人精子顶体完整率的测定及其临床意义
作者：苏昀 周性明 陈甸英 张忠林
单位：南京铁道医学院附属医院泌尿外科
关键词：人精子 顶体 顶体完整率 顶体酶 精子活动率
江苏医药990209 摘要 对人精子顶体完整率进行测定并了解其与精液常规分析指标之间的关系，旨在寻求其是否能提供一种可靠的精子生育力参数。方法：用姬姆萨氏染色法将精液涂片后观察精子顶体完整率。结果：在精子顶体完整率与精子活动率、精子浓度之间存在正相关性。精子顶体完整率正常人明显高于不育男性。通过本实验认为测定精子顶体完整率能作为了解精子生育力的一种可靠指标，可为临床及男性学研究提供参考。
常规精液分析的方法有精子计数、精子正常形态比率。但是这些方法对全面了解精子生育力尚嫌不足。精子顶体酶参与精子受孕过程。精子顶体酶含量降低会引起精子生育力下降[1]。精子顶体的完整性能直接反映精子顶体酶含量的多少，因顶体不完整的精子顶体酶会漏出。鉴此我们测定了124例男性精液的精子顶体完整率(PIA)，研究它与精液常规分析指标之间的关系，并将正常男性与不育男性的PIA进行了比较。
, 百拇医药
材料与方法
一、精液收集
收集正常生育男性精液50份，不育男性精液74份，年龄25～40岁；精液以手淫法收集，禁欲3天以上。正常生育男性其配偶已生育或妊娠，精子计数40×106/ml以上，活动率大于60%。
二、精子PIA测定
1、精子染色：姬姆萨氏染色法。
2、染液配制：姬姆萨氏染料(上海新中化学厂)0.5g；甲醇(南京化学试剂厂)35ml。先将染料置于甘油中60℃水浴2小时，使其溶解，然后加入60℃预热的甲醇，混合后置棕色瓶内放置数天后用。
3、染色方法：液化精液涂片干燥后甲醇固定3～5分钟。配好的染色液用磷酸缓冲液稀释10～20倍。固定好的涂片用染液染5分钟；染好的涂片流水冲洗晾干，用油镜检查计数200个精子。根据顶体外形和损伤情况将精子顶体分为四种类型。
, 百拇医药
Ⅰ型：顶体完整，精子外型正常，着色均匀，顶体边缘整齐。
Ⅱ型：顶体轻微肿胀，质膜(顶体膜)疏松膨大。
Ⅲ型：顶体破坏，精子质膜严重膨胀破损，着色浅，边缘不整齐。
Ⅳ型：顶体全部脱落，精子核裸露。
Ⅰ、Ⅱ型视为顶体完整；Ⅲ、Ⅳ型视为顶体不完整。精子PIA计算如下。
结 果
一、精子PIA与精子浓度及活动率之间的关系
, 百拇医药 将所有标本的精子PIA测定的结果与其常规分析的精子浓度、活动率进行相关分析，发现精子PIA与浓度存在显著相关性(r＝0.7121，P<0.01)，与精子活动率存在显著相关性(r＝0.6382，P<0.01)。
二、将不育男性按精子浓度不同分组，分别比较它们的精子PIA，并与正常男性PIA比较，见表1。结果显示精子数在40×106组的精子PIA明显高于精子数少于15×106组(P<0.01)。正常生育组精子PIA和精子浓度与之相同组的PIA，比较有显著差异(P<0.05)。
表1 不同浓度精子PIA测定值(
±s) 精子计数/ml(×106)
标本数
, 百拇医药
精子PIA(%)
0.05～
25
47.23±0.80▲
15.00～
32
62.52±0.94
>40
17
82.41±0.82
40～140.00*
50
, http://www.100md.com
88.34±0.45
▲与其他组比较有显著的差异(P<0.01)；*正常生育组
不同精子活动率的PIA测定见表2。显示活动率>60%组的PIA明显高于<30%组(P<0.01)，与正常生育组比较活动率>60%组的PIA较低(P<0.05)。
表2 不同活动率精子的PIA测定值(±s) 精子活动率(%)
精子标本数
精子PIA(%)
10～
, http://www.100md.com
19
50.10±0.94▲
30～
32
64.52±0.87
>60
23
81.73±0.73
>60*
50
88.34±0.45
▲与其他组比较有显著的差异(P<0.01)；*正常生育组
, 百拇医药
讨 论
精子顶体在生育方面起着重要作用，通过特殊染色或电镜确定精子顶体的完整情况是判断精子生育力很有价值的一种方法[2]。在精子与卵子结合过程中，顶体中的顶体酶起着重要作用，顶体损坏的精子顶体酶就会漏出，影响精子对卵细胞卵丘的分解及对透明带的穿透。
我们的测定结果显示出精子PIA与精子浓度活动率有密切关系，精子浓度越高精子PIA值越高。少精症患者PIA低，这可能就是少精症患者不育的原因之一。精子活动率高PIA就高。精子PIA与精子活动率的关系说明精子细微形态的完整关系到精子活动力，这自然会影响到精子的生育力。精液常规分析正常的不育患者，精子PIA也比正常生育的男性PIA低，这很可能也是这些人不育的原因之一。但是在精液常规分析正常的不育男性中，我们也发现了一些精子PIA测值颇高者，与正常生育男性的PIA相同，这说明患者在PIA水平上有个体差异，同时又说明了男性不育原因的复杂性，尚待我们做更深入的研究。
, 百拇医药
精子顶体酶特别是透明质酸酶在精子中的含量与精子顶体形态的完整有明显的关系。正常精子形态反映了精子经睾丸正常成熟[3，4]。精子顶体形态异常被发现常常合并其他的形态异常，如小头精子、纤细精子、不规则精子头[5]。这说明精子活动能力与精子PIA密切相关，与本实验的结果相吻合。尽管精子PIA与精子常规分析的浓度、活动率有密切相关性，但单一指标并不能绝对预测精子的生育力，因此精子PIA的测定可以从另一方面提供一个了解精子生育力的方法，而这是精液常规分析所不能提供的。
参考文献
[1] Abdul Aziz M, et al. Fertil steril 1996；65：977.
[2] Health E, et al. Int J Androl 1985；82：101.
[3] Hunnicutt-GR, et al. Biol Repord 1996；50：1343.
[4] De Vries JWA, et al. Eur J cell Biot 1985；37：81.
[5] Schill WB. Hum Repord 1991；6：969.
(1997年12月20日收稿 1998年8月31日修回), 百拇医药
单位：南京铁道医学院附属医院泌尿外科
关键词：人精子 顶体 顶体完整率 顶体酶 精子活动率
江苏医药990209 摘要 对人精子顶体完整率进行测定并了解其与精液常规分析指标之间的关系，旨在寻求其是否能提供一种可靠的精子生育力参数。方法：用姬姆萨氏染色法将精液涂片后观察精子顶体完整率。结果：在精子顶体完整率与精子活动率、精子浓度之间存在正相关性。精子顶体完整率正常人明显高于不育男性。通过本实验认为测定精子顶体完整率能作为了解精子生育力的一种可靠指标，可为临床及男性学研究提供参考。
常规精液分析的方法有精子计数、精子正常形态比率。但是这些方法对全面了解精子生育力尚嫌不足。精子顶体酶参与精子受孕过程。精子顶体酶含量降低会引起精子生育力下降[1]。精子顶体的完整性能直接反映精子顶体酶含量的多少，因顶体不完整的精子顶体酶会漏出。鉴此我们测定了124例男性精液的精子顶体完整率(PIA)，研究它与精液常规分析指标之间的关系，并将正常男性与不育男性的PIA进行了比较。
, 百拇医药
材料与方法
一、精液收集
收集正常生育男性精液50份，不育男性精液74份，年龄25～40岁；精液以手淫法收集，禁欲3天以上。正常生育男性其配偶已生育或妊娠，精子计数40×106/ml以上，活动率大于60%。
二、精子PIA测定
1、精子染色：姬姆萨氏染色法。
2、染液配制：姬姆萨氏染料(上海新中化学厂)0.5g；甲醇(南京化学试剂厂)35ml。先将染料置于甘油中60℃水浴2小时，使其溶解，然后加入60℃预热的甲醇，混合后置棕色瓶内放置数天后用。
3、染色方法：液化精液涂片干燥后甲醇固定3～5分钟。配好的染色液用磷酸缓冲液稀释10～20倍。固定好的涂片用染液染5分钟；染好的涂片流水冲洗晾干，用油镜检查计数200个精子。根据顶体外形和损伤情况将精子顶体分为四种类型。
, 百拇医药
Ⅰ型：顶体完整，精子外型正常，着色均匀，顶体边缘整齐。
Ⅱ型：顶体轻微肿胀，质膜(顶体膜)疏松膨大。
Ⅲ型：顶体破坏，精子质膜严重膨胀破损，着色浅，边缘不整齐。
Ⅳ型：顶体全部脱落，精子核裸露。
Ⅰ、Ⅱ型视为顶体完整；Ⅲ、Ⅳ型视为顶体不完整。精子PIA计算如下。
结 果
一、精子PIA与精子浓度及活动率之间的关系
, 百拇医药 将所有标本的精子PIA测定的结果与其常规分析的精子浓度、活动率进行相关分析，发现精子PIA与浓度存在显著相关性(r＝0.7121，P<0.01)，与精子活动率存在显著相关性(r＝0.6382，P<0.01)。
二、将不育男性按精子浓度不同分组，分别比较它们的精子PIA，并与正常男性PIA比较，见表1。结果显示精子数在40×106组的精子PIA明显高于精子数少于15×106组(P<0.01)。正常生育组精子PIA和精子浓度与之相同组的PIA，比较有显著差异(P<0.05)。
表1 不同浓度精子PIA测定值(
±s) 精子计数/ml(×106)标本数
, 百拇医药
精子PIA(%)
0.05～
25
47.23±0.80▲
15.00～
32
62.52±0.94
>40
17
82.41±0.82
40～140.00*
50
, http://www.100md.com
88.34±0.45
▲与其他组比较有显著的差异(P<0.01)；*正常生育组
不同精子活动率的PIA测定见表2。显示活动率>60%组的PIA明显高于<30%组(P<0.01)，与正常生育组比较活动率>60%组的PIA较低(P<0.05)。
表2 不同活动率精子的PIA测定值(
±s) 精子活动率(%)精子标本数
精子PIA(%)
10～
, http://www.100md.com
19
50.10±0.94▲
30～
32
64.52±0.87
>60
23
81.73±0.73
>60*
50
88.34±0.45
▲与其他组比较有显著的差异(P<0.01)；*正常生育组
, 百拇医药
讨 论
精子顶体在生育方面起着重要作用，通过特殊染色或电镜确定精子顶体的完整情况是判断精子生育力很有价值的一种方法[2]。在精子与卵子结合过程中，顶体中的顶体酶起着重要作用，顶体损坏的精子顶体酶就会漏出，影响精子对卵细胞卵丘的分解及对透明带的穿透。
我们的测定结果显示出精子PIA与精子浓度活动率有密切关系，精子浓度越高精子PIA值越高。少精症患者PIA低，这可能就是少精症患者不育的原因之一。精子活动率高PIA就高。精子PIA与精子活动率的关系说明精子细微形态的完整关系到精子活动力，这自然会影响到精子的生育力。精液常规分析正常的不育患者，精子PIA也比正常生育的男性PIA低，这很可能也是这些人不育的原因之一。但是在精液常规分析正常的不育男性中，我们也发现了一些精子PIA测值颇高者，与正常生育男性的PIA相同，这说明患者在PIA水平上有个体差异，同时又说明了男性不育原因的复杂性，尚待我们做更深入的研究。
, 百拇医药
精子顶体酶特别是透明质酸酶在精子中的含量与精子顶体形态的完整有明显的关系。正常精子形态反映了精子经睾丸正常成熟[3，4]。精子顶体形态异常被发现常常合并其他的形态异常，如小头精子、纤细精子、不规则精子头[5]。这说明精子活动能力与精子PIA密切相关，与本实验的结果相吻合。尽管精子PIA与精子常规分析的浓度、活动率有密切相关性，但单一指标并不能绝对预测精子的生育力，因此精子PIA的测定可以从另一方面提供一个了解精子生育力的方法，而这是精液常规分析所不能提供的。
参考文献
[1] Abdul Aziz M, et al. Fertil steril 1996；65：977.
[2] Health E, et al. Int J Androl 1985；82：101.
[3] Hunnicutt-GR, et al. Biol Repord 1996；50：1343.
[4] De Vries JWA, et al. Eur J cell Biot 1985；37：81.
[5] Schill WB. Hum Repord 1991；6：969.
(1997年12月20日收稿 1998年8月31日修回), 百拇医药