源于日本关东化学品公司。VE，正己烷，甲醇及乙醇均为日本关东化学品公司提供，HPLC级。
1.2 色谱条件 色谱柱为C18柱(3.9mm×15cm)，由日本岛津公司提供。流动相为甲醇；流速为1.0ml.min-1；柱温为30℃；荧光检测波长为λexc=295nm,λem=330nm。
, 百拇医药
1.3 实验材料 100%桔子汁、20%桃子汁、100%混合蔬菜汁，均为日本熊本县酪农业协同组合连合会提供。
1.4 样品处理 100%桔子汁、20%桃子汁和100%混合蔬菜汁各0.1ml，分别加乙醇0.2ml，振荡，再加正己烷1ml，用超声波振荡提取VE。超速离心分离有机相，氮气吹干。残留物用0.4ml甲醇溶解，取10μl进样。色谱图见附图。
附图 几种饮料的色谱图
Fig. HPLC-chromatograms of several juices a.100%橘子汁(orange juice) b.100%蔬菜汁(mixture of vegetable juice) c.20%桃子汁(peach juice)
, http://www.100md.com 1.5 标准曲线 精确称取0.008～0.012g VE，用甲醇作溶剂配成贮备液。分别取一定量的VE贮备液于5ml的容量瓶中，用甲醇稀释至刻度配成0.1～2.4μg.ml-1的VE标准溶液。以5μl进样，用峰高对浓度C作图。
2 结果与讨论
2.1 线性关系 VE浓度在0.2～2.2μg.ml-1范围内，用峰高对浓度C作图得一条几乎通过原点的直线。峰高与浓度之间线性关系良好(r=0.9995,n=5)。
2.2 样品测定结果 三种饮料样品中VE的测定结果见表1。
表1 几种饮料样品中VE的测定结果(
±s,n=6) 样品名称, 百拇医药
及浓度
VE的保留时间(tR)
(min)
VE的含量
(μg.100ml-1)
桔子汁(100%)
6.09
161±0.6
蔬菜汁(100%)
6.10
380±0.6
, 百拇医药
桃子汁(20%)
6.11
30±0.7
2.3 回收率实验 在测定样品中加已知量的标准VE，按样品处理步骤操作进样，回收率在96.8%～99.3%之间。结果见表2。
表2 加入标样后的回收率 样品体积(ml)
添加标样(ng)
添加后测定值(ng)
回收率(%)
0.1
0.0
164.0
, 百拇医药
-
0.1
31.8
194.8
96.8
0.1
78.4
240.2
97.2
0.1
147.6
310.6
99.3
, http://www.100md.com
0.1
312.5
473.8
99.1
0.1
674.7
833.8
99.3
实验结果显示用正己烷作萃取剂时测定样品中VE的含量比较可靠，重复性高。流动相以甲醇较为适宜，峰形对称性好，分离度高，回收率高，操作方法简便。
作者：刘绍乾 男 36岁 讲师 ①中国卫生部第十八期日本笹川医学奖学金资助项目
, 百拇医药 参考文献
[1]Elisabeth T, Evlelyne WL, Christian D, et al. Rapid qualification of α-tocopherol in plasma and low-and high-density lipoproteins. Clin Chem, 1996,42(3):430-435
[2]Clyde A, Collins, Ching KC. Determination of vitamin A and vitamin acetate by high-performance liquid chromatography with fluorescence detection. J Chromatogr, 1984,317:349-354
[3]Lee BL, Chua SC, Ong HY, et al. High-performance liquid chromatographic method for routine determination of vitamin A and β-carotene in plasma. J Chromatogr B Biomed Appl, 1992,581:41-47
[4]Olmedilla B, Granado F, Rojas HE, et al. A rapid separation of ten carotenoids, alphatocopherol and d-alpha-tocopherol acetate by high-performance liquid chromatography and its application to serum and vegetable samples. J Liq Chromatogr, 1990,2:79-88
1998-08-31 收稿, 百拇医药