CD44、PCNA表达与乳腺癌淋巴结转移及预后的关系
作者：何彦丽 张雅洁 黄书伟 顾莹莹 张惠球
单位：何彦丽 张雅洁 黄书伟 顾莹莹 张惠球 广州医学院病理教研室，广州 510182
关键词：CD44；PCNA；乳腺癌；淋巴结转移
提要 应用LSAB法对76例乳腺癌伴淋巴结转移和无转移组CD44、PCNA(增殖细胞核抗原)表达进行了免疫组化检测，并结合临床资料分析。结果显示：CD44阳性率在乳腺癌伴淋巴结转移组为70.6%， 无转移组为45.2%，两组间差异显著(P<0.05)，随着组织学分级的增高CD44表达呈递增趋势，Ⅰ级与Ⅱ、Ⅲ级间阳性率存在显著性差异(P<0.05)；PCNA阳性率在淋巴结转移组与无转移组间比较无显著差异，而与组织学分级间差异显著(P<0.01)。CD44与PCNA表达存在平行关系。提示CD44表达与乳腺癌淋巴结转移及预后有关，CD44、PCNA联合检测对评估乳腺癌患者预后有重要意义。
, 百拇医药
中图分类号 R737.9
The Relationship Between the Expression ofCD44,PCNA and the Lymphnode M etastasis,Prognosis of Breast Cancer
He Yanli,Zhang Yajie,Huang Shuwei,et al
(Department of Pathology,Guangzhou Medical College,Guangzhou,510182)
LSAB immunohistochemistry method was applied to detect the expression of CD44 and PCNA(proliferating cell nuclear antigen) in 76 cases of breast cancer with or without metastasis,and the results were analyzed in combination with the related clinical data. The results indicated that the frequency of positive expresson of CD44 in the group with metastasis was 70.6%,and that in the group without metastasis was 45.2%,the difference between the two groups was statistically significant(P<0.05). With the elevation of the histopathological grading the frequency of CD44 expression gradually increased ,statistically significant difference in the frequencies among cases of grade Ⅰ,grade Ⅱ,and grade Ⅲ was observed (P<0.05).Frequencies of PCNA exqression in groups of cases with and without lymphnode metastasis were not statistically different from each other,however ,that in groups of different histopathological grading were with significant difference(P<0.01).Expression of CD44 appeared parallel with that of PCNA.The present study indicates that the expression of CD44 is correlated to the lymphnode metastasis and prognosis of breast cancer,and the combinated detections of expression of CD44 and PCNA are with significant value for the estimation of the prognosis of breast cancer.
, 百拇医药
Key words CD44;PCNA;Lymphnode metastasis;Breast carcinoma
CD44是分布极为广泛的细胞表面跨膜糖蛋白，属白细胞粘附分子，又称透明质酸受体或特异性淋巴细胞归巢受体，介导细胞与细胞，细胞与基质间的粘连和解离。近年来研究表明，CD44表达与恶性淋巴瘤、胃肠道肿瘤转移关系密切，但CD44表达与乳腺癌转移的关系尚存争议[2]。国内罕见报道。PCNA代表细 胞增殖活性，在判定乳腺癌组织学分级及其预后方面有一定参考价值[3]。我们应用LSAB法检测乳腺癌组织中CD44、PCNA表达情况，旨在探讨它们与乳腺癌淋巴结转移及预后的关系。
1 材料和方法
1.1 材料
, 百拇医药
材料选自广州医学院第一附属医院1995～1997年间乳腺癌手术切除标本，标本均经10%福尔马林固定，石蜡包埋，制成5μm切片，进行常规及免疫组化染色。患者全为女性，年龄最大81岁，最小26岁，平均53.5岁。
1.2 方法
1.2.1 免疫组化方法
采用LSAB法，切片常规脱蜡至水后用1%胰蛋白酶消化20min，蒸馏水洗后再置于枸橼酸缓冲液中微波抗原修复10min，室温冷却至40℃，余步骤按试剂盒说明书进行，DAB显色，苏木素衬染，树胶封片。所用一抗CD44、PCNA鼠抗人单克隆抗体，K681鼠、兔通用试剂盒均购自DAKO公司，每批实验均设立阳性对照，阴性对照以PBS代替一抗：CD44、PCNA抗体稀释度分别为1∶40、1∶80。
1.2.2 阳性结果判定：CD44阳性为肿癌细胞膜内表面出现棕 黄色颗粒，PCNA为细胞核着色，核内出现棕黄色颗粒判为阳性。
, 百拇医药
1.2.3 统计学处理 采用χ2检验。
2 结果
76例乳腺癌标本中CD44阳性表达者43例，阳性率为56.6%，PCNA阳性表达66例，阳性率为86.9%。
2.1 CD44、PCNA表达与患者年龄的关系
按≤50岁，>50岁两个年龄组段进行分组，比较两组间CD44阳性表达率，P>0.05，差别无显著性。
2.2 CD44、PCNA表达与肿瘤大小的关系
按肿瘤最大径≤2.0，≤5.0及>5.0分为三组，三组间阳性率比较差别无统计学意义。
, 百拇医药
2.3 CD44、PCNA表达与乳腺癌淋巴结转的关系
76例乳腺癌伴淋巴结转移者34例，其中CD44阳性24例(图片1)，阳性率为70.6%，而 无淋巴结转移组42例中仅19例呈阳性表达，阳性率45.2%，两组间差异显著，P<0.05);PCNA阳 性表达在淋巴结转移组与无转移组分别为90.9%(38/42),84.1%(28/34)，差别无显著性。(附表1 )。
图1 乳腺癌(单纯癌)伴淋巴结转移CD44表达阳性(LSAB染色，400×)
表1CD44表达与乳腺癌腋下淋巴结转移的关系 淋巴结转移情况
, 百拇医药
阳性
率%
χ2值
P值
阳性
率%
χ2值
P值
有
24
10
70.6
, 百拇医药
38
4
90.9
无
19
23
45.2
4.92
<0.05
28
6
84.1
1.08
, 百拇医药 >0.05
2.4 CD44、PCNA表达与乳腺癌组织学分级的关系
除去不能进行组织学分级的10例乳腺癌(包括4例典型髓样癌，1例原位癌，3例早浸癌，2例特殊类型癌)，余66例乳腺癌按改良Bloom-R标准[1]即根据核异型性；腺管形成情况；核分裂相多少进行评价，按总分划分为三级，Ⅰ级(3～5分)；Ⅱ级(6～7分)；Ⅲ级(8～9分)。由于Ⅲ级中阴性表达例数少，故将其与Ⅱ级归于一类，CD44、PCNA阳性表达在Ⅰ级与Ⅱ、Ⅲ级间存在显著性差异(图片2)表2。
图2 乳腺单纯癌,PCNA表达阳性(LSAB染色，400×)
表2 CD44、PCNA表达与乳腺癌组织学分级的关系 组织学分级
, http://www.100md.com
阳性
率%
χ2值
P值
阳性
率%
χ2值
P值
Ⅰ级
6
8
42.9
, 百拇医药
7
7
50
4.53
<0.05
11.92
<0.01
Ⅱ+Ⅲ级
38
14
73.1
48
4
, 百拇医药
92.3
2.5 CD44与PCNA表达间的关系
76例乳腺癌CD44表达阳性的43例中PCNA表达阳性41例(95.3%)，且多数为强阳性表达 70%(阳性细胞数>50%)，而CD44阴性的33例乳腺癌组织中PCNA阳性22例(66.7%)，强阳性表达43.3%，CD44与PCNA阳性表达间存在一定的平行关系。3 讨论
人CD44基因位于染色体11P，由20个外显子构成，根据编码CD44分子外显子组成的不同将CD44分为CD44S和CD44V两型，CD44分子广泛存 在于正常淋巴细胞，成纤维细胞，上皮细胞表面[4]。其主要功能之一是介导淋巴细胞与后毛细血管静脉中高内皮细胞结合，使淋巴细胞易于穿过血管壁回到淋巴组织，即介导淋巴细胞特异性归巢。Matsumura等在1992年首次应用Southern blot杂交法证实乳腺癌组织中CD44呈过表达，并发现在巳转移乳腺癌原发灶及转移灶中均能检测到9条以上信号反应很强的杂交带，而正常组织中仅能检测到1～2条低水平表达的杂交带，认为CD44表达与乳腺癌发生淋巴结转移有关[4]。Kafman采用免疫组化法亦发现CD44在乳腺癌组织中的表达升高，且在伴淋巴结转移组表现尤为明显[5]。但也有一些学者的研究结果与此相左，如Friedrichs采用RT-PCR及免疫组化法研究发现CD44高表达与乳腺癌细胞较高的分化有关，而与淋巴结转移及预后无关[6]。我们采用LSAB免疫组化法对76例乳腺癌组织进行CD44表达的检测，发现CD44表达在淋巴结转移组与无转移组阳性率差别显著，分别为70.6%及45.2%，与最近国内的一篇报道结果一致(转移组阳性率为73.3%，无转移组为40%)[7]。并发现CD44表达与乳腺癌组织学分级关系 密切，Ⅰ级与Ⅱ、Ⅲ级间存在显著性差异，现已证实乳腺癌组织学分组较单纯分型对判定预后更有意义[1]，因此CD44过表达与乳腺癌淋巴结转移及预后有关，并 认为表达了CD44的肺瘤细胞就如同激活的淋巴细胞归巢一样，易于逃脱机体的免疫监视功能，侵入淋巴组织形成转移。
, 百拇医药
PCNA为分子量为33～36KD的含261个氨基酸的非组胺核蛋白，为DNA聚合酶δ的附属蛋白，可促使DNA链的合成与延伸。PCNA代表细胞增殖活性，一般认为增殖活性高的细胞由于细胞间张力增大，粘附性降低，更易于脱离原发灶向远处扩散、转移。PCNA对于判定乳腺癌及多种实体肿瘤的组织分化程度及临床预后具有一定参考价值。我们的研究结果也证实PCNA表达与乳腺癌组织学分级关系密切，但与淋巴结转移无关，与Aaltomaa等[8]的报道一致，同时比较CD44 ，PCNA表达情况，发现两者间存在一定平行关系，进一步提示CD44、PCNA可作为判定乳腺癌患者预后情况的指标，CD44、PCNA联合检测对于指导乳腺癌患者术后治疗，高危病人筛选，预防复发具有重要意义。
参考文献
1 Dalton LW,PageDL,Dupont WD.Histologic grading of breast carcinoma. A reproducibility study.Cancer,1994;73:2765
, 百拇医药
2 Gunthert U,Stauder R,Mayer B,et a1.Are CD44 variant isoforms involv ed in human tumor progression?Cancer-Surv,1995;24:19
3 Siitonen SM,Isola jj,Rantala IS,et al.Intratumor variation in cell prolifertionin breast cancinoma as determined by antiproliferating cell nuclear antigen monoclonal antibody and automated image analysiis.Am J Clin Pathol,1993;99:226
4 Matsumura Y,Tarin D. Significance of CD44 gene products forcancer diagnosis and disease evalution.Lancet,1992;340:1053
, http://www.100md.com
5 Kaufmann M,Heider KH,Sinn HP,etal.CD44 variant exon epitopes in primary breast cancer and length of survival.Lancet,1995;345(8950):615
6 Friedrichs K,Franke F,Lisboa BW,et al.CD44 isoforms correlate with cellular differentiation but not withprognosis in human breast cancer. Cancer-Res,1995;55(22):5424
7 毛慧生，冯玉梅，刘红.乳腺癌淋巴结转移与NM23、CD44基因表达产物定量分析.中国肿瘤临床，1988；25(1)：19
8 Aaltomaa S.Lippomen P,Syrjanen K.Prognostic value of cellproliferation in breast cancer as determined by proliferation cell nuclear antigen(PCNA) immunostaining. AnticancerRes,1992;12(4):1281
(收稿：1998-12-05), 百拇医药
单位：何彦丽 张雅洁 黄书伟 顾莹莹 张惠球 广州医学院病理教研室，广州 510182
关键词：CD44；PCNA；乳腺癌；淋巴结转移
提要 应用LSAB法对76例乳腺癌伴淋巴结转移和无转移组CD44、PCNA(增殖细胞核抗原)表达进行了免疫组化检测，并结合临床资料分析。结果显示：CD44阳性率在乳腺癌伴淋巴结转移组为70.6%， 无转移组为45.2%，两组间差异显著(P<0.05)，随着组织学分级的增高CD44表达呈递增趋势，Ⅰ级与Ⅱ、Ⅲ级间阳性率存在显著性差异(P<0.05)；PCNA阳性率在淋巴结转移组与无转移组间比较无显著差异，而与组织学分级间差异显著(P<0.01)。CD44与PCNA表达存在平行关系。提示CD44表达与乳腺癌淋巴结转移及预后有关，CD44、PCNA联合检测对评估乳腺癌患者预后有重要意义。
, 百拇医药
中图分类号 R737.9
The Relationship Between the Expression ofCD44,PCNA and the Lymphnode M etastasis,Prognosis of Breast Cancer
He Yanli,Zhang Yajie,Huang Shuwei,et al
(Department of Pathology,Guangzhou Medical College,Guangzhou,510182)
LSAB immunohistochemistry method was applied to detect the expression of CD44 and PCNA(proliferating cell nuclear antigen) in 76 cases of breast cancer with or without metastasis,and the results were analyzed in combination with the related clinical data. The results indicated that the frequency of positive expresson of CD44 in the group with metastasis was 70.6%,and that in the group without metastasis was 45.2%,the difference between the two groups was statistically significant(P<0.05). With the elevation of the histopathological grading the frequency of CD44 expression gradually increased ,statistically significant difference in the frequencies among cases of grade Ⅰ,grade Ⅱ,and grade Ⅲ was observed (P<0.05).Frequencies of PCNA exqression in groups of cases with and without lymphnode metastasis were not statistically different from each other,however ,that in groups of different histopathological grading were with significant difference(P<0.01).Expression of CD44 appeared parallel with that of PCNA.The present study indicates that the expression of CD44 is correlated to the lymphnode metastasis and prognosis of breast cancer,and the combinated detections of expression of CD44 and PCNA are with significant value for the estimation of the prognosis of breast cancer.
, 百拇医药
Key words CD44;PCNA;Lymphnode metastasis;Breast carcinoma
CD44是分布极为广泛的细胞表面跨膜糖蛋白，属白细胞粘附分子，又称透明质酸受体或特异性淋巴细胞归巢受体，介导细胞与细胞，细胞与基质间的粘连和解离。近年来研究表明，CD44表达与恶性淋巴瘤、胃肠道肿瘤转移关系密切，但CD44表达与乳腺癌转移的关系尚存争议[2]。国内罕见报道。PCNA代表细 胞增殖活性，在判定乳腺癌组织学分级及其预后方面有一定参考价值[3]。我们应用LSAB法检测乳腺癌组织中CD44、PCNA表达情况，旨在探讨它们与乳腺癌淋巴结转移及预后的关系。
1 材料和方法
1.1 材料
, 百拇医药
材料选自广州医学院第一附属医院1995～1997年间乳腺癌手术切除标本，标本均经10%福尔马林固定，石蜡包埋，制成5μm切片，进行常规及免疫组化染色。患者全为女性，年龄最大81岁，最小26岁，平均53.5岁。
1.2 方法
1.2.1 免疫组化方法
采用LSAB法，切片常规脱蜡至水后用1%胰蛋白酶消化20min，蒸馏水洗后再置于枸橼酸缓冲液中微波抗原修复10min，室温冷却至40℃，余步骤按试剂盒说明书进行，DAB显色，苏木素衬染，树胶封片。所用一抗CD44、PCNA鼠抗人单克隆抗体，K681鼠、兔通用试剂盒均购自DAKO公司，每批实验均设立阳性对照，阴性对照以PBS代替一抗：CD44、PCNA抗体稀释度分别为1∶40、1∶80。
1.2.2 阳性结果判定：CD44阳性为肿癌细胞膜内表面出现棕 黄色颗粒，PCNA为细胞核着色，核内出现棕黄色颗粒判为阳性。
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1.2.3 统计学处理 采用χ2检验。
2 结果
76例乳腺癌标本中CD44阳性表达者43例，阳性率为56.6%，PCNA阳性表达66例，阳性率为86.9%。
2.1 CD44、PCNA表达与患者年龄的关系
按≤50岁，>50岁两个年龄组段进行分组，比较两组间CD44阳性表达率，P>0.05，差别无显著性。
2.2 CD44、PCNA表达与肿瘤大小的关系
按肿瘤最大径≤2.0，≤5.0及>5.0分为三组，三组间阳性率比较差别无统计学意义。
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2.3 CD44、PCNA表达与乳腺癌淋巴结转的关系
76例乳腺癌伴淋巴结转移者34例，其中CD44阳性24例(图片1)，阳性率为70.6%，而 无淋巴结转移组42例中仅19例呈阳性表达，阳性率45.2%，两组间差异显著，P<0.05);PCNA阳 性表达在淋巴结转移组与无转移组分别为90.9%(38/42),84.1%(28/34)，差别无显著性。(附表1 )。
图1 乳腺癌(单纯癌)伴淋巴结转移CD44表达阳性(LSAB染色，400×)
表1CD44表达与乳腺癌腋下淋巴结转移的关系 淋巴结转移情况
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阳性
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阳性
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1.08
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2.4 CD44、PCNA表达与乳腺癌组织学分级的关系
除去不能进行组织学分级的10例乳腺癌(包括4例典型髓样癌，1例原位癌，3例早浸癌，2例特殊类型癌)，余66例乳腺癌按改良Bloom-R标准[1]即根据核异型性；腺管形成情况；核分裂相多少进行评价，按总分划分为三级，Ⅰ级(3～5分)；Ⅱ级(6～7分)；Ⅲ级(8～9分)。由于Ⅲ级中阴性表达例数少，故将其与Ⅱ级归于一类，CD44、PCNA阳性表达在Ⅰ级与Ⅱ、Ⅲ级间存在显著性差异(图片2)表2。
图2 乳腺单纯癌,PCNA表达阳性(LSAB染色，400×)
表2 CD44、PCNA表达与乳腺癌组织学分级的关系 组织学分级
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阳性
率%
χ2值
P值
阳性
率%
χ2值
P值
Ⅰ级
6
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42.9
, 百拇医药
7
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4.53
<0.05
11.92
<0.01
Ⅱ+Ⅲ级
38
14
73.1
48
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92.3
2.5 CD44与PCNA表达间的关系
76例乳腺癌CD44表达阳性的43例中PCNA表达阳性41例(95.3%)，且多数为强阳性表达 70%(阳性细胞数>50%)，而CD44阴性的33例乳腺癌组织中PCNA阳性22例(66.7%)，强阳性表达43.3%，CD44与PCNA阳性表达间存在一定的平行关系。3 讨论
人CD44基因位于染色体11P，由20个外显子构成，根据编码CD44分子外显子组成的不同将CD44分为CD44S和CD44V两型，CD44分子广泛存 在于正常淋巴细胞，成纤维细胞，上皮细胞表面[4]。其主要功能之一是介导淋巴细胞与后毛细血管静脉中高内皮细胞结合，使淋巴细胞易于穿过血管壁回到淋巴组织，即介导淋巴细胞特异性归巢。Matsumura等在1992年首次应用Southern blot杂交法证实乳腺癌组织中CD44呈过表达，并发现在巳转移乳腺癌原发灶及转移灶中均能检测到9条以上信号反应很强的杂交带，而正常组织中仅能检测到1～2条低水平表达的杂交带，认为CD44表达与乳腺癌发生淋巴结转移有关[4]。Kafman采用免疫组化法亦发现CD44在乳腺癌组织中的表达升高，且在伴淋巴结转移组表现尤为明显[5]。但也有一些学者的研究结果与此相左，如Friedrichs采用RT-PCR及免疫组化法研究发现CD44高表达与乳腺癌细胞较高的分化有关，而与淋巴结转移及预后无关[6]。我们采用LSAB免疫组化法对76例乳腺癌组织进行CD44表达的检测，发现CD44表达在淋巴结转移组与无转移组阳性率差别显著，分别为70.6%及45.2%，与最近国内的一篇报道结果一致(转移组阳性率为73.3%，无转移组为40%)[7]。并发现CD44表达与乳腺癌组织学分级关系 密切，Ⅰ级与Ⅱ、Ⅲ级间存在显著性差异，现已证实乳腺癌组织学分组较单纯分型对判定预后更有意义[1]，因此CD44过表达与乳腺癌淋巴结转移及预后有关，并 认为表达了CD44的肺瘤细胞就如同激活的淋巴细胞归巢一样，易于逃脱机体的免疫监视功能，侵入淋巴组织形成转移。
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PCNA为分子量为33～36KD的含261个氨基酸的非组胺核蛋白，为DNA聚合酶δ的附属蛋白，可促使DNA链的合成与延伸。PCNA代表细胞增殖活性，一般认为增殖活性高的细胞由于细胞间张力增大，粘附性降低，更易于脱离原发灶向远处扩散、转移。PCNA对于判定乳腺癌及多种实体肿瘤的组织分化程度及临床预后具有一定参考价值。我们的研究结果也证实PCNA表达与乳腺癌组织学分级关系密切，但与淋巴结转移无关，与Aaltomaa等[8]的报道一致，同时比较CD44 ，PCNA表达情况，发现两者间存在一定平行关系，进一步提示CD44、PCNA可作为判定乳腺癌患者预后情况的指标，CD44、PCNA联合检测对于指导乳腺癌患者术后治疗，高危病人筛选，预防复发具有重要意义。
参考文献
1 Dalton LW,PageDL,Dupont WD.Histologic grading of breast carcinoma. A reproducibility study.Cancer,1994;73:2765
, 百拇医药
2 Gunthert U,Stauder R,Mayer B,et a1.Are CD44 variant isoforms involv ed in human tumor progression?Cancer-Surv,1995;24:19
3 Siitonen SM,Isola jj,Rantala IS,et al.Intratumor variation in cell prolifertionin breast cancinoma as determined by antiproliferating cell nuclear antigen monoclonal antibody and automated image analysiis.Am J Clin Pathol,1993;99:226
4 Matsumura Y,Tarin D. Significance of CD44 gene products forcancer diagnosis and disease evalution.Lancet,1992;340:1053
, http://www.100md.com
5 Kaufmann M,Heider KH,Sinn HP,etal.CD44 variant exon epitopes in primary breast cancer and length of survival.Lancet,1995;345(8950):615
6 Friedrichs K,Franke F,Lisboa BW,et al.CD44 isoforms correlate with cellular differentiation but not withprognosis in human breast cancer. Cancer-Res,1995;55(22):5424
7 毛慧生，冯玉梅，刘红.乳腺癌淋巴结转移与NM23、CD44基因表达产物定量分析.中国肿瘤临床，1988；25(1)：19
8 Aaltomaa S.Lippomen P,Syrjanen K.Prognostic value of cellproliferation in breast cancer as determined by proliferation cell nuclear antigen(PCNA) immunostaining. AnticancerRes,1992;12(4):1281
(收稿：1998-12-05), 百拇医药