核仁组成区嗜银染色的脱色技术
作者：郝冀洪 朱芸 史敏 张爱军
单位：郝冀洪 朱芸 史敏(河北医科大学第二医院血研室，石家庄050000)；张爱军(河南信阳卫校附院检验科)
关键词：白血病；骨髓；核仁组成区；嗜银染色
临床检验杂志990120 核仁组成区(NOR)嗜银染色对肿瘤诊断和预后判断有非常重要的参考价值。这种染色方法国内外文献报道较多[1]，但存在着嗜银染色后背景着色深及银沉淀问题。我们在采用Pawan[2]等的快速NOR嗜银染色法过程中，发现用H2O2冲洗嗜银染色的涂片能解决银沉淀及背景染色问题，经与未脱色的方法进行比较观察，证明这种方法确有核仁区着色清晰，且背景无颗粒沉着等优点。
1 材料与方法
1.1 标本来源 我院血研室确诊的急性白血病31例，其中ALL 12例，ANLL 19例。血片和骨髓片染色观察。
1.2 试剂 固定液95%乙醇，染色液A液(2.94 mol/L AgNO3溶液)：将5 g AgNO3溶于10 ml蒸馏水中，保存在棕色瓶中，存放于4℃。B液(2 g/dl明胶溶液)：0.2 g明胶溶于10 ml甲酸中，存放于4℃。脱色液：取3% H2O2 10 ml，加等量蒸馏水混匀，使用后弃掉。0.1 g/dl中性红复染液。
1.3 方法
1.3.1 白血病髓片或血片在95%乙醇中固定5 min，水洗，晾干。
1.3.2 将A、B液于临用前按2∶1混合后滴于玻片上覆盖血膜，避光30℃ 20 min，水洗晾干。
1.3.3 用脱色液冲洗15 s，流水冲洗，晾干。
1.3.4 用0.1 g/dl中性红复染20 min，水洗后晾干镜检。
2 结果
骨髓片中，白血病细胞核内嗜银颗粒物呈黑色。见图1。白血病细胞胞浆染成淡灰红色，细胞核染成褐色，Ag-NOR5呈黑色，位于细胞核内。背景清晰。
图1 白血病骨髓片核仁组成区嗜银染色(×1 000)
3 讨论
Ag-NOR染色，未经脱色的方法易造成银沉淀及背景染色深，影响观察。过氧化氢对过多的可溶性银颗粒有氧化作用，用H2O2可将非嗜银细胞上的银颗粒脱去，而嗜银细胞不受影响。用流水可将溶解在玻片上的银冲洗掉。这种方法简便可靠，优于原法，可在临床上推广使用。
参考文献
1 郝洪岭，郑师陵，梁晋金，等.白血病患者核仁组成区银染色的初步探讨.中华血液学杂志，1993，14(2)∶95
2 Pawan K,Dhar M R,Kumar T,et al.A rapid silver staining and destaining technique for the nuclealus organizer region.Biatechnic and Histochemistry,1995,70(6)∶302
(1998-04-07收稿), http://www.100md.com
单位：郝冀洪 朱芸 史敏(河北医科大学第二医院血研室，石家庄050000)；张爱军(河南信阳卫校附院检验科)
关键词：白血病；骨髓；核仁组成区；嗜银染色
临床检验杂志990120 核仁组成区(NOR)嗜银染色对肿瘤诊断和预后判断有非常重要的参考价值。这种染色方法国内外文献报道较多[1]，但存在着嗜银染色后背景着色深及银沉淀问题。我们在采用Pawan[2]等的快速NOR嗜银染色法过程中，发现用H2O2冲洗嗜银染色的涂片能解决银沉淀及背景染色问题，经与未脱色的方法进行比较观察，证明这种方法确有核仁区着色清晰，且背景无颗粒沉着等优点。
1 材料与方法
1.1 标本来源 我院血研室确诊的急性白血病31例，其中ALL 12例，ANLL 19例。血片和骨髓片染色观察。
1.2 试剂 固定液95%乙醇，染色液A液(2.94 mol/L AgNO3溶液)：将5 g AgNO3溶于10 ml蒸馏水中，保存在棕色瓶中，存放于4℃。B液(2 g/dl明胶溶液)：0.2 g明胶溶于10 ml甲酸中，存放于4℃。脱色液：取3% H2O2 10 ml，加等量蒸馏水混匀，使用后弃掉。0.1 g/dl中性红复染液。
1.3 方法
1.3.1 白血病髓片或血片在95%乙醇中固定5 min，水洗，晾干。
1.3.2 将A、B液于临用前按2∶1混合后滴于玻片上覆盖血膜，避光30℃ 20 min，水洗晾干。
1.3.3 用脱色液冲洗15 s，流水冲洗，晾干。
1.3.4 用0.1 g/dl中性红复染20 min，水洗后晾干镜检。
2 结果
骨髓片中，白血病细胞核内嗜银颗粒物呈黑色。见图1。白血病细胞胞浆染成淡灰红色，细胞核染成褐色，Ag-NOR5呈黑色，位于细胞核内。背景清晰。
图1 白血病骨髓片核仁组成区嗜银染色(×1 000)
3 讨论
Ag-NOR染色，未经脱色的方法易造成银沉淀及背景染色深，影响观察。过氧化氢对过多的可溶性银颗粒有氧化作用，用H2O2可将非嗜银细胞上的银颗粒脱去，而嗜银细胞不受影响。用流水可将溶解在玻片上的银冲洗掉。这种方法简便可靠，优于原法，可在临床上推广使用。
参考文献
1 郝洪岭，郑师陵，梁晋金，等.白血病患者核仁组成区银染色的初步探讨.中华血液学杂志，1993，14(2)∶95
2 Pawan K,Dhar M R,Kumar T,et al.A rapid silver staining and destaining technique for the nuclealus organizer region.Biatechnic and Histochemistry,1995,70(6)∶302
(1998-04-07收稿), http://www.100md.com