溴甲酚绿试剂配制的改进
作者：郑健彬 陈小娟
单位：广东医学院附属医院检验科，湛江 524001
关键词：溴甲酚绿；化学试剂；酸碱度；温度
广东医学院学报JOURNAL OF GUANGDONG MEDICAL COLLEGE1999年 第17卷 第1期 Vol 血清白蛋白测定是临床实验室最常见的检查项目之一，目前推荐的测定方法是溴甲酚绿法[1].由于溴甲酚绿(BCG)试剂的配制方法有多种，而BCG试剂易受pH变化和温度的影响，使其性能不稳定.在工作实践中，作者对该试剂的配制方法进行了改进.改进后的BCG 试剂经过实验和两年多的临床应用，证明其具有配法简单、性质稳定、结果可靠等优点.
1 材料与方法
1.1 主要试剂 溴甲酚绿(BCG)、无水乙醇、叠氮钠、聚氧乙烯月桂醚(Birj-35)、柠檬酸、柠檬酸钠(均为分析纯).测定样本均为上海生物制品研究所生产的定质血清，批号分别为891003、910102、910578、921234.
, 百拇医药
1.2 配制方法 (1)试剂贮存液：①2%BCG乙醇溶液：称取BCG2g，加无水乙醇溶解至100mL.② 10%叠氮钠溶液：溶解叠氮钠10g于100mL 蒸馏水中.③30%聚氧乙烯月桂醚(Birj-35)溶液：溶解30gBirj-35于约80mL蒸馏水中，加热溶解，冷却后加水至100mL.④1mol/L柠檬酸溶液：柠檬酸21g，10%叠氮钠0.1mL，加蒸馏水至100mL.⑤1mol/L柠檬酸钠溶液：柠檬酸钠29.41g，10%叠氮钠0.1mL，加蒸馏水至100mL.(2)试剂应用液：取2%BCG乙醇溶液5mL，30%叠氮钠溶液1mL，10%Brij-35溶液4mL，1mol/L柠檬酸溶液48mL，1mol/L柠檬酸钠溶液38mL，加蒸馏水至1000mL.
1.3 白蛋白测定方法 按《全国临床检验操作规程》[2].
2 结果
2.1 时间与温度对pH的影响 当室温大于30℃时，原BCG试剂应用液在配制1个月后，其pH波动范围大于1，而改进后的应用液在刚配制完成和贮存2个月时间内，以及室温在18℃、25℃、30℃等多种条件下，用PHS-2C型精密酸度计(上海雷磁仪器厂生产)测其pH值，pH波动范围均在0.05范围内，符合配制要求。按该法配制，pH值恒定，每次准确配制，pH不需校正.
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2.2 线性范围 白蛋白浓度在16.7～66.8g/L范围内线性良好，线性方程为y＝0.009597x+0.01227，相关系数r＝0.99999.
2.3 重复试验 批号891003定值血清(定值为37g/L)，连续测定20次，得x＝37.01g/L，SD＝26，CV＝0.7%.4份不同批号的定值血清，在不同的时间内测定20次，平均CV为2.06%.
2.4 回收实验 取定值为34.9g/L的血清，分别加入17.6、27.4、41、1g/L的蛋白标准液，回收率分别为 98.5%、101.3%、101.7%.
2.5 显色稳定性 标本加入试剂后，置室温15min，A值升高3%，显色时间15min至60min内吸光度基本不变.
2.6 试剂对比实验 取定值为37g/L的血清，原试剂测定结果为41.6g/L，VIS值为168；新试剂测定结果为38.2g/L，VIS值为43.
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2.7 试剂稳定测试 在试剂刚配制完毕，及置室温1个月、2个月、3个月、0.5a，取定值为37g/L的血清进行测定，其结果分别为37.2，37.5，37.1，37.7，平均CV为0.7%.
2.8 手工操作与仪器测定比较 取不同病人血清20份，分别用全自动生化分析仪(日本岛津 CL-7200型)和手工操作进行测定，经t检验结果为t＝0.176，D>0.05，差异无显著性.
3 讨论
原配方中BCG用氢氧化钠溶液溶解，pH较易受影响，本文用乙醇溶解BCG，性能稳定.当浓度为2%的乙醇溶液时，BCG能达到最大的溶解度.改进后的BCG贮存液用量少，配制1000mL的应用液只需贮存液5mL，而原配方需贮存液250mL；性能稳定，贮存液置冰箱1a性质不变，应用液置室温0.5a不变，每次准确配制，pH不需校正，而原配方贮存液在每次配制应用液时，均需校正pH；结果可靠，作者用改进后的BCG试剂测定的白蛋白，在全省和全国的质控考核中，成绩均为优秀(平均VIS<50).用柠檬酸-柠檬酸钠配制缓冲液，价格便宜，易于购买，适合临床大量使用.由于血清中蛋白质成分复杂，因此用该试剂测定白蛋白时，必须选择适当的标准液，才能获得满意效果.(作者建议使用已知的定值参考血清作标准，效果很好).该试剂不仅适用于手工操作，也适用于全自动生化分析仪的测定.
4 参考文献
1 上海医学化验所编.临床生物化学.上海：上海科技出版社，1979.47
2 叶应妩，王毓三.全国临床检验操作规程.第2版.南京：东南大学出版社，1997.157
收稿日期：1998-05-04, http://www.100md.com
单位：广东医学院附属医院检验科，湛江 524001
关键词：溴甲酚绿；化学试剂；酸碱度；温度
广东医学院学报JOURNAL OF GUANGDONG MEDICAL COLLEGE1999年 第17卷 第1期 Vol 血清白蛋白测定是临床实验室最常见的检查项目之一，目前推荐的测定方法是溴甲酚绿法[1].由于溴甲酚绿(BCG)试剂的配制方法有多种，而BCG试剂易受pH变化和温度的影响，使其性能不稳定.在工作实践中，作者对该试剂的配制方法进行了改进.改进后的BCG 试剂经过实验和两年多的临床应用，证明其具有配法简单、性质稳定、结果可靠等优点.
1 材料与方法
1.1 主要试剂 溴甲酚绿(BCG)、无水乙醇、叠氮钠、聚氧乙烯月桂醚(Birj-35)、柠檬酸、柠檬酸钠(均为分析纯).测定样本均为上海生物制品研究所生产的定质血清，批号分别为891003、910102、910578、921234.
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1.2 配制方法 (1)试剂贮存液：①2%BCG乙醇溶液：称取BCG2g，加无水乙醇溶解至100mL.② 10%叠氮钠溶液：溶解叠氮钠10g于100mL 蒸馏水中.③30%聚氧乙烯月桂醚(Birj-35)溶液：溶解30gBirj-35于约80mL蒸馏水中，加热溶解，冷却后加水至100mL.④1mol/L柠檬酸溶液：柠檬酸21g，10%叠氮钠0.1mL，加蒸馏水至100mL.⑤1mol/L柠檬酸钠溶液：柠檬酸钠29.41g，10%叠氮钠0.1mL，加蒸馏水至100mL.(2)试剂应用液：取2%BCG乙醇溶液5mL，30%叠氮钠溶液1mL，10%Brij-35溶液4mL，1mol/L柠檬酸溶液48mL，1mol/L柠檬酸钠溶液38mL，加蒸馏水至1000mL.
1.3 白蛋白测定方法 按《全国临床检验操作规程》[2].
2 结果
2.1 时间与温度对pH的影响 当室温大于30℃时，原BCG试剂应用液在配制1个月后，其pH波动范围大于1，而改进后的应用液在刚配制完成和贮存2个月时间内，以及室温在18℃、25℃、30℃等多种条件下，用PHS-2C型精密酸度计(上海雷磁仪器厂生产)测其pH值，pH波动范围均在0.05范围内，符合配制要求。按该法配制，pH值恒定，每次准确配制，pH不需校正.
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2.2 线性范围 白蛋白浓度在16.7～66.8g/L范围内线性良好，线性方程为y＝0.009597x+0.01227，相关系数r＝0.99999.
2.3 重复试验 批号891003定值血清(定值为37g/L)，连续测定20次，得x＝37.01g/L，SD＝26，CV＝0.7%.4份不同批号的定值血清，在不同的时间内测定20次，平均CV为2.06%.
2.4 回收实验 取定值为34.9g/L的血清，分别加入17.6、27.4、41、1g/L的蛋白标准液，回收率分别为 98.5%、101.3%、101.7%.
2.5 显色稳定性 标本加入试剂后，置室温15min，A值升高3%，显色时间15min至60min内吸光度基本不变.
2.6 试剂对比实验 取定值为37g/L的血清，原试剂测定结果为41.6g/L，VIS值为168；新试剂测定结果为38.2g/L，VIS值为43.
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2.7 试剂稳定测试 在试剂刚配制完毕，及置室温1个月、2个月、3个月、0.5a，取定值为37g/L的血清进行测定，其结果分别为37.2，37.5，37.1，37.7，平均CV为0.7%.
2.8 手工操作与仪器测定比较 取不同病人血清20份，分别用全自动生化分析仪(日本岛津 CL-7200型)和手工操作进行测定，经t检验结果为t＝0.176，D>0.05，差异无显著性.
3 讨论
原配方中BCG用氢氧化钠溶液溶解，pH较易受影响，本文用乙醇溶解BCG，性能稳定.当浓度为2%的乙醇溶液时，BCG能达到最大的溶解度.改进后的BCG贮存液用量少，配制1000mL的应用液只需贮存液5mL，而原配方需贮存液250mL；性能稳定，贮存液置冰箱1a性质不变，应用液置室温0.5a不变，每次准确配制，pH不需校正，而原配方贮存液在每次配制应用液时，均需校正pH；结果可靠，作者用改进后的BCG试剂测定的白蛋白，在全省和全国的质控考核中，成绩均为优秀(平均VIS<50).用柠檬酸-柠檬酸钠配制缓冲液，价格便宜，易于购买，适合临床大量使用.由于血清中蛋白质成分复杂，因此用该试剂测定白蛋白时，必须选择适当的标准液，才能获得满意效果.(作者建议使用已知的定值参考血清作标准，效果很好).该试剂不仅适用于手工操作，也适用于全自动生化分析仪的测定.
4 参考文献
1 上海医学化验所编.临床生物化学.上海：上海科技出版社，1979.47
2 叶应妩，王毓三.全国临床检验操作规程.第2版.南京：东南大学出版社，1997.157
收稿日期：1998-05-04, http://www.100md.com