男性不育精浆C3d和C3的测定及与抗精子抗体的关系
作者：高正洪
单位：靖江市人民医院检验科，江苏靖江214500
关键词：男性不育；抗精子抗体；C3d；C3
临床检验杂志990123 抗原抗体复合物及某些微生物等可激活补体系统，引起补体的活化。C3被C3转化酶裂解成C3a、C3b片断，后者进一步被裂解成C3c、C3f和C3dg，C3dg再被水解成C3d、C3g，因此C3d的含量可反映补体活化的程度。在男性不育患者中，抗精子抗体(AsAb)与精子相关抗原的结合也可导致补体的活化，使C3d含量增加。活化的补体与抗原-抗体复合物结合可引起精子结构和功能的改变，因而在免疫性不育的发病机制中起重要作用，因此测定精浆中C3d与C3的含量具有重要的临床价值。本文报告用ELISA检测精浆中的C3d及C3，并探讨了其与AsAb的关系，现报告如下：
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1 材料和方法
1.1 标本来源 生育男性8例，系妻子已生育一子女者；不育男性42例，均为结婚二年以上，性生活正常而妻子未受孕者。所有精浆标本均在室温自行液化后，于一小时内2 500 r/min，15 min分离上层精浆，置-20℃冰冻保存备用。同时抽取静脉血测血AsAb。
1.2 主要试剂 包被用抗人C3、HPR-抗人C3d及沉淀剂等均由南京军区南京总医院临免科提供。
1.3 C3d参考品的制备 参照文献[1]介绍的方法进行。
1.4 ELISA检测C3d及C3含量 分别按文献[1]和文献[2]介绍的方法进行。根据测得的C3d及C3含量计算C3d/C3的比值。
, 百拇医药
1.5 ELISA法检测AsAb试剂盒 购自南京军区南京总医院。按说明书介绍的方法操作。
2 结果
2.1 42例不育男性，经检测AsAb阴性者26例，AsAb阳性者16例，阳性率38.1%。其中血清抗精子抗体阳性者9例，精浆抗精子抗体阳性者7例(有两例血清抗精子抗体同时为阳性)。8例生育男性血清和精浆AsAb均为阴性。
2.2 不育男性及生育男性精浆C3d、C3及C3d/C3测定结果见表1。
表1 不育男性及生育男性精浆C3d、C3及C3d/C3测定结果
生育组
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(n=8)
不育组
AsAb(-)n=26
AsAb(+)n=16
C3d
0.60±0.20
0.62±0.30
1.50±1.02
C3
10.0±4.10
7.25±2.60
11.28±5.20*
, 百拇医药
C3d/C3
0.06±0.02
0.08±0.03
0.15±0.05
AsAb阳性者与生育组间比较 *P>0.05，**P<0.012.3 以C3d大于0.8 mg/L为阳性，比较C3d阳性率与AsAb测定结果的关系，结果见表2。
表2 AsAb与C3d阳性检出率的关系
AsAb(+)
AsAb(-)
C3d增高
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81.3%(13/16)
19.2%(5/26)
C3d正常
18.7%(3/16)
80.8%(21/26)
χ2=8.73 P<0.01
2.4 精浆AsAb阳性的不育男性C3d测定结果(2.09±1.5 mg/L)，略高于血清AsAb阳性的不育男性C3d测定结果(1.05±0.42 mg/L)，但两者差异不显著(P>0.05)。
3 讨论
本文的检测结果表明:AsAb阳性的不育男性精浆C3d及C3d/C3的结果均较生育组显著增高(P<0.01),AsAb阴性的不育男性精浆C3d、C3及C3d/C3与生育组相比则无显著差异(P>0.05)。提示AsAb与精子膜固有成份及膜表面被覆成份的结合能导致补体的活化，使C3裂解加速，进而导致精子结构和功能的受损。
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3.2 文献[2]报告正常生育男性精浆中C3的含量为6.1±4.3 mg/L，不育男性为9.2±5.7 mg/L，本文的结果与之相近；精浆中C3的含量未见有报道。本文的检测结果显示：AsAb阴性的不育者精浆C3d与生育组甚为相近，而AsAb阳性的不育者精浆C3d则显著高于正常者，两组不育者C3d阳性检出率之间有显著差异(P<0.01)。在AsAb阳性的不育者中，C3d/C3的比值显著高于生育组也说明C3裂解速度增加，裂解产物增多。这进一步提示AsAb能活化补体，从而干扰精子的功能。
3.3 AsAb对生殖过程的影响已经得到充分的证实。有研究认为：只有射精精子表面精子抗体的附着，才是直接导致男性免疫性不育的免疫学因素[3]。因而精浆AsAb比血清AsAb对生殖的干扰影响更大。在本文的研究中，精浆AsAb阳性和血清AsAb阳性的不育男性间C3d含量虽无明显差异(这可能是我们观察的例数不够所致)，但前者的测定结果仍比后者为高。这也说明精浆内的AsAb能直接激活精浆内的补体系统，直接造成精子的损伤。
参考文献
1 童明庆，颜承靖，裴云，等.ELISA测定补体C3d片断.临床检验杂志，1996，14(1)∶31
2 张秀成主编.精子检测与分离.北京：北京科技出版社，1993.106
3 胡承阅.男性免疫性不育.国外医学计划生育分册，1996，15(1)∶13
(1998-03-09收稿，1998-08-25修回), http://www.100md.com
单位：靖江市人民医院检验科，江苏靖江214500
关键词：男性不育；抗精子抗体；C3d；C3
临床检验杂志990123 抗原抗体复合物及某些微生物等可激活补体系统，引起补体的活化。C3被C3转化酶裂解成C3a、C3b片断，后者进一步被裂解成C3c、C3f和C3dg，C3dg再被水解成C3d、C3g，因此C3d的含量可反映补体活化的程度。在男性不育患者中，抗精子抗体(AsAb)与精子相关抗原的结合也可导致补体的活化，使C3d含量增加。活化的补体与抗原-抗体复合物结合可引起精子结构和功能的改变，因而在免疫性不育的发病机制中起重要作用，因此测定精浆中C3d与C3的含量具有重要的临床价值。本文报告用ELISA检测精浆中的C3d及C3，并探讨了其与AsAb的关系，现报告如下：
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1 材料和方法
1.1 标本来源 生育男性8例，系妻子已生育一子女者；不育男性42例，均为结婚二年以上，性生活正常而妻子未受孕者。所有精浆标本均在室温自行液化后，于一小时内2 500 r/min，15 min分离上层精浆，置-20℃冰冻保存备用。同时抽取静脉血测血AsAb。
1.2 主要试剂 包被用抗人C3、HPR-抗人C3d及沉淀剂等均由南京军区南京总医院临免科提供。
1.3 C3d参考品的制备 参照文献[1]介绍的方法进行。
1.4 ELISA检测C3d及C3含量 分别按文献[1]和文献[2]介绍的方法进行。根据测得的C3d及C3含量计算C3d/C3的比值。
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1.5 ELISA法检测AsAb试剂盒 购自南京军区南京总医院。按说明书介绍的方法操作。
2 结果
2.1 42例不育男性，经检测AsAb阴性者26例，AsAb阳性者16例，阳性率38.1%。其中血清抗精子抗体阳性者9例，精浆抗精子抗体阳性者7例(有两例血清抗精子抗体同时为阳性)。8例生育男性血清和精浆AsAb均为阴性。
2.2 不育男性及生育男性精浆C3d、C3及C3d/C3测定结果见表1。
表1 不育男性及生育男性精浆C3d、C3及C3d/C3测定结果
生育组
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(n=8)
不育组
AsAb(-)n=26
AsAb(+)n=16
C3d
0.60±0.20
0.62±0.30
1.50±1.02
C3
10.0±4.10
7.25±2.60
11.28±5.20*
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C3d/C3
0.06±0.02
0.08±0.03
0.15±0.05
AsAb阳性者与生育组间比较 *P>0.05，**P<0.012.3 以C3d大于0.8 mg/L为阳性，比较C3d阳性率与AsAb测定结果的关系，结果见表2。
表2 AsAb与C3d阳性检出率的关系
AsAb(+)
AsAb(-)
C3d增高
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81.3%(13/16)
19.2%(5/26)
C3d正常
18.7%(3/16)
80.8%(21/26)
χ2=8.73 P<0.01
2.4 精浆AsAb阳性的不育男性C3d测定结果(2.09±1.5 mg/L)，略高于血清AsAb阳性的不育男性C3d测定结果(1.05±0.42 mg/L)，但两者差异不显著(P>0.05)。
3 讨论
本文的检测结果表明:AsAb阳性的不育男性精浆C3d及C3d/C3的结果均较生育组显著增高(P<0.01),AsAb阴性的不育男性精浆C3d、C3及C3d/C3与生育组相比则无显著差异(P>0.05)。提示AsAb与精子膜固有成份及膜表面被覆成份的结合能导致补体的活化，使C3裂解加速，进而导致精子结构和功能的受损。
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3.2 文献[2]报告正常生育男性精浆中C3的含量为6.1±4.3 mg/L，不育男性为9.2±5.7 mg/L，本文的结果与之相近；精浆中C3的含量未见有报道。本文的检测结果显示：AsAb阴性的不育者精浆C3d与生育组甚为相近，而AsAb阳性的不育者精浆C3d则显著高于正常者，两组不育者C3d阳性检出率之间有显著差异(P<0.01)。在AsAb阳性的不育者中，C3d/C3的比值显著高于生育组也说明C3裂解速度增加，裂解产物增多。这进一步提示AsAb能活化补体，从而干扰精子的功能。
3.3 AsAb对生殖过程的影响已经得到充分的证实。有研究认为：只有射精精子表面精子抗体的附着，才是直接导致男性免疫性不育的免疫学因素[3]。因而精浆AsAb比血清AsAb对生殖的干扰影响更大。在本文的研究中，精浆AsAb阳性和血清AsAb阳性的不育男性间C3d含量虽无明显差异(这可能是我们观察的例数不够所致)，但前者的测定结果仍比后者为高。这也说明精浆内的AsAb能直接激活精浆内的补体系统，直接造成精子的损伤。
参考文献
1 童明庆，颜承靖，裴云，等.ELISA测定补体C3d片断.临床检验杂志，1996，14(1)∶31
2 张秀成主编.精子检测与分离.北京：北京科技出版社，1993.106
3 胡承阅.男性免疫性不育.国外医学计划生育分册，1996，15(1)∶13
(1998-03-09收稿，1998-08-25修回), http://www.100md.com